Polisaharidi Cistanche inhibiraju proliferaciju ćelija raka prostate i indukuju apoptozu putem stvaranja ROS i supresije antioksidativnih gena
Jun 10, 2025
sažetak:
Cilj:Istražiti efekte i osnovne mehanizmeCistanche polisaharidina proliferaciju i apoptozućelije raka prostate.
Metode:
DU145 ćelije raka prostate su tretirane niskim, srednjim i visokim koncentracijamaCistanche polisaharidi(20, 40 i 80 mg/mL, respektivno). Proliferacija ćelija je procenjena korišćenjemMTT test, a apoptoza je procijenjena pomoćuprotočna citometrija. Intracelularnoreaktivne vrste kiseonika (ROS)nivoi su izmjereni putem protočne citometrije, dokglutation (GSH)nivoi su određeni korišćenjemELISA. Nivoi ekspresije mRNA i proteinakatalitička podjedinica glutamat-cistein ligaze (GCLC), podjedinica modifikatora glutamat-cistein ligaze (GCLM), itioredoksin reduktaza 1 (TXNRD1)su analizirani od straneRT-PCRiWestern blot, odnosno.
Rezultati:
Polumaksimalna inhibitorna koncentracija (IC₅₀) odCistanche polisaharidina DU145 ćelijama iznosila je 40,35 mg/mL, tako da je 40 mg/mL odabrano kao srednja doza za naredne eksperimente. Niske, srednje i visoke doze su definisane kao 50%, 100% i 200% IC₅₀, respektivno.
Sve tretirane grupe su pokazale značajno povećane stope apoptoze u odnosu na kontrolnu grupu. TheCistanche grupa visokih dozasu pokazale najveću inhibiciju proliferacije ćelija i najveću stopu apoptoze, a zatim grupe sa srednjim i niskim dozama (P< 0,01). Nivoi ROS su bili značajno povišeni, a nivoi GSH su značajno smanjeni kod svihGrupe tretirane Cistancheomnaspram kontrole. Posebno, thegrupa sa visokim dozamaimale značajno veće ROS i niže nivoe GSH u odnosu na grupe sa srednjim i niskim dozama (P< 0,05); grupa sa srednjom dozom pokazala je slične razlike u odnosu na grupu sa niskim dozama (P< 0,05).
Nivoi ekspresijeGCLC, GCLM, iTXNRD1(i mRNA i protein) bile su značajno smanjene u svim grupama koje su tretirane Cistancheom u poređenju sa kontrolom (P< 0,05). Thegrupa sa visokim dozamapokazala najznačajniju supresiju ovih gena i proteina povezanih s antioksidansima, a zatim slijede grupe sa srednjim i malim dozama (P< 0,05).
zaključak:
Cistanche polisaharidiinhibiraju ekspresiju antioksidativnih faktoraGCLC, GCLM, iTXNRD1, čime se smanjujeGSH sinteza, promoviranjeAkumulacija ROS, i na kraju izazivajućiapoptoza u ćelijama raka prostate. Ovi nalazi ukazuju na toCistanchemože poslužiti kao aprirodno terapeutsko sredstvoza rak prostate prekomehanizmi posredovani oksidativnim stresom.
Ekstrakt Cistanche sa visokim sadržajem polisaharida
Wecistanche usluga podrške - kontaktirajte nas da dobijete veleprodajnu cijenu
Email:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tel:+86 15292862950
Pozadina i metode
Rak prostateiznosi približno7,1% svih malignih bolesti muškaraca, a vrhunac incidencije se javlja nakon 60. godine. Kako stanovništvo Kine nastavlja da stari, očekuje se da će incidencija ove bolesti dalje rasti [1]. Studije sugeriraju da visoka prevalencija raka prostate kod starijih muškaraca može biti povezana sdegenerativne promjene prostate, genetska predispozicija, prehrambene navike, ifaktori životnog stila [2].
Hirurška resekcijaostaje glavni oslonac u liječenju raka prostate, s ciljem uklanjanja većine tumorske mase. Međutim, to je povezano sa značajnim komplikacijama, kao nprurinarna inkontinencija, seksualna disfunkcijai što je najvažnije,recidiv tumora i metastaze, koji su glavni uzroci loše prognoze [3].
posljednjih godina,Tradicionalna kineska medicina (TCM)je stekao sve veću pažnju zbog svoje uloge u terapiji raka. TCM može pomoćipojačati imunitet, , ipojačati detoksikaciju. Izlažu se i neke ljekovite biljkedirektna antitumorska svojstva, uključujući inhibiciju rasta tumora iindukcija apoptoze u ćelijama raka [4].
među ovima,cistanche (Cistanche deserticola)je tradicionalna tonik biljka poznata po svomimunomodulatorno, antioksidativno, iantitumorski efekti. Njegove glavne bioaktivne komponente supolisaharidiifeniletanoidni glikozidi. Ova studija istražuje efekte i mehanizam u osnoviCistanche polisaharidionproliferacija i apoptoza ćelija raka prostate DU145.
1. Materijali i metode
1.1 Glavni materijali i reagensi
DU145 ljudske ćelije raka prostatedobijeni su od Tongpai Biotech (Šangaj, Kina).
Cistanche polisaharidi(Broj serije: 0287181) kupljeni su od Weikeqi Bio Co., Ltd. (Sichuan, Kina).
Fetalni goveđi serum, penicilin/streptomicin, iDMEMobezbijedio Zeta Life (SAD).
MTT test, Aneksin V/PI kompleti za apoptozu, RIPA pufer za lizu, Kompleti za kvantifikaciju BCA proteinadobijeni su od Elabscience (Šangaj, Kina).
Komplet za detekciju reaktivnih vrsta kiseonika (ROS).iGSH ELISA setovikupljeni su od BioLaba (Šangaj, Kina).
Trizol reagens, kompleti za reverznu transkripciju, iPCR kompletiizvori su iz NeuroSyma (Hangzhou, Kina).
Antitela protivGCLC, GCLM, TXNRD1, -aktin, a odgovarajuća sekundarna antitijela su kupljena od UnivBio (Šangaj, Kina).
1.2. Ispitivanje kulture ćelija i proliferacije
DU145 ćelije su uzgajane uDMEM sa dodatkom 10% FBS i 1% penicilina/streptomicinau CO₂ inkubatoru. ZaMTT testDU145 ćelije logaritamske faze zasijane su u ploče sa 96 jažica i tretirane saOtopine polisaharida Cistancheu koncentracijama od10, 20, 40 i 80 mg/mL. Kontrolna grupa je primila samo DMEM medijum.
Nakon 24 sata tretmana,20 µL 5 mg/mL MTTje dodat u svaku jažicu i inkubiran 4 sata. Supernatant je uklonjen, i150 µL DMSOje dodan. Nakon mućkanja od 10 minuta, izmjerena je apsorpcija na490 nmpomoću čitača mikropločica. TheIC₅₀je izračunato, i20, 40 i 80 mg/mLsu odabrani kaoniske, srednje i visoke dozeza naredne eksperimente. Thestopa inhibicije proliferacije ćelijaizračunato je kao:
Stopa inhibicije (%)=(OD_kontrola - OD_tretirana) / OD_kontrola × 100
1.3 Analiza apoptoze
DU145 ćelije log-faze tretirane su različitim koncentracijamaCistanche polisaharidiprema grupacijama. Nakon fiksacije i bojenja,Aneksin V-FITCiPIkorišćene za obeležavanje apoptotičkih ćelija.Protočna citometrijaizvršeno je da se detektuju fluorescentni signali, te je zabilježen postotak apoptotičkih ćelija.
1.4 Detekcija intracelularnih nivoa ROS i GSH
Nivoi ROS su izmjereni pomoću aROS fluorescentna sondai protočna citometrija. Nivoi GSH su kvantificirani korištenjemELISA. Standardna kriva je pripremljena korištenjem poznatih koncentracija GSH standarda, a apsorbanca je izmjerena da bi se izračunale koncentracije GSH u uzorcima.
1.5 RT-PCR za ekspresiju mRNA GCLC, GCLM, TXNRD1
Ukupna RNK je ekstrahirana pomoćuTrizol, i sintetizirana je cDNK. PCR je izveden upotrebom specifičnih prajmera:
GCLC:
Napadač: 5'-GTCGGTGTCAAAATACGGAGTTCCA-3'
Revers: 5'-CGTGACGAGGACTGCGTGCATGGAT-3'
GCLM:
Napadač: 5'-CCGATGACGCCATAAACGTCCGTAGC-3'
Revers: 5'-GGCTAAGCGTACGTAGTACGCAACGTA-3'
TXNRD1:
Forward: 5'-TGACAGTCCTACCGTACGTAGAATGCC-3'
Revers: 5'-ATAATGCGTAGGGATGCGCTAGCAATGG-3'
-aktin (interna kontrola):
Napadač: 5'-TTAGGCGCGATGCAGTCAGATAAGC-3'
Revers: 5'-ATCGACGTACGTACGGACGCGATAG-3'
Uslovi pojačanja: 95 stepeni za 60 s, nakon čega slijedi 30 ciklusa od 95 stupnjeva za 30 s, 60 stupnjeva za 30 s i 72 stepena za 60 s. PCR proizvodi su analizirani od stranegel elektroforeza, a relativna ekspresija gena je normalizirana na-aktin.
1.6 Western blotting za ekspresiju proteina
Ukupni protein je ekstrahovan korišćenjemRIPA tampon, a koncentracija proteina je određena pomoćuBCA test. Proteini su odvojeniSDS-PAGE, prebačen uPVDF membrane, blokiran i inkubiran preko noći na 4 stepena sa primarnim antitelima protivGCLC, GCLM, TXNRD1, i-aktin. Nakon inkubacije saHRP-konjugirana sekundarna antitijela, bendovi su vizualizirani pomoćuhemiluminiscencijai kvantificirano od straneImageJ softver.
1.7 Statistička analiza
Svi podaci su analizirani korišćenjemSPSS 25.0. Jednosmjerna ANOVA iLSD-t testovikorišteni su za određivanje statističke značajnosti.
