Cistanche funkcije za bubrege i dijabetes

Disfunkcija cirkadijalnog sata u bubrežnim tubulima dovodi do pojačane glukoneogeneze bubrega i pogoršanja hiperglikemije kod dijabetesa

za više informacija:ali.ma@wecistanche.com

Camille Ansermet1,6, Gabriel Centeno1,6, Yohan Bignon1,6, Daniel Ortiz2,6, Sylvain Pradervand3,Andy Garcia1, Laure Menin2, Fre´de´ric Gachon1,4, Hikari AI. Yoshihara5 i Dmitri Firsov1

¹Odeljenje za biomedicinske nauke, Univerzitet u Lozani, Lozana, Švajcarska;²Služba za spektrometriju mase, Institut za hemijske nauke i inženjerstvo, Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne, Lozana, Švajcarska;³Genomic Technologies Facility, Univerzitet u Lozani, Lozana, Švajcarska;⁴Institut za molekularnu bionauku, Univerzitet Queensland, Queensland, Australija; i ⁵Institut za fiziku, Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne, Lausanne, Švicarska

Thecirkadijanski satje sveprisutni molekularni mehanizam za mjerenje vremena koji sinkronizira ćelijske, tkivne i sistemske biološke funkcije sa 24-satnim ciklusima okoline. Lokalni cirkadijalni satovi pokreću ritmove specifične za tip ćelije i tkiva i njihova disregulacija je implicirana u patogenezi i/ili napredovanju širokog spektra bolesti. Međutim, patofiziološka uloga intrinzičnecirkadijanski satoviu bubrezima dijabetičara ostaje nepoznat. Da bismo odgovorili na ovo pitanje, inducirali smo tip Idijabetesasa streptozotocinom kod miševa lišenih cirkadijalnog transkripcionog regulatora BMAL1 u podocitima (cKOp miševi) ili ububregtubule (cKOt miševi). Nije bilo povezanosti između disfunkcije cirkadijalnog sata i razvoja dijabetičke nefropatije kod cKOp i cKOt miševa s dijabetesom. Međutim, cKOt miševi sadijabetesapokazali su pogoršanu hiperglikemiju, povećano frakciono izlučivanje glukoze u urinu, pojačanu poliuriju i izraženiju hipertrofiju bubrega u poređenju sa kontrolnim miševima tretiranim streptozotocinom. Analiza ekspresije mRNA i proteina otkrila je značajno poboljšanje glukoneogenog puta ububrezicKOt miševa sa dijabetesom u poređenju sa dijabetičkim kontrolnim miševima. Transkriptomska analiza zajedno sa funkcionalnom analizom cKot miševa sadijabetesaidentificirane promjene u više mehanizama koji direktno ili indirektno utiču na glukoneogeni put. Na taj način demonstriramo tu disfunkciju intrinzičnogbubregtubulcirkadijanski satpogoršava dijabetičku hiperglikemiju kroz pojačavanje glukoneogeneze ububregproksimalnog tubula i dalje naglašavaju važnost cirkadijalnog ponašanja kod pacijenata sadijabetesa.

KLJUČNE REČI: thecirkadijanski sat; dijabetesa; glukoneogeneza; proksimalni tubul

Click to Cistanche na urdu i Cistanche za dijabetes

Transitional Stamement

Udijabetesa, thebubregdoprinosi razvoju dijabetičke hiperglikemije povećanjem reapsorpcije glukoze iz primarnog urina i regulacijom glukoneogeneze u proksimalnom tubulu. Međutim, ove2 procese također kontroliracirkadijanski sat, mehanizam koji sinkronizira različite specifične bubrežne funkcije sa dnevnim ciklusima svjetlo-tarak. Ovdje demonstriramo da disfunkcija unutrašnjeg cirkadijalnog sata u bubrežnim tubulima može pogoršati dijabetičku hiperglikemiju kroz poboljšanje bubrežne glukoneogeneze. Ovi rezultati naglašavaju važnost cirkadijalnih efekata kod pacijenata sa dijabetesom, s potencijalnim implikacijama na upravljanje glukozom

Dijabetesje sistemska bolest u kojoj bubrezi igraju posebnu ulogu. Kod dijabetesa,bubregdoprinosi razvoju dijabetičke hiperglikemije povećanjem reapsorpcije glukoze iz primarnog urina1 i povećanjem proizvodnje glukoze putem glukoneogeneze.2,3Međutim, dugotrajno povišenje razine glukoze u krvi može zauzvrat uzrokovati dijabetičku nefropatiju (DN), jednu od najozbiljnijih komplikacija dijabetesa, karakteriziranog glomerularnim, tubularnim i vaskularnim oštećenjem bubrega. Iako je metabolički stres primarni faktor uključen u patogenezu i progresiju DN, samo hiperglikemija ne dovodi do bubrežne insuficijencije kod većine dijabetičara.4 Ovo sugerira da u kombinaciji s interkurentnom bolešću ili prisustvom okolišnih, genetskih ili epigenetskih "drugih pogodaka" može biti potrebno za početak i/ili ubrzano napredovanje DN. Nedavna istraživanja sugeriraju da je cirkadijalni mehanizam sata na raskrsnici nekoliko (pato)fizioloških procesa ububreg.5 Uslovnocirkadijanski satu različitim tipovima bubrežnih stanica na životinjskim modelima rezultira poremećajem cirkadijalnih ritmova brzine inglomerularne filtracije (GFR),6 djelomičnim gubitkom kontrole krvnog tlaka,7,8 značajnim promjenama u bubrežnim metaboličkim putevima,9,10 i ubrzanom progresijom kroničnebolest bubrega.11 Kod ljudi je cirkadijalna neusklađenost biološkog sata i ritma hranjenja i aktivnosti povezana sa smjenskim radom povezana sa smanjenim GFR,12 povećanim izlučivanjem albumina u urinu,13 nokturijom i povećanom proizvodnjom urina u bubrezima14 i povećanim rizikom od kronične bolesti bubrega.15

Zanimljivo, thecirkadijanski satububregkontrolira ili je međusobno povezan s mnogim ćelijskim putevima koji su uključeni u patogenezudijabetesai/ili DN. Na primjer, nokaut aktivatora transkripcije BMAL1 (takođe nazvan ARNTL), centralnog elementa cirkadijalnog sata, specifičan za bubrežne tubule, rezultira značajnim povećanjem nivoa ekspresije mRNA koje kodiraju proteine ​​uključene u glukoneogenezu renalglutamina, uključujući glutamin transporter33A (SLCSNAT transporter38 glutaminaza (GLS) i glutamat dehidrogenaza 1 (GLUD1).9 Što je još važnije, ove promjene ekspresije se dešavaju kod životinja s normoglikemijskim nokautiranjem. Slominskiet al. su pokazali da je protein cirkadijanskog sata PER1 uključen u regulaciju transkripcije transportera glukoze Sglt1 (Slc5a1) u ćelijama proksimalnih tubula,16 i Ansermetet al. su pokazali da cirkadijalni sat u podocitima kontroliše ekspresiju gena Arhgap24 povezanu sa predispozicijom za DN kod dijabetesa tipa 1 i tipa 2.6 Pokazalo se da i visoki nivoi glukoze i tubularni nedostatak BMAL1 snažno induciraju ekspresiju inhibitora kinaze zavisne od ciklina p21CIPn1a (Cdkn1a ), kritičan faktor u pokretanju ćelijske senescencije u dijabetičkom bubrezu.9,17 Deacetilaza sirtuin 1 zavisna od nikotinamideadenin dinukleotida (SIRT1), jedan od ključnih regulatora oštećenja podocita u DN,18 identificiran je kao glavni regulator energetske povratne petlje unutar mreže glavnog sata.19 Još jedan ćelijski mehanizam koji povezuje DN sacirkadijanski satje meta sisavaca rapamicina, kinaze koja koordinira ćelijski metabolizam sa cirkadijalnim održavanjem vremena.20 Promijenjeni cilj rapamicina kod sisara također je prepoznat kao važan patogeni faktor u oštećenju bubrežnih tubularnih stanica izazvanim dijabetesom,21 podocita24 i mezanglomernih stanica24 i podocita24 i mezanglomernog kraja22 . Kolektivno, ova zapažanja sugeriraju da perturbacije cirkadijalnog sata ububregmože utjecati na razvoj dijabetičke hiperglikemije stimuliranjem bubrežne tubularne glukoneogeneze i/ili reapsorpcije glukoze, ili djelujući kao "drugi pogodak" doprinoseći patogenezi DN. Da bismo odgovorili na ove hipoteze, generirali smo i karakterizirali miševe sa streptozotocinom (STZ) izazvanim tipom Idijabetesai specifično brisanjecirkadijanski satkoordinator Bmal1 u glomerularnim podocitima ili u renaltubulu.

Kliknite zaCistanche za liječenje bolesti bubrega

METODE

Životinje su držane ad libitum na standardnoj laboratorijskoj ishrani (KLIBA NAFAG dijeta 3800). Svi eksperimenti su izvedeni na mužjacima miševa.

Modeli miševa

Inaktivacija gena Bmal1 (Arntl) izazvana je 2-sedmičnim tretmanom doksiciklinom (DOX; 2 mg/ml u vodi za piće) 8-nedeljnog Bmal1lox/lox/Nphs2-rtTA /LC1 miševi (cKOp miševi) ili 8-sedmično stari Bmal1lox/lox/Pax8-rtTA/LC1 miševi (cKOt miševi). Njihova kontrolna grupa (miševi Bmal1lox/lox) primila je isti DOX tretman. Oba modela su prethodno opisana i validirana.6,9 Tjedan dana nakon završetka tretmana DOX-om, tip Idijabetesaje indukovano ip injekcijama STZ (50 mg/kg tjelesne težine [TW]; dnevno tokom 5 dana). Miševi tretirani vozilom primili su injekcije fiziološkog rastvora puferovanog fosfatom. Svi eksperimenti su izvedeni 8 sedmica nakon posljednje injekcije STZ ili vozila. U svim eksperimentima, prikupljanje tkiva i krvi obavljeno je od miševa žrtvovanih na ZT9 (ZT označava Zeitgeberove vremenske jedinice; ZT0 je vrijeme uključenog svjetla, a ZT12 je vrijeme isključenog svjetla).

Metabolički kavezi

Miševi su smješteni u pojedinačne metaboličke kaveze (Tecniplast). Sakupljanje urina je obavljeno tokom 24 sata nakon 4-dnevnog perioda adaptacije.

Hemija plazme i urina

Koncentracije i osmolalnost Naþ, Kþ, Ca2þ, Mg2þ, fosfata, kreatinina, glukoze, urata i uree u urinu i plazmi mjereni su od strane Laboratoire de prestations de Chimie Clinique Centra Hospitalier Universitaire Vaudois. pH mokraće je procenjen pH metrom (Metrohm). pH krvi i plinovi u krvi izmjereni su na miješanoj arterijsko-venskoj krvi pomoću epic krvoanalizera (Siemens Healthcare). Urinarni amonijum je mjeren Berthelotovom metodom. Titraciona kiselina u urinu mjerena je metodom Chan.25 Nivoi aldosterona u plazmi mjereni su radioimunotestom (DPC). Inzulin u plazmi je određen pomoću kompleta iz Mercodia

GFR

GFR je mjeren na anesteziranim životinjama insulin-fluorescein izotiocijanatom, kao što je prethodno opisano.26

Ip test tolerancije na glukozu

Nakon 15 sati gladovanja, kontrola tretirana vehikulom ili STZ i cKotmice su ip ubrizgane glukozom (1 g/kg TM). Glikemija je izmjerena čitačem glikemije u kapi krvi iz repa (Contour NextOne; Bayer) prije (vrijeme ¼ 0) i 15, 30, 60, 90, 120 i 180 minuta nakon injekcije glukoze.

Test tolerancije na inzulin

Nakon 4 sata restrikcije hrane, kontrolnim i cKot miševima tretiranim vehikulom ili STZ je ip ubrizgano 0.5 U inzulina (humani rekombinantni insulin; Sigma) po kg TM. Glikemija je mjerena prije injekcije inzulina (vrijeme ¼ 0) i 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150 i 180 minuta nakon injekcije insulina. Ako se glikemija smanji ispod 2 mM, miševi su spašeni ip injekcijom 30 mg glukoze i isključeni iz analize.

RNA sekvenciranje

RNK sekvenciranje je izvedeno kako je opisano u Ansermet et al.6 Korištena je anotacija gena Musmusculus GRCm38.92. Broj gena je skaliran upotrebom TMM normalizacije i log transformiran u broj na milion (CPM) korištenjem funkcije "CPM" iz paketa limma R.27 Diferencijalna ekspresija između nokautiranih i kontrolnih životinja izračunata je za netretirane (fosfatnim puferom) i tretirane ( STZ) uslova i interakcije između 2. Za svako od 3 poređenja, geni sa stopom lažnog otkrića (FDR) < 5="" procenata="" odabrani="" su="" za="" analizu="" obogaćivanja="" ontologije="" gena="" "biološki="" proces"="" sa="" "profilom="" klastera".28="" termini="" sa="">< 0.01="" were="" considered="" as="" significant="" and="" further="" processed="" with="" the="" function="" "simplify"="" with="" default="" parameters="" to="" remove="">

Statistička analiza

Svi podaci su izraženi kao srednja vrijednost±SEM. Statistički testovi su opisani u legendama slika iu dodatnoj tabeli S10. P < 0,05="" se="" smatra="" značajnim.="" statistička="" analiza="" je="" izvršena="" pomoću="" softvera="" graphpad="" prism="" (verzija="">

Capillary Western blots

Capillary Western blotovi su izvedeni na Univerzitetu u Lozani za analizu proteina (https://www.unil.ch/paf/home/menuinst/technologies/western-in-capillaries.html). Njihovu kvantitaciju izvršio je tehničar iz ovog objekta na slijepo.

Cistanche može poboljšati funkciju bubrega

REZULTATI

Inaktivacija Bmal1 u podocitima ne dovodi do indukcije DN kod miševa tretiranih STZ

Inaktivacija Bmal1 (Arntl) specifična za podocite je izazvana 2-sedmičnim tretmanom sa DOX-om (2 mg/ml u vodi za piće) 8-nedeljnog Bmal1lox/lox/Nphs2-rtTA/ LC1 miševi (u daljem tekstu cKOp miševi).6 Njihove kontrolne grupe legla (Bmal1lox/lox miševi; u daljem tekstu kontrolni miševi) primile su isti DOX tretman. Kao što je prikazano na slici 1a, STZ tretman (vidi Metode) je doveo do hiperglikemije, koja se nije razlikovala između kontrolnih i cKOp miševa. BW je bio manji kod STZ tretiranih životinja, ali je ovaj efekat bio sličan kod miševa oba genotipa (Slika 1b). GFR, mjerenjem klirensa insulin-fluorescein izotiocijanat, nije se razlikovao između kontrolnih miševa tretiranih STZ i cKOp miševa (Slika 1c). Dijabetičke životinje su pokazale glukozuriju (Slika 1d), poliuriju (Slika 1e), proteinuriju niske molekularne težine (Slika 1f) i blagu albuminuriju (Slika 1f). Međutim, nije bilo razlike u ovim parametrima između kontrole tretirane STZ i cKOp miševa

Miševi bez BMAL1 u bubrežnim tubulima pokazuju pogoršanu hiperglikemiju s dijabetesom

Kao što je prikazano na slici 2a, BW se nije razlikovao kod miševa s kontrolom dijabetesa i miševa bez BMAL1 u bubrežnim tubulima (DOX-tretirani Bmal1lox/lox/Pax8-rtTA/LC1 miševi9; u daljem tekstu miševi cKot). Analiza krvne plazme je otkrila da se hiperglikemija izazvana STZ pogoršava kod cKOt miševa iu uslovima hranjenja i natašte (Slika 2b i c). koncentracije urata i aldosterona bile su različite između kontrole tretirane STZ-om i c Kotmice, osim povećanja nivoa uree u plazmi kod cKOt miševa (dodatna tabela S1). Nivoi inzulina u plazmi nisu se razlikovali između kontrolnih miševa tretiranih STZ i miševa na gladovanju cKot (Slika 2d). Testovi tolerancije na glukozu i inzulin procijenjeni kao nagib opadanja koncentracije glukoze nisu otkrili značajne razlike između miševa bilo kojeg genotipa u oba uslova liječenja (Slika 2e i f, respektivno).Dijabetes-induciranobubreghipertrofija je bila izraženija kod dijabetičkih cKOt miševa nego kod kontrolne grupe dijabetičara (Slika 2g). GFR se nije razlikovao između miševa oba genotipa tretiranih STZ (Slika 2h). STZ-indukovano povećanje unosa vode i volumena urina bilo je izraženije kod c Kot miševa (Slika 3a i b, respektivno), dok se osmolalnost urina nije razlikovala između dijabetičkih miševa oba genotipa (Slika 3c). Frakciono izlučivanje glukoze bilo je veće, a frakciono izlučivanje natrijuma niže kod cKOt miševa tretiranih STZ u poređenju sa kontrolama tretiranim STZ (slika 3d i e), dok vrijednosti frakcijske ekskrecije fosfata (slika 3f), magnezija (slika 3g) i kalcij (Slika 3h) nisu se razlikovali između dijabetičkih miševa oba genotipa. I kontrolni i cKot miševi liječeni STZ imali su sličnu proteinuriju niske molekularne težine, ali bez albuminurije (dodatna slika S1). Nisu pronađene velike histološke razlike između bubrega kontrolne grupe tretirane nosačem ili STZ i cKot miševa (dodatna slika S2).

Slika 1|Opće karakteristike kontrolnih i cKOp miševa tretiranih nosačem ili streptozotocinom (STZ). (a) Nepostoljena glikemija. (b) Tjelesna težina (BW). (c) Brzina glomerularne filtracije (GFR) (klirens insulina). (d) Glukoza u urinu. (e) Volumen urina. (f) Coomassie plavo bojenje proteina urina. Za sve miševe, 0.3 procenta (vol) 24-satnog urina napunjeno je na gel za elektroforezu natrijum dodecil sulfat-poliakrilamidnog gela. Zadana je srednja vrijednost±SEM. n=9 u svakoj grupi, osim za GFR mjerenja, gdje su n=6 i n=9 miševa korišteni u STZ-tretiranim kontrolnim i cKOp grupama, respektivno. Svi rezultati su dobijeni od 19-nedeljnih životinja. Korištena je dvosmjerna analiza varijanse sa Sidak testom višestrukog poređenja. *P < 0.05,="" †p="">< 0.01,="" ‡p="">< 0,001.="" alb,="" albumin="" (65="" kda);="" lmwp,="" protein="" niske="" molekularne="">

Slika 2|Opće karakteristike kontrolnih i c Kot miševa tretiranih nosačem ili streptozotocinom (STZ). (a) Telesna težina. n=8 za kontrolne miševe tretirane vozilom i c Kot miševe, i n=9 za kontrolne miševe tretirane sa STZ i c Kot miševe. (b) Nepostoljena glikemija. n ¼ 8 i n=9 za kontrolne miševe tretirane vozilom i STZ i c Kot miševe. (c) Glikemija natašte (16 sati gladovanja). n=9 za kontrolne miševe tretirane vozilom i c Kot miševe, te n=7 i n=6 za kontrolne miševe tretirane sa STZ i c Kot miševe. (d) Nivoi inzulina kod kontrolnih miševa tretiranih nosačem ili STZ i c Kot miševa. n=9 i n=6 za kontrolne miševe tretirane vozilom i c Kot miševe, i n=10 i n=7 za kontrolne miševe ubrizgane STZ i c Kot miševe. Nivo insulina u plazmi je izmeren na ZT18, u sredini neaktivne faze. (e) Nivoi glukoze u krvi mjereni su tokom testa tolerancije glukoze u kontrolnim i c Kot miševima u vozilu ili kod STZ tretiranih. n=9 za kontrolne miševe tretirane vozilom i c Kot miševe, te n=7 i n=6 za kontrolne miševe tretirane sa STZ i c Kot miševe. (f) Nivoi glukoze u krvi mjereni su tokom testa tolerancije na inzulin kod kontrolnih miševa koji su tretirani vozilom ili STZ i c Kot miševa. n=5 za kontrolne miševe tretirane vozilom ili STZ, i n=6 za cKO miševe tretirane vozilom ili STZ. (g)Dijabetes-induciranobubreghipertrofija. n{{0}} u svakoj grupi. Hipertrofija bubrega je procijenjena dijeljenjem težine bubrega (KW) s tjelesnom težinom (BW). Relativne vrijednosti KW/BW za kontrolne životinje ubrizgane STZ i c Kot životinje su izračunate pripisivanjem 1{{10}}0 posto na odgovarajuću grupu ubrizganih vozila. (h) Brzina glomerularne filtracije (GFR) (klirens insulina). n ¼ 5 i n ¼ 6 za kontrolne miševe tretirane STZ i c Kot miševe. Zadana je srednja vrijednost±SEM. Korištena je dvosmjerna analiza varijanse sa Sidak testom višestrukih poređenja. *P < 0,05,="" †p="">< 0,01,="" ‡p=""><>

Ekscerbirana hiperglikemija kod cKOt miševa korelira sa povećanom ekspresijom glukoneogenih enzima u bubrezima

Da bismo identificirali molekularne puteve povezane s pogoršanom hiperglikemijom kod cKOt miševa tretiranih STZ, izvršili smo analizu sekvenciranja RNKbubregtranskriptome praćene analizom obogaćivanja puta cijelog transkriptoma i specifičnim analizama RNA koje kodiraju proteine ​​uključene u bubrežnu glukoneogenezu i renalnu reapsorpciju glukoze. Poređenje transkriptoma otkrilo je 1833 transkripta različito izraženih između kontrola tretiranih nosačem i STZ (dodatna tabela S2; FDR < 5="" posto),="" 1784="" transkripta="" različito="" izraženih="" između="" ckot="" miševa="" tretiranih="" nosačem="" i="" stz="" (dodatna="" tabela="" s3;="" fdr3="" ekspresirani="" postotak="" 1),="" između="" kontrole="" tretirane="" vozilom="" i="" c="" kot="" miševa="" (dodatna="" tabela="" s4;="">< 5%),="" and="" 2667="" transcripts="" differentially="" expressed="" between="" stz-treated="" control="" and="" c="" kot="" mice="" (supplementary="" table="" s5;="" fdr="" <="" 5%).="" gene="" ontology="" analysis="" of="" differentially="" expressed="" transcripts="" revealed="" enrichment="" of="" pathways="" related="" to="" lipid,="" amino="" acid,="" and="" carboxylic="" acid="" metabolism,="" and="" organic="" anion="" transport="" between="" control="" and="" cko="" mice="" in="" both="" vehicle="" and="" stz="" treatment="" groups="" (figure="" 4a="" and="" b,="" respectively,="" and="" supplementary="" tables="" s6="" and="" s7,="" respectively).="" a="" total="" of="" 284="" transcripts="" exhibited="" genotype-by="" treatment="" interaction="" effects="" (supplementary="" table="" s8;="" fdr="" <="" 5%),="" including="" glud1="" and="" g6pc="" transcripts="" encoding="" enzymes="" involved="" in="" renal="" gluconeogenesis="" (see="" below).="" gene="" ontology="" analysis="" of="" transcripts="" with="" significant="" interaction="" showed="" enrichment="" of="" only="" a="" limited="" number="" of="" pathways,="" mainly="" related="" to="" lipid="" metabolism="" and="" organic="" anion="" transport="" (figure="" 4c="" and="" supplementary="" table="" s9).="" among="" the="" genes="" encoding="" transporters="" involved="" in="" glucose="" reabsorption="" in="" the="" proximal="" tubule="" (sglt1,="" sglt2,="" glut1,="" and="" glut2),="" only="" glut1="" (slc2a1)="" displayed="" higher="" expression="" in="">bubrezidijabetičkih cKOt miševa u poređenju sa dijabetičkim kontrolama (dodatna tabela S5).

Slika 3|Karakteristike unosa vode i urina kontrolnih miševa tretiranih nosačem ili streptozotocinom (STZ) i c Kot miševa. (a) 24-satni unos vode. n=8 za kontrolne ili cKOt miševe tretirane vozilom, i n=9 za kontrolne ili cKOt miševe tretirane STZ. (b) 24-satni volumen urina. n=8 za kontrolne ili cKOt miševe tretirane vozilom, i n=9 za kontrolne ili cKOt miševe tretirane STZ. (c) Osmolalnost urina. n=8 za kontrolne miševe tretirane vozilom, n=7 za c Kot miševe tretirane vozilom, i n=9 za kontrolne miševe tretirane STZ ili cKOt miševe. (d) Frakciono izlučivanje (Fe) glukoze. n=8 kontrolne ili cKOt miševe tretirane forvehicle, i n=9 za kontrolne ili cKOt miševe tretirane STZ. (e) Fe natrijuma. n=8 za kontrolne miševe tretirane vozilom, n=7 za c Kot miševe tretirane vozilom, i n=9 za kontrolne miševe tretirane sa STZ ili cKOt miševe. (f) Fe fosfata. n=8 za kontrolne miševe tretirane vozilom, n=7 za cKOt miševe tretirane vozilom, n=8 za kontrolne miševe tretirane STZ, i n=9 za STZ tretirane cKOt miševi. (g) Fe magnezijuma. n=8 kontrolne miševe tretirane vozilom, n=7 za c Kot miševe tretirane vozilom, i n=9 za kontrolne miševe tretirane STZ ili cKOt miševe. (h) Fe kalcijuma. n=8 kontrolne miševe tretirane vozilom, n=7 za c Kot miševe tretirane vozilom, i n=9 za kontrolne miševe tretirane STZ ili cKOt miševe. Znači SEM je dat. Korištena je dvosmjerna analiza varijanse sa Sidak testom višestrukih poređenja. *P < {{50}}.05,="" †p="">< 0,01,="" ‡p="">< 0,001.="" bw,="" tjelesna="">

2 glavna glukoneogena prekursora ububregarelaktat i glutamin.29 Kao što je prikazano na slici 4d i e i Dodatnoj tabeli S5, nivoi ekspresije proteina koji kodiraju transkripte uključenih u glukoneogenezu glutamina u bubrezima (Snat3, Gls i Glud1) su povećani u bubrezima cKOt miševa tretiranih STZ u poređenju sa kontrolama tretiranim STZ. Suprotno tome, smanjena je ekspresija mRNA koja kodira glutamat amonijak ligazu (Gull), koja preokreće GLS-drivenini početni korak glutaminolize. Slično, nivoi ekspresije mRNA koje kodiraju 2 enzima u zajedničkom dijelu glukoneogenog puta (naime, fosfoenolpiruvat karboksikinaza [Pck1] i glukoza-6-fosfataza [G6pc]), bili su viši kod STZ tretiranih cKOtmiša. Veća ekspresija GLUD1 i PCK1 u bubrezima dijabetičkih cKOt miševa potvrđena je na nivou proteina kapilarnim Western blotom (slika 4f i dodatna slika S3). U jetri dijabetičkih miševa, nivo ekspresije GLUD1 nije se razlikovao između kontrolnih i c Kot miševa, a ekspresija PCK1 bila je niža kod c Kot miševa (dodatna slika S4). Treba napomenuti da su nivoi ekspresije Glud1, Snat3, fruktoze-1,6-bifosfata 2 (Fbp2) i Glut1 bili viši, a nivoi ekspresije Glul, Fbp1 i Glut2 bili su niži ububrezicKOt miševa tretiranih vozilom u poređenju sa kontrolama tretiranim vozilom.

Slika 4|Genska ontologija (GO) Analiza obogaćivanja "biološkog procesa". (a) GO analiza transkripata različito izraženih ububrezikontrola tretirana vozilom i c Kot miševa. (b) GO analiza transkripata različito eksprimiranih u bubrezima kontrolnih miševa tretiranih streptozotocinom (STZ) i Kot miševa. (c) GO analiza transkripata koji pokazuju efekat interakcije genotip-po-tretman. Tačkasti grafikoni za prva 20 najznačajnija pojma (Q vrijednost < 0.01).="" filtrirani="" su="" suvišni="" termini.="" generacija="" predstavlja="" dio="" značajnih="" gena="" označenih="" prikazanim="" terminom.="" veličina="" tačke="" predstavlja="" broj="" značajnih="" gena="" označenih="" prikazanim="" terminom.="" n="6" po="" uslovu.="" (d)="" dijagrami="" promjene="" nabora="" za="" enzime="" koji="" kodiraju="" transkripte="" i="" transkripte="" uključene="" u="" bubrežnu="" glukoneogenezu.="" vrijednosti="" nivoa="" ekspresije="" ekstrahovane="" su="" iz="" dodatnih="" tabela="" s2,="" s3,="" s4="" i="" s5.="" *p="">< 0.05,="" †p="">< 0,01,="" ‡p="">< 0,001.="" (e)="" šematski="" prikaz="" ćelija="" proksimalnih="" tubula="" sa="" glavnim="" proteinima/enzimima="" uključenim="" u="" proces="" renalne="" glukoneogeneze.="" crveno:="" p="" vrijednosti="" za="" diferencijalnu="" ekspresiju="" između="" kontrole="" tretirane="" stz="" i="" c="" kot="" miševa.="" plavo:="" p="" vrijednosti="" za="" diferencijalnu="" ekspresiju="" između="" kontrole="" tretirane="" vozilom="" i="" c="" kot="" miševa.="" crvene="" i="" plave="" strelice="" označavaju="" povećanu="" ([)="" ili="" smanjenu="" (y)="" ekspresiju="" inckot="" miševa.="" (f)="" kvantitativna="" analiza="" kapilarnih="" western="" blotova="" za="" glutamat="" dehidrogenazu="" (glud1)="" i="" fosfoenolpiruvat="" karboksikinazu="" (pck1;="" dodatne="" slike="" s2="" ​​i="" s3,="" respektivno)="">bubreziiz fiziološke otopine puferirane fosfatom – ili kontrole tretirane STZ i c Kot miševa (n=6 uslov). Korištena je dvosmjerna analiza varijanse sa Sidak testom višestrukih poređenja. *P < 0.05,="" †p="">< 0.01,="" ‡p="">< 0,001.="" au,="" proizvoljna="" jedinica;fbp1/2,="" fruktoza-1,6-bifosfataza="" 1/2;="" g6pc,="" glukoza{17}}fosfataza;="" gls,="" glutaminaza;="" glul,="" glutamin="" sintetaza;="" glut2,="" transporter="" glukoze2;="" nhe3,="" natrijum-vodonik="" izmenjivač="" 3;="" p="" podešavanje,="" p="" podešeno;="" pc,="" piruvat="" karboksilaza;="" snat3,="" glutamin="" transporter;="" tca,="" xxx="">

Višestruki mehanizmi koji direktno ili indirektno utječu na glukoneogeni put promijenjeni su u bubrezima dijabetičara KOt miševa

Glukoneogeni put ububregmože biti pod uticajemcirkadijanski satbilo direktno, kroz transkripcijsku, translacijsku ili posttranslacijsku kontrolu proteina uključenih u bubrežnu glukoneogenezu, ili indirektno, utječući na druge bubrežne mehanizme koji su intrinzično povezani s proizvodnjom glukoze u proksimalnom tubulu. Transkripcijski faktori, koaktivatori i korepresori koji upravljaju transkripcijom glukoneogenih enzima djelomično su okarakterisani u jetri, bubrezima i drugim tkivima. Slike 5a i b sumiraju promjene u nivoima ekspresije transkripata koji kodiraju poznate transkripcione regulatore glukoneogeneze ububrezikontrolnih i cKOt miševa (vidi i dodatne tabele S4 i S5). Među analiziranim transkriptima, oni koji kodiraju receptor d aktiviran proliferatorom peroksizoma (PPARd) i kriptohrome 1 i 2 pokazali su značajno povećanje, dok je nuklearni receptor NR1D1 (također poznat kao REV-Erba) značajno smanjen u bubrezima cKOt miševa- i STvehic-a. tretirane životinje u poređenju sa kontrolama sa istim tretmanom. Ekspresija koaktivatora g receptora aktiviranog peroksizomomproliferatorom 1-a (Pgc1a,Ppargc1a) povećana je kod cKOt miševa tretiranih STZ u poređenju sa kontrolama tretiranim STZ, a ekspresija glukokortikoidnog receptora (Gr, Nr3c1) je smanjena u cKOtm tretiranom vehikulumom u poređenju sa kontrolama tretiranim vozilom. Ekspresija proteina vilice O box (Foxo1), nuklearnog faktora hepatocita 4a (Hnf4a), cikličkog adenozin monofosfata koji reaguje na vezujući element (Creb1), Para, Sirt1, CREB-vezujući protein (Cbp, Crebbp), CREB-regulirani transkripcijski22Crtc koaktivac i histon deacetilaza 3 (Hdac3) nije bila pod utjecajem tretmana ili genotipa

Slika 5|(a) Dijagrami promjene preklopa za transkripte koji kodiraju faktore transkripcije, koaktivatore i kopresore koji upravljaju transkripcijom glukoneogenih enzima kod kontrolnih i cKOt miševa tretiranih nosačem i streptozotocinom (STZ). Vrijednosti nivoa ekspresije izvađene su iz dodatnih tabela S2, S3, S4 i S5. *P < 0.{{10}}5,="" †p="">< 0,01,="" ‡p="">< 0,001.="" (b)="" šematski="" prikaz="" podataka="" prikazanih="" na="" slici="" 5a.="" crveno:="" p="" vrijednosti="" za="" diferencijalnu="" ekspresiju="" između="" kontrolnih="" miševa="" tretiranih="" stz="" i="" ckot="" miševa.="" plavo:="" p="" vrijednosti="" za="" diferencijalnu="" ekspresiju="" između="" kontrolnih="" miševa="" tretiranih="" vozilom="" i="" ckot="" miševa.="" crvene="" i="" plave="" strelice="" ukazuju="" na="" povećanu="" ([)="" ili="" smanjenu="" (y)="" ekspresiju="" kod="" ckot="" miševa.="" au,="" proizvoljna="" jedinica;="" cbp,="" xxx;="" creb1,="" xxx;="" crtc2,="" xxx;="" cry1,="" xxx;="" cry2,="" xxx;="" foxo1,="" xxx;="" g6pc,="" xxx;="" gr,="" xxx;="" hdac3,="" xxx;="" hnf4a="" ,="" xxx;="" nrld1,="" xxx;="" pck1,="" xxx;="" ppara,="" xxx;="" pparg,="" xxx;="" sirt1,="">

Budući da je acidoza glavni indirektni stimulans za renalglukoneogenezu, mjerili smo pH krvi i urina, krvne plinove, izlučivanje amonijaka (NH3/NH4þ) mokraćom i titrabilnu kiselost. Kao što je prikazano na slici 6, pH krvi bio je viši kod cKOt miševa tretiranih nosačem u poređenju sa kontrolama tretiranim nosačem, ali se nije razlikovao između dijabetičkih miševa oba genotipa. Bikarbonat u plazmi je bio niži u dijabetičarskim kontrolama u poređenju sa kontrolama koje su tretirane vehikulom; međutim, nije pronađena razlika u plazma bikarbonatu između dijabetičara i cKOt miševa. Tretman ili genotip nisu utjecali na višak baze plazme i pH urina. Međutim, miševi cKOt tretirani STZ izlučili su povećane količine amonijaka i titrabilne kiselosti u poređenju sa kontrolama tretiranim STZ. Analiza transkripata koji kodiraju proteine ​​uključene u rukovanje renalacid-bazom otkrila je smanjenu ekspresiju izmjenjivača natrijum vodonika NHE3 (Slc9a3; vidi sliku 4d i e) i anjonskog izmjenjivača AE1 (Slc4a1) i povećana ekspresija karboanhidraze II (Car2) i b1 podjedinice Hþ-ATPaze (Atp6v1b1). Međutim, nije uočena razlika u nivoima ekspresije hlorid-protonskog antiportera Clcn5, b2 podjedinice Hþ-ATPaze (Atp6v1b2), transportera amonijaka Rhcg, kotransportera natrijum bikarbonata NBCE1 (Slc4a4), natrijum-zavisnog hlorid-bikarbonatnog izmenjivača N4DC(Sl) anionski izmjenjivač pendrin (Pds, Slc26a4) indijabetički cKOt miševi u usporedbi s dijabetičkim kontrolama (dodatna tabela S5). Treba napomenuti da su nivoi ekspresije Nhe3 bili niži u bubrezima cKOt miševa tretiranih nosačem u poređenju sa kontrolama tretiranim nosačem (Slika 4d i Dodatna tabela S4).

DISKUSIJA

Dobro je utvrđeno da disfunkcijacirkadijanski satMehanizam ili neusklađenost između biološkog sata i društvenih i okolišnih znakova uzrokovanih (npr. smjenskim radom), ovisnosti o računaru/internetu, čestim zastojima ili poremećajima spavanja, glavni su faktori rizika za patogenezu i/ili napredovanje raznih kroničnih bolesti. Međutim, doprinos tkivnih intrinzičnih lokalnih cirkadijalnih satova naspram sistemskih cirkadijanskih znakova specifičnim patofiziološkim procesima nije široko istražen. Pretpostavili smo da perturbacije u intrinzičnim bubrežnim cirkadijalnim satovima mogu doprinijeti razvoju DN i/ili dijabetičke hiperglikemije. Da bismo testirali ove hipoteze, koristili smo 2 modela miša (tj. cKOp i cKOt miševi) razvijena na genetskoj pozadini C57BL/6 za koju je poznato da je relativno otporan na DN. U oba modela, nedostatak BMAL1 kod dijabetičkih stanja nije rezultirao dodatnom albuminurijom ili razlikom u GFR, 2 glavna obilježja bolesti. Ovo ili sugerira da transgeni miševi na pozadini C57BL/6 možda nisu odgovarajući model za proučavanje hipoteze "drugog pogotka" u DN ili da su na patogenezu i/ili progresiju DN više utječu sistemske cirkadijalne perturbacije, a ne intrinzični bubrežni cirkadijalni satovi. Testiranje hipoteze o interakciji između dijabetičke hiperglikemije i intrinzične bubrežne funkcijecirkadijanski satoviotkrili su poboljšani bubrežni tubularni glukoneogeni put i pogoršanu hiperglikemiju kod dijabetičkih cKOt miševa. Analiza ekspresije mRNK i proteina pokazala je da su glukoneogeneza glutamina i zajednički dio glukoneogenog puta pojačani kod dijabetičkih cKOt miševa u usporedbi s kontrolnom skupinom dijabetesa. Ovo zapažanje sugerira da su oba glavna glukoneogena supstrata ububreg(tj. glutamin i laktat) mogu doprinijeti pogoršanju hiperglikemije kod cKOt miševa.

Slika 6|pH plazme, bikarbonat plazme, višak baze plazme, pH urina, 24-satnu titrabilnu kiselost urina (TA) i izlučivanje amonija kod kontrolnih i cKOt miševa tretiranih nosačem ili streptozotocinom (STZ). n ¼ 6–9. Korištena je dvosmjerna analiza varijanse sa Sidak testom višestrukih poređenja. *P < 0.05,="" †p="">< 0.01,="" ‡p=""><>

BubregGlukoneogeneza je zadobila sve veći interes posljednjih godina zbog potencijalno važne uloge glukoze proizvedene u bubrežnim tubulima u sistemskoj metaboličkoj ravnoteži i bolesti bubrega (prethodno pregledano2,30). Bubrezi su odgovorni za 40 posto ukupne tjelesne proizvodnje glukoze de novo kod ljudi koji su gladovali preko noći.29 Udijabetesa, i jetra i bubrezi povećavaju sintezu glukoze, ali relativno povećanje bubrežne glukoneogeneze je mnogo jače nego u jetri. Studije na jetri su pokazale dacirkadijanski satmože višestruko utjecati na glukoneogenezu jetrecirkadijanski sat-kontrolisani ćelijski mehanizmi. Zhang et al. su pokazali da cirkadijalni represori kriptohromi 1 i 2 inhibiraju ekspresiju glukoneogenih enzima blokiranjem ciklikadenozin monofosfata zavisne aktivacije CREB1.31Li et al. su pokazali da NR1D1, koji formira kritični negativni ekstremitet u jezgru cirkadijalnog sata, potiskuje transkripciju Pck1 i G6pc.32 Kao što se i očekivalo za cirkadijalne clockgene kod Bmal1 nokaut miševa,33 naši rezultati su pokazali snažnu regulaciju Cry1/Cry2 transkripta regulacije i snažno smanjenje transkripata. Nr1d1 transkript ububrezidijabetičkih cKOtmiša u poređenju sa kontrolnom populacijom dijabetičara. Ovi kontradiktorni rezultati mogu ukazivati ​​na specifičnost tkiva u regulaciji glukoneogeneze pomoću elemenata glavnog sata. Zanimljivo,bubrezidijabetičkih cKOt miševa pokazali su snažnu indukciju Ppard-a, za koju se pokazalo da dramatično stimulira ekspresiju Pck1 u mišićima.34 Konačno, ekspresija mRNA koja kodira PGC1a, kritični koaktivator FoxO1, transkripcijski faktor koji kontrolira ekspresiju glukoneogenih enzima i jetre u oba bubrega. bio je povećan u bubrezima dijabetičkih cKOtmiša. Kolektivno, analiza bubrežnih transkriptoma otkrila je da dijabetički cKOt miševi pokazuju značajne promjene u nekoliko ćelijskih puteva uključenih u kontrolu glukoneogeneze ububregi/ili druga tkiva.

Procjena potencijalnih mehanizama putem kojih secirkadijanskisatmože uticati na glukoneogeni put kod dijabetičarabubregotkrili su nekoliko karakteristika kompenziranog kiselinsko-baznog statusa krvi, uključujući povećano izlučivanje amonijaka u urinu i titrabilnu kiselost. Ova zapažanja su uporedila transkriptomske podatke koji su pokazali smanjenje nivoa ekspresije transkripta koji kodira NHE3, transportera koji igra ključnu ulogu u rukovanju kiselinskom bazom u proksimalnim tubulima, zajedno sa potencijalno kompenzatornim povećanjem ekspresije gena koji kodira Atp6v1b1 podjedinicu HþATPaze koja je uključena u HþATPazu. distalnog nefrona. Direktna kontrola ekspresije Nhe3 pomoću cirkadijalnog sata je demonstrirana i na nivou transkripcije16 i na nivou ekspresije proteina.35 Dakle, intracelularna acidifikacija zbog smanjene ekspresije NHE3 može se smatrati mogućim uzrokom povećane glukoneogeneze u ćelijama proksimalnih tubula cKOt miševa. Ovi rezultati su paralelni nalazima Onishija i saradnika,36 koji su pokazali da nokautiranje NHE3 specifično za tubule rezultira povećanom ekspresijom glukoneogenih enzima u bubrezima. Poboljšanje zajedničkog dijela glukoneogenog puta koji ograničava brzinu (Pck1 i G6pc) kod dijabetičkih cKOt miševa može dodatno pogoršati intracelularnu acidifikaciju putem poboljšanja glutaminske glukoneogeneze, metaboličkog procesa koji stvara ione vodika. Zanimljivo je da je ekspresija Nhe3, Glul, Glud1 i Snat3, kao i nekoliko transkripto-kodirajućih faktora transkripcije, koaktivatora ili corepresora koji upravljaju transkripcijom glukoneogenih enzima (Gr, Ppard, Nr1d1, Cry1 i Cry2) modificirana na STZ sličan način. i cKOt miševi tretirani vozilima. Ovo sugerira da je renalglukoneogeneza također poboljšana kod cKOt miševa tretiranih nosačem. U nedijabetičkim stanjima, odsustvo hiperglikemije incKOt miševa može se uvjerljivo objasniti pojačanim metabolizmom ove pretjerano sintetizirane glukoze u svim tkivima koja metaboliziraju glukozu, uključujućibubreg.

Kakav je značaj ovih nalaza za patogenezudijabetesakod ljudi? Dobro je utvrđeno da ritam hranjenja igra važnu ulogu u uvlačenju perifernih cirkadijalnih satova.37 Komponente hrane (npr. visoka sol,38 dijeta s niskim udjelom ugljikohidrata i bogata proteinima,39 i ketogena dijeta40) i parakrini/autokrini faktori vođeni unosom hrane (npr. , kortikosteroidi41) pokazalo se da imaju snažan utjecaj na cirkadijalne ritmove ububreg. Nekoliko velikih grupa stanovništva je periodično ili stalno izloženo promijenjenom ili poremećenom unosu hrane. Na primjer, do w20 do 25 posto zaposlenih u Sjevernoj Americi i Europi obavlja posao u smjeni, što je povezano s izmijenjenim obrascem hranjenja.42 Druga grupa koja brzo raste sa pogođenim dijetalnim ponašanjem su teški ovisnici o internetu, koji predstavljaju, prema trenutnim procjenama, 6 procenat do 8 procenata opšte populacije.43 Poremećaji spavanja,44 hronična bolest bubrega,45 i neki lekovi (npr. cisplatin46) takođe su pokazali da značajno narušavaju cirkadijalne ritmove bubrega. Stoga se može nagađati da se kod značajnog dijela dijabetičara hiperglikemija može dodatno pogoršati zbog disregulacije cirkadijalnih satova u perifernim tkivima, uključujući intrinzikrenecirkadijanski satovi. U tom smislu, veliki broj studija je pokazao snažnu povezanost između smjenskog rada i rizika od razvoja dijabetesa (prethodno pregledano47). Naši rezultati zajedno pružaju novu molekularnu vezu između cirkadijalnog sistema i patofiziologijedijabetesa.

Cistanche može spriječiti bolest bubrega

OTKRIVANJE

Svi autori su se izjasnili da nema suprotstavljenih interesa.

ZAHVALNICA

Ovaj rad je podržan od strane Švicarske nacionalne naučne fondacije za istraživanje 310030-188499 (za DF). Dio ovog rada je dostavljen kao sažetak na Godišnjem sastanku Američkog društva za nefrologiju 2021.

DOPRINOSI AUTORA

HAIRY, FG i DF dizajnirali su studiju; Eksperimenti su izveli CA, GC, DO, YB i AG; CA, GC, DO, SP, LM i HAIY analizirali su podatke; CA i HAIY su napravili figure; DF i HAIY su napisali rukopis. Svi autori su odobrili konačnu verziju rukopisa.

DODATNI MATERIJAL

Dodatni fajl (PDF)

Slika S1. Coomassie plavo bojenje proteina urina kod kontrolnih miševa tretiranih vehikulom ili streptozotocinom (STZ) i cKOt miševa.

Slika S2. (A) Masson trihromno bojenjebubregsekcije kontrolnih miševa tretiranih vozilom ili streptozotocinom (STZ) i cKOt miševa. (B) Bojenje periodičnom kiselinom–Schiffom (PAS) sekcija bubrega kontrolnih i cKOt miševa tretiranih vehikulom ili streptozotocinom (STZ).

Slika S3. Kapilarna Western blot analiza ekspresije glutamatdehidrogenaze 1 (GLUD1; A) i fosfoenolpiruvatkarboksikinaze (PCK1; B) ububrezikontrolnih i cKOt miševa tretiranih nosačem ili streptozotocinom (STZ).

Slika S4. Kapilarna Western blot analiza ekspresije glutamatdehidrogenaze 1 (GLUD1; A) i fosfoenolpiruvatkarboksikinaze (PCK1; B) u jetri kontrolnih i cKOt miševa tretiranih nosačem ili streptozotocinom (STZ).

Tabela S1. Hemija plazme kod kontrolnih i cKOt miševa ubrizganih nosačem ili streptozotocinom (STZ). Dodatni fajlovi (Excel)

Tabela S2. Transkriptom: kontrola streptozotocina (STZ) naspram kontrolne fiziološke otopine puferirane s fosfatom (PBS).

Tabela S3. Transkriptom: nokaut (KO) streptozotocin (STZ) naspram KO fiziološkog rastvora puferovanog fosfatom (PBS).

Tabela S4. Transkriptom: nokautiranje (KO) fosfatnog pufera (PBS) u odnosu na kontrolni PBS.

Tabela S5. Transkriptom: nokaut (KO) streptozotocin (STZ) naspram kontrolnog STZ.

Tabela S6. Obogaćivanje genske ontologije (GO) za nokaut (KO) fosfatno puferiranu fiziološku otopinu (PBS) u odnosu na kontrolni PBS.

Tabela S7. Obogaćivanje genske ontologije (GO) za nokaut (KO)streptozotocin (STZ) u odnosu na kontrolni STZ.

Tabela S8. Transkriptom: interakcija genotip-po-tretman.

Tabela S9. Obogaćivanje genske ontologije (GO) za interakciju.

Tabela S10. Statistika.

REFERENCE

1. Vallon V. Transporteri glukoze ububregu zdravlju i bolesti.Pflugers Arch. 2020;472:1345–1370.

2. Gerich JE. Uloga bubrega u normalnoj homeostazi glukoze iu hiperglikemijidijabetesamelitus: terapeutske implikacije. DiabetMed. 2010;27:136–142.

3. Mithieux G, Gautier-Stein A, Rajas F, et al. Doprinos crijeva i bubrega protoku glukoze u različitom nutritivnom statusu pacova. CompBiochem Physiol B Biochem Mol Biol. 2006;143:195–200.

4. Gheith O, Farouk N, Nampoory N, et al. Dijabetička bolest bubrega: svjetska razlika u prevalenci i faktorima rizika. J Ethnopharmacol. 2016;5:49–56.

5. Firsov D, Bonny O. Cirkadijalni ritmovi i bubrezi. Nat Rev Nephrol.2018;14:626–635.

6. Ansermet C, Centeno G, Nikolaeva S, et al. Intrinzičnocirkadijanski satinpodociti kontrolišu brzinu glomerularne filtracije. Sci Rep. 2019;9:16089.

7. Stow LR, Richards J, Cheng KY, et al. Cirkadijalni proteinski period 1 doprinosi kontroli krvnog pritiska i koordinirano reguliše gene za transport natrijuma. Hipertenzija. 2012;59:1151–1156.

8. Zuber AM, Centeno G, Pradervand S, et al. Molekularni sat je uključen u predviđanje cirkadijalnog prilagođavanja bubrežne funkcije. Proc Natl Acad Sci U SA. 2009;106:16523–16528.

9. Nikolaeva S, Ansermet C, Centeno G, et al. Nefron-specifična delecija gena Bmal1 cirkadijalnog sata mijenja plazmu i bubrežni metabolom i narušava dispoziciju lijeka. J Am Soc Nephrol.2016;27:2997–3004.

10. Tokonami N, Mordasini D, Pradervand S, et al. Lokalni bubrežnicirkadijanski satovikontrolišu homeostazu tečnosti i elektrolita i krvni pritisak. J Am Soc Nephrol. 2014;25:1430–1439.

11. Motohashi H, Tahara Y, Whittaker DS, et al. Cirkadijalni sat je poremećen kod miševa sa tubulointersticijskom nefropatijom izazvanom adeninom.BubregInt. 2020;97:728–740.

12. Charles LE, Gu JK, Fekedulegn D, et al. Povezanost između smjenskog rada i brzine glomerularne filtracije kod policijskih službenika. J Occup Environ Med.2013;55:1323–1328.

13. Boogaard PJ, Cabo ME. Povećano izlučivanje albumina kod industrijskih radnika zbog smjenjivanja posla, a ne zbog produžene izloženosti niskim koncentracijama kloriranih ugljovodonika. Occup Environ Med.1994;51:638–641.

14. Kim SJ, Kim JW, Cho YS, et al. Utjecaj cirkadijalnog poremećaja povezanog s umjetnim svjetlom noću na obrasce mokrenja kod radnika u smjenama. IntNeurourol J. 2019; 23:258–264.

15. Uhm JY, Kim HR, Kang GH, et al. Povezanost između smjenskog rada i kronične bolesti bubrega kod radnika na fizičkom radu koristeći podatke iz Nacionalne ankete o zdravlju i ishrani u Koreji (KNHANES2011-2014). Ann Occup Environ Med. 2018;30:69.

16. Solocinski K, Richards J, All S, et al. Regulacija transkripcije NHE3 i SGLT1 od stranecirkadijanski satprotein Per1 u ćelijama proksimalnih tubula.Am J Physiol Renal Physiol. 2015;309:F933–F942.

17. Wolf G. Regulacija ćelijskog ciklusa u dijabetičkoj nefropatiji. Kidney Int Suppl.2000;77:S59–S66.

18. Papadimitriou A, Silva KC, Peixoto EB, et al. Teobromin povećava NAD(þ)/Sirt-1 aktivnost i štiti bubrege kod dijabetičkih stanja. Am J Physiol Renal Physiol. 2015;308:F209–F225.

19. Perlis M, Ramsey KM, Bass J. Molekularni sat je metabolički reostat. Diabetes Obes Metab. 2015;17(suppl 1):99–105.

20. Ramanathan C, Kathale ND, Liu D, et al. mTOR signalizacija regulira centralno i perifernocirkadijanski satfunkcija. PLoS Genet. 2018;14:e1007369.

21. Sakaguchi M, Isono M, Isshiki K, et al. Inhibicija mTOR signalizacije sa rapamicinom ublažava hipertrofiju bubrega kod ranih dijabetičkih miševa.Biochem Biophys Res Commun. 2006;340:296–301.

22. Godel M, Hartleben B, Herbach N, et al. Uloga mTOR u funkciji podocita i dijabetičkoj nefropatiji kod ljudi i miševa. J Clin Invest.2011;121:2197–2209.

23. Lenoir O, Jasiek M, Henrique C, et al. Endotelna stanica i autofagija podocita sinergijski štite oddijabetesa-indukovana glomeruloskleroza. Autofagija. 2015;11:1130–1145.

24. Lu Q, Zhou Y, Hao M, et al. mTOR potiče apoptozu mezangijalnih ćelija izazvanu oksidativnim stresom kod dijabetičke nefropatije. Mol Cell Endocrinol.2018;473:31–43.

25. Chan JC. Brzo određivanje titrabilne kiseline i amonijaka u urinu i procjena zamrzavanja kao metode konzerviranja. ClinBiochem. 1972; 5:94–98.

26. Eisner C, Faulhaber-Walter R, Wang Y, et al. Glavni doprinos tubularne sekrecije klirensu kreatinina kod miševa. Kidney Int. 2010;77:519–526.

27. Ritchie ME, Phipson B, Wu D, et al. limma pokreće diferencijalne ekspresione analize za RNA-sekvenciranje i studije mikromreža. Nukleinske kiseline Res.2015;43:e47.

28. Yu G, Wang LG, Han Y, et al. profil klastera: R paket za poređenje bioloških tema među klasterima gena. Omics. 2012;16:284–287.

29. Gerich JE, Meyer C, Woerle HJ, et al. Bubrežna glukoneogeneza: njen značaj u humanoj homeostazi glukoze.DijabetesCare. 2001;24:382–391.

30. Legouis D, Faivre A, Cippà PE, et al. Bubrežna glukoneogeneza: nepotcijenjena ulogabubregu sistemskom metabolizmu glukoze [e pub ispred štampe]. Transplantacija Nephrol Dial. Objavljeno na mreži 28. novembra 2020. https://doi.org/10.1093/ndt/gfaa302.

31. Zhang EE, Liu Y, Dentin R, et al. Kriptokrom posreduje u cirkadijanskoj regulaciji cAMP signalizacije i jetrenoj glukoneogenezi. Nat Med.2010;16:1152–1156.

32. Li X, Xu M, Wang F, et al. Interakcija ApoA-IV sa NR4A1 i NR1D1 potiskuje transkripciju G6Paze i PEPCK: regulacija hepatične glukoneogeneze posredovana nuklearnim receptorom kod miševa i ćelijske linije humanih hepatocita. PLoS One. 2015;10:e0142098.

33. Weger BD, Gobet C, David FPA, et al. Sistematska analiza diferencijalne ritmičke ekspresije gena jetre posredovane cirkadijanskim satom i ritmovima hranjenja. Proc Natl Acad Sci US A.2021;118:e2015803118.

34. Fan W, Waizenegger W, Lin CS, et al. PPARd promoviše izdržljivost trčanja očuvanjem glukoze. Cell Metab. 2017;25:1186–1193.e1184.

35. Saifur Rohman M, Emoto N, Nonaka H, ​​et al.Cirkadijski satgeni direktno regulišu ekspresiju Na(þ)/H(þ) izmjenjivača NHE3 u bubrezima. Kidney Int. 2005;67:1410–1419.

36. Onishi A, Fu Y, Darshi M, et al. Učinak renalnih tubul-specifičnih nokdauna Na(þ)/H(þ) izmjenjivača NHE3 kod miševa s dijabetesom Akita. Am J PhysiolRenal Physiol. 2019;317:F419–F434.

37. Schibler U, Ripperger J, Brown SA. Periferni cirkadijalni oscilatori kod sisara: vrijeme i hrana. J Biol Rhythms. 2003;18:250–260.

38. Speed ​​JS, Hyndman KA, Roth K, et al. Visok sadržaj natrijuma u ishrani uzrokuje dissinhroniju bubrežnog molekularnog sata kod pacova. Am J Physiol RenalPhysiol. 2018;314:F89–F98.

39. Oishi K, Uchida D, Itoh N. Dijeta s niskim udjelom ugljikohidrata i visokim sadržajem proteina utiče na ritmičku ekspresiju glukoneogenih regulatornih i cirkadijanskih gena sata u perifernim tkivima miša. Chronobiol Int.2012;29:799–809.

40. Oishi K, Uchida D, Ohkura N, et al. Ketogena dijeta remeticirkadijanski sati povećava hipofibrinolitički rizik indukcijom ekspresije inhibitora aktivatora plazminogena-1. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2009;29:1571–1577.

41. Sugino M, Furukawa K, Koinuma S, et al. Diferencijalno uvlačenje perifernih satova kod pacova glukokortikoidom i hranjenjem. Endocrinology.2012;153:2277–2286.

42. Souza RV, Sarmento RA, de Almeida JC, et al. Utjecaj smjenskog rada na navike u ishrani: sistematski pregled. Scand J Work Environ Health. 2019;45:7–21.

43. Kim Y, Park JY, Kim SB, et al. Učinci ovisnosti o internetu na način života i prehrambeno ponašanje korejskih adolescenata. Nutr Res Pract.2010;4:51–57.

44. Canales MT, Holzworth M, Bozorgmehri S, et al. Ekspresija gena sata je izmijenjena kod veterana s apnejom u snu. Physiol Genomics. 2019;51:77–82.

45. Egstrand S, Olgaard K, Lewin E. Cirkadijalni ritmovi mineralnog metabolizma, hronična bolest bubrega – poremećaj mineralnih kostiju. Curr Opin NephrolHypertens. 2020;29:367–377.

46. ​​Cao BB, Li D, Xing X, et al. Utjecaj cisplatina na ekspresiju gena sata u jetri, srcu ibubreg. Biochem Biophys Res Commun.2018;501:593–597.

47. Schilperoort M, Rensen PCN, Kooijman S. Vrijeme je za nove strategije za smanjenje kardiometaboličkog rizika kod radnika u smjenama. Trends Endocrinol Metab.2020;31:952–964.