Dendrimer-tesaglitazar konjugat izaziva fenotipski pomak mikroglije i pojačava -amiloidnu fagocitozu† 2. dio

In vitro biološki testovi

Ćelijska kultura. BV2 mišja mikroglijalna ćelijska linija je dobijena iz Dječije bolnice u Michiganu.

Poslednjih godina naučnici su otkrili da je ćelijska kultura usko povezana sa ljudskim pamćenjem. Istraživanja su pokazala da se kroz proučavanje ćelijske kulture mogu otkriti molekularni mehanizmi u procesu pamćenja i učenja, čime se poboljšavaju ljudske kognitivne sposobnosti i pamćenje.

Ćelijska kultura se odnosi na proces stavljanja bioloških ćelija u medijum kulture koji sadrži esencijalne nutrijente za rast i reprodukciju u uslovima in vitro. Ćelije su osnovne jedinice života, a ćelijska kultura pruža naučnicima platformu za proučavanje ponašanja ćelija i životnih aktivnosti. Kroz proučavanje ćelija, naučnici su otkrili mnogo informacija o rastu neurona i sinaptičkim vezama. Ova otkrića ne samo da mogu pomoći ljudima da bolje razumiju kako mozak funkcionira, već također mogu pomoći u razvoju novih tretmana i lijekova.

Istraživanja posljednjih godina pokazala su da je ćelijska kultura također usko povezana s ljudskim pamćenjem. Naučnici su otkrili da formiranje i održavanje ljudske memorije zahtijeva puno molekularne regulacije i isporuke signala. Ovi mehanizmi isporuke i regulacije signala imaju mnogo sličnosti sa mehanizmima u ćelijskoj kulturi. Proučavajući mehanizme isporuke i regulacije signala u ćelijskoj kulturi, naučnici mogu bolje razumjeti ljudsku memoriju i mehanizme učenja.

Osim toga, neke studije su također pokazale da ćelijska kultura može poboljšati ljudsko pamćenje i sposobnost učenja na određene načine. Na primjer, korištenjem metode koja se zove "električna stimulacija", aktivnost stanica i veza između neurona može se stimulirati, čime se poboljšavaju ljudske kognitivne sposobnosti i učinci. Iako je ova metoda još uvijek u fazi laboratorijskog istraživanja, očekuje se da će u budućnosti postati nova metoda kognitivnog treninga.

Ukratko, postoji bliska veza između ćelijske kulture i ljudskog pamćenja. Kroz proučavanje ćelija, možemo bolje razumjeti ljudski kognitivni mehanizam i mehanizam pamćenja te također pomoći u razvoju novih metoda liječenja i metoda kognitivnog treninga. Radujmo se doprinosu tehnologije ćelijske kulture čovječanstvu u budućnosti! Vidi se da moramo poboljšati pamćenje, a Cistanche može značajno poboljšati pamćenje jer Cistanche djeluje antioksidativno, protuupalno i protiv starenja, što može pomoći u smanjenju oksidacije i upalnih reakcija u mozgu, čime se štiti zdravlje nervni sistem. Osim toga, Cistanche također može promovirati rast i popravak nervnih ćelija, čime se poboljšava povezanost i funkcija neuronskih mreža. Ovi efekti mogu pomoći u poboljšanju pamćenja, sposobnosti učenja i brzine razmišljanja, a također mogu spriječiti pojavu kognitivne disfunkcije i neurodegenerativnih bolesti.

Kliknite znati suplemente za jačanje pamćenja

BV2 ćelije su kultivisane u Dulbecco-ovom modifikovanom EaglesMedium (DMEM) mediju sa 10% toplotno inaktiviranog fetalnog goveđeg seruma (HI FBS) i 1% penicilina/streptomicina (P/S) na 37 stepeni i 5% CO2.

Kada su ćelije dostigle konfluentnost u tikvici za kultivaciju, ćelije su prebačene u novu bocu koristeći 0.05% tripsin-etilendiamin tetra-sirćetnu kiselinu (EDTA). Za eksperimente, BV2 ćelije su zasijane u DMEM sa 5% HIFBS i 1% P/S. 24-48 sati kasnije, ćelije su stimulirane sa 100 ng ml-1 (300 EU ml-1) LPS-a u trajanju od 3 sata kako bi se omogućilo ćelijama da uđu u proinflamatorni (M1) fenotip kako bi simulirali neuroinflamatorno okruženje prisutno u mnogim neurološkim bolestima.

Ćelije su zatim zajedno tretirane sa LPS i bilo slobodnom Tesa ili D-Tesom u različitim koncentracijama za 48 ruku, a zatim su supernatant i ćelije sakupljene za obradu. Ćelije koje nikada nisu tretirane LPS-om (bez LPS-a) i ćelije koje su cijelo vrijeme tretirane samo LPS-om (samo LPS) služile su kao kontrolne grupe. Slobodne Tesa i D-Tesa osnovne otopine su sterilizirane korištenjem poli(eter sulfona) 0.2 µm filtera.

D-Tesa je bila rastvorljiva u ćelijskom mediju. Tesa je solubilizirana korištenjem dimetilsulfoksida (DMSO) u konačnoj koncentraciji manjoj od 0.1% (v/v). Citotoksičnost, analiza dušikovog oksida i TNF-ELISA. Za test citotoksičnosti, ćelije su tretirane kao što je gore opisano u 96-ploči sa jažicom, a zatim je citotoksičnost slobodne Tesa i D-Tese procijenjena MTT testom prema uputstvima proizvođača.

Za analizu azotnog oksida, ćelije su tretirane kao što je gore opisano u pločama 12-jažica, a zatim su sakupljeni supernatanti iz tretiranih ćelija i odmah su kvantitativni nivoi azotnog oksida slijedeći protokol proizvođača za Griessov reagens.

Za TNF-ELISA, ćelije su tretirane kao što je gore opisano u pločama 12-jažica, a zatim su supernatanti iz tretiranih ćelija sakupljeni i pohranjeni na -80 stepeni dok nisu bili spremni za dalju obradu.

Zatim su uzorci odmrznuti na ledu, a TNF-ELISA je rađena prema protokolu proizvođača. Za ove studije, i D-Tesa i slobodna Tesa su sonicirani i vorteksirani dok oboje nisu bili potpuno rastvorljivi. Da bi se slobodna Tesa rastvorila, prvo je rastvorena u DMSO prije razrjeđivanja, gdje je konačna koncentracija DMSO bila ispod 0.1% (v/v) za sve slobodne Tesa uzorke.

Budući da je D-Tesa bio rastvorljiv u podlozi za ćelijsku kulturu, DMSO nije dodat tim uzorcima. Za allin vitro studije, ekvivalentna količina slobodnog ili konjugiranog lijeka primijenjena je na ćelije u slobodnim Tesa i D-Tesa grupama.

Kvantitativni PCR u realnom vremenu (qRT-PCR). Ćelije su tretirane kao što je gore opisano u pločama 12-jažica, a nakon sakupljanja supernatanta, ćelije su sakupljene u Invitrogen™ TRIzol™ reagensu (od Fisher Scientific) i RNA je ekstrahirana slijedeći protokol proizvođača. Koncentracija i čistoća rezultirajuće RNK analizirani su korištenjem Nanodrop-a.

Ekvivalentne količine RNK iz svakog uzorka su konvertovane u cDNK slijedeći protokol proizvođača za High CapacitycDNA komplet za reverznu transkripciju (od Applied Biosystems by Thermo Fisher Scientific).

Rezultirajuća cDNK je korištena zaqRT-PCR analizu korištenjem FAST-SYBR zelenog reagensa i slijedeći protokol proizvođača. Vrijednosti Ct su izračunate na mašini i podaci su analizirani korištenjem 2−ΔΔCt metode.

Za svaki različiti marker, vrijednost ΔΔCt je izračunata oduzimanjem ΔCt za grupu bez LPS od ΔCt za svaki uzorak. ΔCt vrijednost je bila Ct vrijednost za gen od interesa minus Ct za GAPDH za svaki dati uzorak.

Jednom kada je 2−ΔΔCt izračunat za sve grupe, onda su sve one normalizovane u grupu bez LPS, dajući na taj način grupi bez LPS relativni nivo ekspresije od 1.0 za sve markere. Prednje i nazad sekvence prajmera korišćene zaqRT -PCR su prikazani u donjoj tabeli. Sve sekvence su napisane od 5′→3′.

Pored toga, komercijalno dostupni temeljini temelji kupljeni su iz Biorada za INOS / NOS2 (QMMUCID0023087), TLR4 (QMMUCID0023548), CD206 / MRC1 (QMMUCID0012670), TGF - 1 (QMMUCID0017320), IL -10 (QMMUCID0015452), Socs1 (qmmuced0024846), CD36 (qmmucid0014852), Ide(qmmuced0049796), MMP9 (qmmucid0021296), CCL1(qmmuced0038249), TLR8 (qmmuced0039837),} CD{6mmuced0039837, CD{6mmu6cid 0006404) i PPAR (qmmucid0018821). Test fagocitoze.

Utjecaj slobodne Tesa i D-Tese na fagocitozu -amiloida određen je korištenjem prethodno objavljene metode.47 Ukratko, HiLyte™ brašno 488-obilježeno -amiloid1–42 (iz Anaspec Inc.) je otopljeno u DMSO (konačna koncentracija DMSO ispod 0.5% (v/v)) i razrijeđen na 5 µg ml-1 u PBS.

Nakon tretiranja ćelija sa Tesa i D-Tesaom prema gore navedenoj šemi tretmana, rastvor -amiloida je primenjen na ćelije tokom 2 sata. Zatim su ćelije tri puta isprane Hankovom izbalansiranom otopinom soli sa dvovalentnim kationima (kalcijum i magnezijum), uklonjene iz jažica upotrebom tripsina i resuspendirane u FACS puferu (iz Invitrogena).

Uzorci su pohranjeni na ledu i odmah su pušteni na protočnu citometriju Sony Cell Sorter SH800, a podaci su analizirani s pripadajućim softverom.

Gejt je postavljen korišćenjem ćelija koje nisu tretirane fluorescentnim -amiloidom, a prikazani rezultati su procenat ćelija iz svake grupe koje su pokazale fluorescenciju iznad pozadinske fluorescencije.

Srednji fluorescentni intenzitet (MFA) HiLyte™ 488-obilježenog -amiloida je također prijavljen za svaku grupu. Ovaj test je izveden u duplikatu. Statistika. Svi prikazani podaci su rezultat tri odvojena eksperimenta, od kojih je svaki izveden u tri primjerka osim ako nije drugačije naznačeno. Za izvođenje statistike korišteni su GraphPad Prism 5 i Microsoft Excel.

Urađeni su dvostrani, upareni Studentovi t-testovi, sa Bonferronijevom korekcijom. Grubbsov test je korišten za određivanje odstupanja. GraphPad Prism 5 za Windows je korišten za iscrtavanje podataka (San Diego, CA). Prikazani podaci su prosjek + SEM.

Rezultati i diskusija

Sinteza i karakterizacija D-Tese

Da bi se omogućila ciljana, intracelularna isporuka aktiviranim mikroglijalnim stanicama u mozgu, Tesa je kovalentno konjugirana na površini G4-PAMAM-OH s cijepivim esterskim vezama između lijeka i dendrimer-linkera (slika 1).

U prvom koraku, Tesa (1) je reagovala sa tetrametilen glikol azidom (TEG-azidom)(2) da bi se proizvela Tesa-TEG-azid (3), koji ima estarsku vezu između leka i linkera (slika 1A).

HPLC jedinjenja (3) pokazala je vreme zadržavanja od 13,4 minuta sa čistoćom većom od 99% (slika S1B†). Spektar mase (3) pokazao je vrh od 610,13 [M + 1]+ koji odgovara molekulskoj težini Tesa-TEG-azida, što dodatno potvrđuje formiranje proizvoda (slika S2†). Odvojeno, G4-PAMAM-OH dendrimer (4) je reagovao sa 5-heksinoinskom kiselinom koristeći reakciju esterifikacije da bi se dobio D-YNE (5) (slika 1B).

Konačno, Tesa-TEG-azid (3) i D-YNE (5) reagovali su visoko efikasnom reakcijom klika bakra-katalizedazid-alkin cikloadicije (CuAAC) da bi se dobio D-Tesa (6) (slika 1B).48 1H NMR potvrdili uspješnu sintezu svih međuproizvoda i konačnog proizvoda; D-Tesa (6) je sadržavao karakteristične pikove protona dendrimera i linkera koji demonstriraju uspješnu sintezu D-Tesa (slika 2A).

NMR konačnog D-Tesa konjugata je otkrio da je u prosjeku deset molekula Tesa vezano za svaki dendrimer. HPLC je potvrdio uspješnu kovalentnu konjugaciju, pošto je D-Tesa pokazao pomak i od D-YNE i od TesaTEG-azida (sl. 2B i S1†).

Tesa ima lošu rastvorljivost u vodi, koja se procjenjuje na 0.0035 mg mL−1.49 Konjugacija Tesa na hidroksil dendrimeru je poboljšala njegovu rastvorljivost u vodi nekoliko redova veličine u odnosu na ovu procjenu. D-Tesa je bila rastvorljivost u vodi na 22 mg mL-1, a pošto Tesa čini ∼19% mase D-Tese, 4,2 mg ml-1 ekvivalenta Tesa je rastvoreno (Slika 3A).

Povećana rastvorljivost koju daje dendrimer povećava lakoću formulacije i uklanja potrebu za potencijalno toksičnim ekscipijentima.50 Sve ove prednosti su dodatak superiornoj sposobnosti dendrimera da isporučuje besplatne lijekove preko BBB-a do mikroglije in vivo, i potencijalno smanjuje doza potrebna za postizanje terapeutskog efekta.18–28 Konačno, D-Tesa je imala prosječnu veličinu od 7,75 ± 0.29 nm (slika S3†), i zeta-potencijal od 2.86 ± 0,38 mV (N=5 i N=3 mjerenje, respektivno).

Oslobađanje droge

Dizajnirali smo D-Tesu da oslobađa Tesa intracelularno unutar okruženja niske pH vrijednosti i visoke koncentracije esteraze u endosomima/lizozomima aktivirane mikroglije. Ranije smo objavili da PAMAM dendrimeri uglavnom ulaze u ćelije putem endocitoze fluidne faze, a vezikule koje sadrže konjugate se transformišu u lizozome.51

Inkubirali smo D-Tesu na 37 stepeni u puferu natrijum citrata (pH 5,5) u prisustvu esteraza kako bi oponašali uslove lizosoma, kao što je prethodno urađeno.52–54 Takođe smo istraživali oslobađanje u uslovima koji oponašaju uslove plazme (fosfatni pufer fiziološki rastvor [PBS ] pufer, pH 7,4).

U uslovima plazme, samo oko 1,5% Tesa se oslobađa nakon 48 sati, a manje od 20% Tesa se oslobađa do 25. dana što ukazuje na stabilnost konjugata u plazmi (slika 3B).

Pod lizozomalnim uslovima, oko 60% Tesa se oslobađa iz D-Tese u prvih 48 sati, a u roku od 19 dana oslobađa se skoro 100% Tesa. Ovi rezultati pokazuju da D-Tesa osigurava produženo, pokrenuto oslobađanje slobodnog lijeka tokom prve dvije sedmice inkubiranih u fiziološki relevantnim, lizozomalnim uvjetima.

Osim toga, značajno je minimalno oslobađanje Tesa u simuliranim uslovima plazme (pH 7,4 grupa) tokom prvih 48 sati, budući da je ovo tipično vrijeme cirkulacije G4-PAMAM-OH prije uklanjanja bubrega, minimalni Tesa će vjerovatno biti oslobođen iz konjugati prije nego stignu do mikroglije.24

D-Tesa je smanjio ekspresiju M1 markera i povećao M2 markere

Da bismo procijenili sposobnost D-Tese da indukuje promjenu fenotipa M1 u M2, procijenili smo sposobnost D-Tese da promijeni ekspresiju M1 i M2 markera in vitro koristeći mišju mikroglijalnu ćelijsku liniju (BV2).

BV2 ćelije su stvorene ovekovečenjem mišjih mikroglijalnih ćelija i pokazale su se kao pogodna alternativa primarnim ćelijama mikroglije za proučavanje inflamatornog odgovora mikroglije.55,56 U našim eksperimentima, da bismo oponašali neuroinflamatorno okruženje prisutno u višestrukim neurološkim bolestima, mikrogliju smo prethodno tretirali sa 100 ng ml-1 (300 endotoksičnih jedinica (EU) po ml) LPS tokom 3 sata.

Zatim smo zajedno tretirali ćelije sa LPS-om i slobodnom Tesu ili D-Tesom tokom 48 sati, a zatim prikupili uzorke. Tretirali smo ćelije u koncentracijama od 1,5, 15 i 150 µM slobodnih Tesa ili D-Tesa, na bazi ekvivalentnog lijeka.

MTT test je pokazao da slobodni Tesaor D-Tesa u ovim koncentracijama nije uzrokovao citotoksičnost (Slika S4†). Urađena je inicijalna studija određivanja doze sa Tesa i D-Tesom kako bi se odredila najefikasnija doza Tesa i D-Tese.

Tretman sa 1,5 i 15 µM slobodnim Tesa i D-Tesadid ne mijenja sekreciju dušikovog oksida ili TNF-a, kao što je utvrđeno Griessovim reagensom i TNF-ELISA-om, respektivno (Slika S5†). Na osnovu ovih rezultata, nismo analizirali ove niže koncentracije u našim qRT-PCR testovima.

U mnogim neurodegenerativnim bolestima, jedna od glavnih neurotoksičnih funkcija proinflamatorne, M1 mikroglije je njihovo izlučivanje reaktivnih vrsta kiseonika (npr. dušikovog oksida) koje direktno ubijaju neurone.57,58 Nakon toga, pretpostavljeno je da bi jedna od potencijalnih terapijskih strategija bila smanjenje ovog izlučivanja ovih molekula.

Procijenili smo D-Tesinu sposobnost da postigne ovaj efekat. Nakon LPS stimulacije, D-Tesa je smanjio nivoe mRNA izlučenog dušikovog oksida i inducibilne sintaze dušikovog oksida (iNOS) 3.7- puta (p < 0.0001) i 2- puta (p {{ 7}}.011), respektivno, u poređenju sa ćelijama tretiranim samo sa LPS (samo LPS) (sl. 4A i B).

S druge strane, slobodna Tesa je umjerenije smanjila izlučeni dušikov oksid (1.4-put, p=0.004) i nije dovela do značajnog smanjenja ekspresije iNOS mRNA (sl. 4A i B ).

D-Tesa je bio mnogo efikasniji od slobodnog Tesaina u suzbijanju lučenja azotnog oksida. Zatim, ovisno o tome da li su mikroglija u fenotipu M1 ili M2, mikroglija pojačava regulaciju ili iNOS ili arginaze 1 (Arg1) kako bi metabolizirala L-arginin kako bi proizvela dušikov oksid za njihov odgovor ubijanja patogena M1, orornitin i ureu za odgovor M2 zacjeljivanja rana, respektivno. 59

U skladu sa smanjenom regulacijom iNOS-a, D-Tesa je povećao nivoe Arg1 mRNA 2- puta (p=0.011) u poređenju sa kontrolom samo LPS, dok slobodna Tesa nije značajno povećala ekspresiju (p=0 .40) (slika 4C).

D-Tesa, iu manjoj mjeri slobodna Tesa, prebacili su mikrogliju s oslobađanja citotoksičnog azotoksida na metabolizam L-arginina za zacjeljivanje rana, što ima implikacije na smanjenje i potencijalno preokretanje neurotoksičnosti uzrokovane mikrogijom u neurodegeneraciji.5–7,10

Smanjenje nivoa iNOS-a i izlučenog dušikovog oksida sa tretmanom D-Tesa je rezultat prethodnog rada koji je pokazao da prirodni ligand PPAR-a (15-deoksi-Δ12,14-prostaglandin J2) smanjuje ekspresiju i izlučivanje iNOS-a i dušikovog oksida u LPS tretiranom primarna mikroglija.60

IL-10, IL-4 i TGF- 1 su svi citokini koje luči alternativno aktivirana M2 mikroglija koja može inducirati neuroprotektivno, protuupalno okruženje u mozgu.58,61,62Prema na ovom kraju, D-Tesa je povećao ekspresiju IL-105.5- puta (p=0.011) i IL-4 8.2- puta (p { {15}}.013) u poređenju sa kontrolom samo za LPS (sl. 4D i E).

Besplatna Tesa nije značajno povećala ni IL-10 ni IL-4 nivoe, iako su prosjeci bili 1.7-put (p=0.066) i 2.{{7} }put (p=0.11) veći, respektivno, za mikrogliju tretiranu Tesa u poređenju sa kontrolama koje sadrže samo LPS (sl. 4D i E). Dodatno, D-Tesa je povećao ekspresiju TGF- 1 2.3- puta (p=0.015), a slobodna Tesa nije značajno promijenila ekspresiju (slika 4F).

Dakle, D-Tesa inducira lučenje protuupalnih citokina nakon LPS tretmana mikroglije, što može ublažiti neurotoksično, proinflamatorno okruženje prisutno u neurodegenerativnim bolestima.5–7,10

Ekspresija markera podtipova M2- izazvana D-Tesom

CD206, Ccl1 i TLR8 su specifični markeri za podtipove mikroglije M2a, M2b i M2c, respektivno.58 D-Tesa pojačano regulira CD206 ekspresija 4.{10 }}fold (p < 0.001), Ccl1 3.5-fold (p < 0.005), i TLR8 5-fold (p < 0.01), dok slobodna Tesa nije značajno povećala ekspresiju bilo koji od ova tri markera (sl. 5A–C).

Ovi podaci pokazuju da mikroglija tretirana D-Tesom pokazuje značajnu regulaciju markera sva tri M2 podtipa, što se slaže sa shvatanjem da je fenotip mikroglije plastičan, a ne binarni.63–65

M1/M2 nomenklatura previše pojednostavljuje složenost da mikroglija može postojati u spektru aktivacijskih stanja; duž ovog kontinuuma, karakterizirana su tri različita M2 fenotipa (M2a, M2b i M2c), a D-Tesa inducira ekspresiju markera u skladu sa svakim od ovih stanja.58,61,63,66,67 M2a mikroglije su uključene u povećanu fagocitozu patogena proteini tako što regulišu receptore hvatača, popravku tkiva i protuupalno djelovanje.

M2b mikroglija je poput M1 mikroglije po tome što izražava IL-1 , TNF- i IL-6; međutim, M2b se razlikuje od M1 mikroglije po tome što eksprimiraju IL-10 na visokim nivoima i smanjuju ekspresiju iNOS-a. M2b makrofagi i mikroglija stimuliraju Th2 T-ćelije, što ukazuje na jednu od uloga M2b u izazivanju protuupalnog odgovora.

M2cmicroglia je uključena u zacjeljivanje rana, remodeliranje tkiva, sekvestraciju željeza i aktivaciju STAT3 koja smanjuje proinflamatornu signalizaciju.58,61,63,66PPAR aktivnost Tesa-e stimulira petlju koja rezultira povećanom ekspresijom PPAR-a i njegovog upstream signalnog proteina (STAT6), koji su oba M2a markera. 58D-Tesa je povećao ekspresiju PPAR 2.3-put (p=0.0036) i STAT6 3.4- puta (p < 0,001), dok je slobodna Tesa povećala STAT6 1.8- puta (p=0.011) bez značajnog povećanja ekspresije PPAR (1.58- puta povećanje, p=0.17) (sl. 5D i E).

Povećana ekspresija STAT6 i PPAR rezultira proizvodnjom antiinflamatornih gena i inhibicijom proinflamatornih signala inhibicijom aktivnosti NF-κB. Budući da se mikroglija M2a može inducirati tretiranjem mikroglije sa IL-4, koji signalizira preko STAT6 i PPAR, regulacija ova dva nizvodna signalna proteina može rezultirati polarizacijom M2a naprijed.68

U našim testovima, aktivacija LPS-a je povećala nivoe IL-6, TNF- i IL-1, a tretman sa D-Tesom dodatno je pojačao ekspresiju ovih citokina (sl. S6A–D†), što je vjerovatno zbog D-Tese koja indukuje fenotip M2b (slika 5B).

Slobodni Tesa je povećao ekspresiju IL-6 i nije značajno promijenio ekspresiju TNF- i IL-1 (sl. S6A–D†). Dok ove citokine luči M1 mikroglija, M2b mikroglija takođe ekspresuje ove citokine.58,61 CD86 je marker i M1 i M2b mikroglije, i povećava se tretmanom D-Tesa (Slika S6E†).

Dodatno, supresor citokinske signalizacije (SOCS) je porodica intracelularnih proteina koji regulišu fenotipsku polarizaciju mikroglije supresijom višestrukih signalnih puteva aktiviranih citokinima.69 SOCS1 je jedan član ove porodice i pokazalo se da inhibira LPS/TLR4 posredovano NF-κB i JAK2 signalizacijom, čime se smanjuje količina TNF-, IL-1 i IL-6 koju oslobađa M1 mikroglija kroz LPS/TLR4 put.

D-Tesa pojačava ekspresiju SOCS1 u poređenju sa kontrolom samo LPS (slika S6F†), sugerirajući da povećanje IL-6, TNF- i IL-1 koje pokazuje D-Tesac može biti posljedica indukcije M2b fenotip, a ne putem poboljšanja LPS/TLR4, M{10}}induciranja fenotipa.

Štaviše, LPS signali preko TLR4 i da bi se spriječila prekomjerna ćelijska aktivacija, mikroglija posjeduje mehanizam negativne povratne sprege pri čemu aktivacija TLR4 dovodi do smanjene ekspresije TLR4.70

Tretman sa besplatnom Tesom i D-Tesom povećao je nivoe TLR4 3.6-put (p < 0.001) i 3.7- puta (p < 0,001), respektivno (Slika 5F), što sugerira da su Tesa i D-Tesa promijenili tipičan LPS/TRL4 signalni put negativne povratne sprege.

For more information:1950477648nn@gmail.com