Kurkumin ublažava starenje mezenhimalnih matičnih ćelija pseće koštane srži tokom in vitro ekspanzije 2. deo

Molimo kontaktirajteoscar.xiao@wecistanche.comza više informacija

2.5.Autofagija Inovoloes u ispoljavanju zaštitnog efekta Cura u cBMSC starenju

Da bi se istražio efekat autofagije izazvane Curom na starenje cBMSC, nivo autofagije je moduliran korištenjem RAP(200 nM) ili 3-MA(5 mM).3-MA ispoljava značajno inhibitorno djelovanje. na autofagičnu aktivnost, koja se manifestuje značajnom smanjenom regulacijom ekspresije mRNA proteina 1 lakog lanca 3 (LC3) povezanog s mikrotubulama, gena povezanog s autofagijom (ATG)7, ATG12 i unc51-poput kinaze koja aktivira autofagiju{ {14}}(ULK1); smanjeni odnos ekspresije proteina 1 lakog lanca 3 tipa Ⅱ/I (LC3-I/I) povezanog sa mikrotubulama; i povećana ekspresija p62 u poređenju sa kontrolnom grupom (Slika 5A, B). Shodno tome, u poređenju sa Cur grupom, uočeno je smanjenje autofagne aktivnosti u grupi 3-MA plus Cur (Slika 5A, B). Nasuprot tome, povećanje autofagne aktivnosti uočeno je u RAP grupi, što je dokazano povećanom ekspresijom mRNA LC3, ATG12 i ATG7; povećana konverzija LC3-I u LC3-II; i degradaciju p62 (Slika 5A, B).

Prvo, sistematski je istraživana autofagna aktivnost. Formiranje autofagnih vakuola (također nazvanih autofagozomi) procijenjeno je morfološkim promatranjem, a rezultati su pokazali da je u Cur grupi i RAP grupi bilo više autofagnih vakuola i LC3 tačaka u odnosu na kontrolnu grupu, dok je smanjen broj autofagnih vakuola i manje LC3 tačaka je uočeno u grupama 3-MA i 3-MA plus Cur (Slika 5C, E). Osim toga, LysoTracker bojenje je pokazalo da je lizozomska acidifikacija pojačana RAP i Cur u cBMSC i smanjena u grupe 3-MA i 3-MA plus Cur (Slika 5D). Rezultati pokazuju da Cur i RAP imaju sličan pozitivan efekat na aktivaciju autofagije i da je autofagna aktivnost potisnuta 3-MA.cistanche veličina penisa,Međutim, inhibicijski efekti 3-MA na autofagiju mogu se djelimično spasiti upotrebom Cur.

Molimo kliknite ovdje da saznate više

Da bismo potvrdili da li autofagija sudjeluje u regulaciji CB MSc starenja, dodatno smo ispitali fenotipove povezane sa starenjem nakon promicanja ili suzbijanja autofagije putem farmakološkog tretmana. Rezultati su pokazali da je smanjen broj SA- -gal-pozitivnih ćelija prisutan u Cur i RAP grupama, dok je povećan broj SA- -gal-pozitivnih ćelija uočen u {{5} }MA grupa u poređenju sa kontrolnom grupom. Važno je napomenuti da je broj SA- -gal-pozitivnih ćelija značajno povećan u 3-MA plus Cur grupi u poređenju sa Cur grupom (slika). Rezultati RT-qPCR analize su pokazali da tretman sa RAP i Cur povećava nivo ekspresije SOX-2 i Nanog i smanjuje nivo ekspresije IL-6, TNF-a, p21 i p16 u poređenju sa kontrolnom grupom. Međutim, inhibicija autofagije od strane 3-MA pojačala je ekspresiju p16, p21, TNF- i IL-6 (Slika 6C-E). Nadalje, u poređenju sa kontrolnom grupom, efikasnost formiranja kolonija cBMSC je povećana u Cur i RAP grupama, dok su broj i veličina CFU-F značajno smanjeni u 3-MA grupi. Dodatno, pokazalo se da se pojačani efekat Cura na broj cBMSC-a koji formiraju kolonije može ukinuti predkondicioniranjem sa 3-MA (Slika 6B).cistanche prahOvi dokazi pokazuju da RAP i Cur mogu poboljšati cBMSC starenje, dok 3-MA pogoršava cBMSC starenje i umanjuje korisne efekte Cura.

Uzeti zajedno, ovi rezultati sugeriraju da inhibicija autofagije sa 3-MA ubrzava starenje cBMSC, dok aktivacija autofagije sa Cur i RAP ublažava cBMSC starenje (slika 6F). Primjetno je da su zaštitni efekti Cura oslabljeni prethodnom obradom sa 3-MA (slika 6F), što sugerira da je autofagija izazvana Curom potencijalni molekularni mehanizam za poboljšanje cBMSC starenja.

3. Diskusija

Organizmi kontinuirano popravljaju povrijeđena tkiva i usporavaju procese starenja zahvaljujući izrazito funkcionalnim karakteristikama MSC-a koji se intenzivno nalaze u različitim tkivima i organima [15]. Nažalost, starost i bolest su ključni faktori za starenje MSC in vivo, a unutrašnje i vanjske razlike u ćelijskom okruženju ubrzavaju starenje MSC in vitro kulture, a oboje negativno utječu na njihov kapacitet za imunosupresiju, diferencijaciju i migraciju, u konačnici smanjujući efikasnost samopouzdanja. -popravka i transplantacija u MSC [7,14,49-51].ekstrakt cistanche salsaOja i kolege su naznačili da su ljudski BMSC-i prestali s proliferacijom od petog do devetog prolaza kultura kliničkog razreda i pokazali tipične fenotipove starenja, kao što su hipertrofična i ravna morfologija, aktivacija inhibitora kinaze ćelijskog ciklusa p16 i p21, smanjena stopa proliferacije i pojačanu aktivnost SA- -gala [52]. Očigledno, in vitro ekspanzija neizbježno izaziva preranu pojavu starenja u MSC-ima, koji se smatraju važnim modelnim sistemom za in vitro istraživanja ćelijskog starenja [42, A4, A5]. Naša sadašnja studija je otkrila da cBMSC-ovi prije 3. pasusa pokazuju ujednačenu morfologiju, ali je uočeno da prolaze kroz niz promjena u smislu stanične morfologije, fiziologije i ekspresije gena nakon 6. pasusa (Slike 2 i 7), u skladu s preranim starenjem. .

Cistanche može protiv starenja

Sve veći broj dokaza ukazuje da je farmakološka stimulacija obećavajući pristup za spašavanje MSC-a od starenja [53,54]. Imajući to na umu, brojna prirodna i sintetička jedinjenja su opsežno istražena kako bi se odredio njihov protuupalni, antioksidativni i potencijal protiv starenja in vivo i in vitro [15,55]. Kao prirodno fenolno jedinjenje, Cur je izazvao veliku pažnju zbog svog blagotvornog dejstva na biologiju MSC [36,37,56,57]. Međutim, kompleksne efekte izlaganja Cur na MSC treba pažljivo razmotriti prije implementacije različitih biomedicinskih istraživanja. Yang i kolege su izvijestili da visoke koncentracije Cur (50 i 100 uM) mogu izazvati akutne toksične efekte u ljudskim BMSC in vitro, dok kontinuirano izlaganje (7 d) 10 uM Cur inhibira proliferaciju humanog BMSC i inducira apoptozu ćelija [58]. Zanimljivo je da je druga studija pokazala da tretman sa Cur(<20 um)for="" 5="" days="" ameliorates="" h,="" o,-induced="" oxidative="" stress="" in="" human="" adscs[56].="" additionally,="" cur="" preconditioning="" （1="" μm="" and5um）="" for="" 24="" or="" 48h="" can="" help="" to="" maintain="" cellular="" viability="" and="" improve="" the="" lifespan="" of="" rat="" adscs[36,57.="" our="" results="" demonstrated="" that="" cur(1="" um="" and="" 10="" μm）="" was="" able="" to="" maintain="" the="" viability="" of="" cbmscs="" and="" alleviate="" cbmsc="" senescence="" after="" exposure="" for="" 24="" h,="" while="" the="" colony-forming="" efficiency="" of="" cbmscs="" was="" significantly="" decreased="" at="" a="" dose="" of="" 10="" μm（figure="" 3）.="" therefore,="" the="" beneficial="" effects="" of="" cur="" （10="" umd="" may="" be="" attributed="" to="" short-term="" stimulation,="" and="" it="" can="" impair="" the="" proliferation="" potential="" of="" cbmscs="" in="" the="" long="">

Nedavno su o biološkim aktivnostima Cura opširno izvještavane na različitim in vitro ili in vivo modelima, posebno u pogledu modulacije bioloških karakteristika MSC-a. Aktivnost Cura protiv starenja često se raspravlja, a utvrđeno je da Cur ispoljava blagotvorne efekte na starenje i bolesti povezane sa starenjem na nivou organizma i ćelije. Međutim, mehanizam koji leži u osnovi njegove regulacije je komplikovan zbog različitih doza i oblika Cura, kao i mehanizma starenja [19]. Kao glavni intracelularni mehanizam degradacije molekula i rotacije organela, autofagija igra glavnu ulogu u zaštiti MSC-a od stresnih stanja i održavanju ćelijske homeostaze. Modulacija autofagije se smatra novom strategijom za poboljšanje funkcija MSC [59]. Prema podacima prikupljenim iz značajnih studija, promocija ili supresija autofagije od strane Cura u različitim modelima ćelija ispoljava zadovoljavajuće citoprotektivne efekte [38-40].cistanche stemNaši podaci su pokazali da je povećana autofagična aktivnost uočena nakon izlaganja Curu, što je identifikovano povećanjem regulacije gena povezanih s autofagijom (LC3, ULK1, Atg7 i Atg12), stvaranjem LC3-II, povećanjem broja autofagne vakuole i kisele vezikularne organele, te značajno smanjenje nivoa p62 proteina (Slika 4). Dodatno, lizosom se smatra nezamjenjivim organelom za autofagiju, dok su disregulacija lizosomskog pH i promjena vakuolarne aktivnosti H plus -ATPaze (v-ATPaze) uočeni u procesu starenja MSC-a, čime se promoviše acidifikacija lizosoma i autofagija i autofagija. za odlaganje starenja MSC [60]. Yan i kolege su naveli da Cur može aktivirati funkciju lizosoma mišjih embrionalnih fibroblasta (MEF) i inducirati autofagiju, koja služi kao ključni signal za preživljavanje [38]. Slično, primijetili smo da tretman Cur-om povećava acidifikaciju lizosoma u cBMSC-ima (Slika 4), sugerirajući da Cur može biti uključen u aktiviranje funkcije lizosoma, što je neophodno za povećanje autofagne aktivnosti.

Autofagija je pretežno citoprotektivni mehanizam, a sve veći broj dokaza ukazuje da su svojstva protiv starenja prirodnih i sintetičkih spojeva u korelaciji s modulacijom autofagije [29,54,61,62]. Međutim, efekti modulacije autofagije na starenje MSC i odgovarajućih mehanizama još uvijek nisu u potpunosti procijenjeni i istraženi. Inicijalni izvještaji su pokazali da je autofagija pretežno citoprotektivni mehanizam i da povećani nivo autofagije može odgoditi ćelijsko starenje smanjujući nakupljanje toksičnih metabolita i obnavljajući funkciju organela [63]. Zanimljivo je da su nedavna istraživanja također pokazala da je povećan broj autofagičnih vakuola i proteina povezanih s autofagijom (LC3-II, ATG7 i ATG12) uočen tokom starenja MSC, dok je inhibicija autofagije sa bafilomicinom A1 i {{11 }}Ma se pokazalo da smanjuje procenat SA- -gal-pozitivnih ćelija i ekspresiju p16 i p21 [35]. Da bi se dodatno razjasnio odnos između autofagije izazvane Cur-om i njenih efekata na cBMSCsenescenciju, autofagija je modulirana prethodnom obradom rapamicinom ili 3-MA. Očigledno je utvrđeno da je autofagna aktivnost oslabljena 3-MA, dok se pokazalo da RAP i Cur (1 uM) značajno pojačavaju autofagiju (Slika 5). U skladu s prethodnim izvještajima [5], naši nalazi također pokazuju da je inhibicija autofagije od strane 3-MA ubrzala ćelijsko starenje u cBMSC. Gotovo konzistentni efekti na aktivaciju autofagije vršeni su od Cur(1uMand RAP), dok su analogni citoprotektivni efekti u Prema tome, kada je autofagija inhibirana od strane 3-MA, zaštitni efekti Cura su smanjeni (Slika ), što sugerira da je autofagija izazvana Curom potencijalni molekularni mehanizam za poboljšanje cBMSC starenja (Slika 7).

U fiziološkim uslovima, autofagija se javlja na bazalnom nivou u svim eukariotskim ćelijama kako bi se održala ćelijska homeostaza. Međutim, različita stanja stresa mogu dovesti do abnormalne autofagije, koja ima utjecaj na sudbinu stanice osim ako se autofagija ne vrati na optimalan nivo [41,44,64]. Naši dokazi su potvrdili da autofagija izazvana Cur-om pokazuje blagotvorne efekte na regulaciju cBMSC starenja. U ovom scenariju, različite stimuluse koji proizvode stres i ekstracelularne postavke treba pažljivo razmotriti prije tretmana Cur-om, i bilo bi zanimljivo istražiti može li autofagija izazvana Cur-om selektivno poboljšati funkciju MSC-a u unaprijed određenoj dozi i trajanju. Dodatno, sistem isporuke kurkumina zasnovan na nanotehnologiji pokazao je bolju rastvorljivost u vodenoj fazi i nivoe bioraspoloživosti [65,66]; mogao bi biti obećavajući alat pomoću kojeg se može odgoditi i suprotstaviti starenje MSC-a. Odgovor na pitanje da li je autofagija primarni mehanizam u odlaganju starenja MSC-a i dalje zahtijeva više detalja koje će dati buduća istraživanja.

4. Materijali i metode

4.1. Životinje

Uzorci koštane srži uzeti su od 6 zdravih odraslih ženki kineskih ruralnih pasa (12-mjesečnih). Sve studije su odobrene od strane Fakultetske komisije za njegu i korištenje životinja Poljoprivrednog univerziteta Sichuan (br. odobrenja.2020-0608) i provedene u skladu sa etičkim standardima zakona o zaštiti životinja Narodne Republike Kine.

4.2. Priprema rastvora kurkumina

Cur (HPLC veći od ili jednak 98 posto, CAS broj:458-37-7; Solar Science& Technology Co., Ltd., Peking, Kina) je otopljen u DMSO do koncentracije zaliha od 20 mmol/ L. filtrira se kroz organsku mikroporoznu filter membranu od 0,22 μm i čuva na -80 stepenu. Različiti rastvori Cura su pripremljeni u medijumu za in vitro ispitivanje.

4.3. Ćelijska kultura i ekspanzija

cBMSC su dobijeni iz koštane srži. Ćelije su kultivisane u kompletnom mediju koji se sastojao od niskoglukoznog Dulbecco-ovog modifikovanog medijuma Eagle (LG-DMEM, Gibco Grand Island, NY, SAD), 10 posto fetalnog goveđeg seruma (FBS, TransGen Biotech Co., Ltd., Peking, Kina ) i 1 posto penicilina/streptomicina. Pri stopi od 80-90 posto, adherentne ćelije su otpuštene sa rastvorom za varenje tripsina (Beyotime Biotechnology Co., Ltd., Šangaj, Kina) i dalje proširene u omjeru 1:2-1:3 [67 ].

4.4. Cell Growth Curie

Da bi se odredila proliferativna sposobnost cBMSC u pasažima (P)3,6 i 9, ćelije su posađene u tri 48-ploče (2500 ćelija/jažici). Nakon 48 h inkubacije, ćelije su puštene sa rastvorom za varenje tripsina i izbrojane hemocitometrom. Procedura brojanja ćelija se ponavlja svakih 48 h i održava se 14 dana.

4.5. Detekcija imunofenotipa cBMSC protočnom citometrijom

U trećem pasusu, cBMSC su isprani PBS-om i tripsinizirani. Ćelije (3×105 ćelija/mL) su ponovo suspendovane u puferu za bojenje, a ćelijske suspenzije (100 μL) su inkubirane sa FITC, PE ili APC fluorescentno obeleženim monoklonskim antitelima protiv površinskih antigena CD45, CD34 i ITGB1 (eBioscience, San Diego, CA, USA) i nefluorescentno označeni CD31, CD90 i CD105 (Biosynthesis biotechnology Co.Ltd. Peking, Kina) 15 minuta na 4 stepena. Ćelije su isprane sa PBS i inkubirane sa FITC-konjugiranim kozjim anti-zečjim IgG 15 minuta na 4 stepena. Površinski antigeni su detektovani protočnom citometrijom (FACS Calibur, Becton Dickinson, San Jose, Kalifornija, SAD). Analiza podataka je obavljena pomoću softvera CytExpert.

4.6. In vitro test diferencijacije

cBMSC-i su postavljeni u gustini od 5×104 ćelija/mL u 6-pločama. Na 70-80 posto konfluencije, kompletna podloga je zamijenjena medijumom za indukciju osteogene ili adipogene diferencijacije i mijenjana svaka 3 dana (Cvagen, Suzhou, Kina). Taloženje kalcijuma detektovano je bojenjem Alizarin Red S (Solarbio, Peking, Kina) nakon 3 nedelje osteogene indukcije i akumulacija lipidnih kapljica je primećena korišćenjem Oil Red O bojenja (Solarbio, Peking, Kina) nakon 2 nedelje adipogene indukcije.

4.7.Utjecaj Cura na ćelijsku održivost

Ćelijska održivost cBMSC je određena korišćenjem kompleta CCK-8 (Vazyme Biotech Co., Ltd., Nanjing, Kina).prednosti i nuspojave cistanche tubulosacBMSC-i su prethodno kultivirani u 96-jažici 24 h. cBMSC-i su tretirani Curom u različitim koncentracijama (0.1, 0.5, 1, 5 i 1{ {14}} umol/L) tokom 12 h, 24 h, 48 h i 72 h. Ćelije su tretirane sa 0,1 posto DMSO, koji je korišćen kao kontrola. Nakon inkubacije sa 10 μL CCK-8 rastvora po jažici tokom 2 h, optička gustina je izmerena čitačem mikroploče na 450 nm (Thermo Scientific, Waltham, MA, SAD). Relativna vitalnost ćelija izračunata je u skladu sa uputstvima proizvođača.

4.8. Test formiranja kolonija

Efikasnost samoobnavljanja cBMSC-a je otkrivena pomoću testa jedinica za formiranje kolonija fibroblasta (CFU-F). cBMSC-ovi su zasijani (3×10² ćelija/jažici) u 6-ploče. Nakon dvije sedmice kulture, ćelije su fiksirane sa 4 posto paraformaldehida u trajanju od 30 minuta i promatrane pod invertnim mikroskopom (LX73, Olympus Corporation, Tokyo, Japan) nakon bojenja sa 1 posto kristalno ljubičastog u trajanju od 10 minuta. Za CFU-F je izbrojano više od 50 ćelija. Efikasnost CFU-F izračunata je na sljedeći način:

Efikasnost CFU-F=broj CFU-F/broj sjemena (300 ćelija)[68].

4.9. Test bojenja beta-galaktozidazom

Aktivnost galaktozidaze povezane sa starenjem (SA- -gal) u cBMSC-ima procijenjena je korištenjem kompleta za bojenje SA- -gal (Beyotime Biotechnology Co., Ltd., Šangaj, Kina) prema uputama proizvođača . Nakon bojenja, ćelije su pregledane pod invertnim mikroskopom. Pozitivno obojene ćelije su izbrojane da bi se procijenilo ćelijsko starenje.

4.10. Reverzna transkripcija kvantitativni PCR u realnom vremenu (RT-qPCR)

Ukupna RNK je ekstrahirana iz ćelijskih peleta pomoću metode Trizol reagensa. cDNK je sintetizovan korišćenjem PrimeScriptTM RT kompleta reagensa sa gDNA Eraser (Takara, Shiga, Japan). PCR prajmeri (tabela 2) pored GAPDH u odnosu na prethodne studije [67] dizajnirani su korišćenjem softvera Primer Express (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) zasnovanog na cDNK sekvencama. qPCR je izveden korišćenjem TB Green PCR Mix-a (Takara, Shiga, Japan) na CFX96 Touch PCR sistemu za detekciju u realnom vremenu (Bio-Rad, Richmond, CA, USA). Uslovi reakcije su bili sljedeći: 95 stepeni za 30 s, a zatim 39 ciklusa od 95 stepeni za 5s i 60 stepeni za 30 s. Analiza krivulje topljenja je izvršena počevši od 95 stepeni za 10s, zatim u rasponu od 65 do 95 stepeni, povećavajući se za 0,5 stepeni svakim ciklusom. GAPDH je korišten kao interna kontrola za normalizaciju svih podataka, a relativna ekspresija je izračunata pomoću komparativne metode Cycle Threshold (Ct).

4.11. Praćenje luzozomalnog UI pomoću LysoTrackera

Lyso-Tracker Red (Beyotime Biotechnology Co., Ltd., Šangaj, Kina) je korišten za praćenje lizozoma, koji mogu pokazati povećani intenzitet fluorescencije nakon lizozomalnog acidifikacije. Posijali smo cBMSC u 12- ploče i tretirali ih Curom tokom 24 h, zatim su ćelije tretirane Lyso-Trackerom (60 nM) i Hoechst 33,342 (2 ug/mL) tokom 20 minuta. Fluorescencija je uočena pomoću invertovanog fluorescentnog mikroskopa nakon ispiranja sa PBS.

4.12. Imunofluorescencija

cBMSC (2×104 ćelije/slajd) su posađene na stakalce i fiksirane sa 4% paraformaldehida tokom 30 minuta. Nakon ko-inkubacije sa 0,5 posto Triton X-100 u trajanju od 5 minuta (Solarbio, Peking, Kina), sekcije su uronjene u otopinu za blokiranje na 30 minuta. Zatvorena tečnost je uklonjena, a ćelije su inkubirane sa anti-LC3B antitelima (1:1000, Abcam, Cambridge, MA, USA) preko noći na 4 stepena, zatim inkubirane sa sekundarnim antitelima konjugovanim fluorohromom (Abcam, Cambridge, MA, USA) tokom 50 minuta na 37 stepeni C. Na kraju, ćelije su obojene sa DAPI (Beyotime Biotechnology, Šangaj, Kina) i praćene pod konfokalnim mikroskopom.

4.13.Western blotting analiza

Uzorci ćelija su lizirani tkivom i ćelijskim lizatom (Solarbio, Peking, Kina) koji sadrži inhibitor proteaze nakon ispiranja ledeno hladnim PBS-om. Ćelijski lizati koji sadrže 15 ug proteina po uzorku su stavljeni u natrijum-dodecil sulfat-poliakrilamid (SDS-PA) (Solarbio, Peking, Kina) gelove i razdvojeni elektroforezom. Nakon prenošenja proteina na poliviniliden fluoridnu (PVDF) membranu, ova potonja je blokirana nespecifično sa 5 posto nemasnog suvog mlijeka (Solarbio, Peking, Kina) 1 h na sobnoj temperaturi. Membrane su inkubirane preko noći sa primarnim antitelima anti-LC3B (1:2000, Abcam, Cambridge, MA, USA), anti-p62/SQSTM1(1:4000, Novus Biologicals, Littleton, NH, USA ), i anti- -aktin (1:1000, Abcam, Cambridge, MA, USA) na 4 stepena, a mrlje su isprane sa TBST (Solarbio, Peking, Kina) prije inkubacije sa sekundarnim antitijelima (1 :2000, Abcam, Cambridge, MA, SAD) na 37 stepeni u trajanju od 1 h. Nakon toga, membrane su razvijene izlaganjem hemiluminiscentnim reagensima (Millipore, Billerica, MA, SAD) i vizualizirane pomoću ChemiDocTM Imaging Systems (Tanon-5200, Šangaj, Kina). Gustina trake je kvantifikovana korišćenjem softvera Image-Pro Plus 6.0 (Media Cybernetics, Silver Spring, MD, USA) za svaku grupu i normalizovana sa -aktinom.

4.14. Transmisiona elektronska mikroskopija (TEM)

Ćelijski pelet je digestiran i sakupljen u epruvetu za centrifugiranje od 1,5 mL, zatim fiksiran sa 2,5 posto glutaraldehida (Solarbio, Peking, Kina) 2 h na sobnoj temperaturi. Uzorci su naknadno fiksirani sa 1 posto osmijum tetroksida 1 h nakon ispiranja sa PBS, zatim smo postepeno povećavali dehidraciju u rastvorima acetona i ugradili ih u 812 epoksidnu smolu (Beijing Zhongjingkeyi Technology Co., Ltd., Peking, Kina). Zatim su dobijeni preseci od 50 nm sa ultramikrotoma (EM UC7, Leica Microsystems Co., Ltd., Heidelberg, Nemačka). Presjeci su obojeni uranil acetatom (Zhongjingkevi, Bejing, Kina) 10-15 min i olovnim citratom (Zhongjingkei, Peking, Kina) 2 min. Svi uzorci su pregledani na TEM (EM-1400PLUS, JEOL, Akishima, Tokio, Japan).

4.15. Statistička analiza

Rezultati su dobijeni iz tri nezavisna eksperimenta i svi podaci su prikazani kao srednje vrijednosti ± standardne devijacije (SD). Statističke vrijednosti su analizirane korištenjem IBM SPSs Statistics 25 i ilustrovane korištenjem GraphPad Prism 9.0(GraphPad Software, San Diego, CA, SAD). Statistički značajne razlike utvrđene su korištenjem jednosmjerne analize varijanse (ANOVA) i Studentovog t-testa. p vrijednosti<0.05 were="" considered="" to="" be="" significant="">

5. Zaključci

Naši nalazi bacaju svjetlo na odnos između Cura, cBMSC starenja i autofagije. Podaci iz naše studije sugeriraju da Cur može ublažiti stanje starenja cBMSC-a uz aktiviranje autofagije i promicanje lizozomske acidifikacije. Štaviše, dodatni dokazi su pokazali da je autofagija izazvana Curom potencijalni mehanizam za poboljšanje starenja cBMSC. Cur bi mogao biti obećavajući aktivator i konzervator za poboljšanje funkcije MSC-a. Po našem mišljenju, pozitivni efekti Cura na starenje ne mogu se zanemariti. Buduće studije bi se trebale fokusirati na učinak regulacije Cura na sudbinu MSC-a kako bi se poboljšao terapeutski potencijal MSC-a u različitim bolestima, kao što su oštećenje tkiva i degenerativne i upalne bolesti.

Ovaj članak je preuzet iz Int. J. Mol. Sci. 2021, 22, 11356. https://doi.org/10.3390/ijms222111356 https://www.mdpi.com/journal/ijms