Odabir botaničkog sastojka za njegu kože trebao bi uključivati ​​više od pronalaženja privlačne biljne priče. Za brend za njegu kože, ugovornog proizvođača ili distributera sastojaka, korisnija pitanja su:

Koja su jedinjenja prisutna u ekstraktu?

Koliko dosljedno proizvođač može kontrolirati njihove koncentracije?

Koji eksperimenti podržavaju predloženu primjenu?

Da li se dokazi odnose na stvarni sastojak koji se kupuje?

Koja su dodatna testiranja potrebna prije lansiranja gotovog proizvoda?

Tehnički dokument koji se razmatra u ovom članku fokusira se naverbaskozid izveden iz Cistancheai njegove predložene primjene u proizvodnji lipida kože, hidrataciji i istraživanjima vezanim za barijere.

Opisuje i proces pročišćavanja i laboratorijske eksperimente upoređujući pročišćeni verbaskozid sa nekoliko ekstrakta Cistanchea i drugim sastojcima.

 

 

16% ekstrakt verbaskozida cistanche

Centralna komercijalna lekcija je jasna: opšti ekstrakt Cistanchea i visoko pročišćeno jedinjenje izvedeno iz Cistanchea ne treba tretirati kao zamjenjive sastojke.

Napomena o dokazima:Rezultati istraživanja u nastavku navedeni su u tekstu kineskog patenta koji je dostavljen za prijevod. Isporučeni materijal ne uključuje originalne brojke, kompletne numeričke skupove podataka, detalje o objavljivanju patenta ili kliničke studije na ljudima. Stoga ga treba čitati kao tehničko otkrivanje, a ne kao nezavisnu potvrdu efikasnosti gotovog proizvoda ili regulatorno odobrenje.

 

1. Šta je Verbascoside?

Verbaskozid je takođe poznat kaoacteoside. Ovo su nazivi za istu hemijsku supstancu, a ne dva različita aktivna sastojka. FDA registar supstanci navodi oba imena pod istim identitetom supstance. (preciznost.fda.gov)

 

 

U priloženom otkriću, verbaskozid je opisan kao feniletanoidni glikozid dobijen iz osušenih mesnatih stabljika vrste Cistanche. Glavni navedeni botanički izvori su:

Cistanche deserticola

Cistanche tubulosa

Cistanche sinensis

Cistanche salsa

Dokument istražuje verbaskozid kao potencijalno botanički aktivni sastojak za lokalne formulacije, s posebnom pažnjom na metabolizam lipida, proizvodnju hijaluronske kiseline, proteine ​​čvrstog spoja i migraciju stanica.

Zašto je ime važno pri kupovini sastojaka

Kada upoređujete ponude dobavljača, zatražite potvrdu:

Botaničke vrste i biljni dio.

Bilo da je materijal cijeli ekstrakt, standardizirani ekstrakt ili pročišćeni spoj.

Izmjereni sadržaj verbaskozida.

Korištena analitička metoda i referentni standard.

Da li navedeni procenat predstavlja test po masi ili procenat hromatografske površine.

Navod za "Cistanche ekstrakt" sam po sebi ne pruža dovoljno informacija da bi se utvrdilo da li odgovara materijalu procijenjenom u određenom eksperimentu.

2. Zašto se otkrivanje fokusira na kožnu barijeru?

Dokument predstavlja koncept istraživanja sa više krajnjih tačaka, a ne jednostavnu tvrdnju o hidrataciji površine.

Njegov predloženi redoslijed je:

Obnavljanje epidermalnih ćelija → jače veze između stanica → podrška lipidima → proizvodnja hijaluronske kiseline → aktivnost vezana za popravak

Da bi istražili ovaj koncept, istraživači su koristili HaCaT ćelije. HaCaT je besmrtna ćelijska linija ljudskih keratinocita uspostavljena kao laboratorijski model za proučavanje epidermalne biologije i keratinizacije. To nije tip ćelije prirodno nazvan "HaCaT" unutar kože osobe. (pmc.ncbi.nlm.nih.gov)

Za kupce sastojaka ova razlika je važna:rezultati u kultivisanim ćelijama su početna tačka istraživanja, a ne zamena za testiranje gotovog proizvoda na ljudskoj koži.

Prijavljene glavne krajnje tačke

Oblast istraživanja	Mjerenja opisana u isporučenom dokumentu	Praktično tumačenje
Odgovor ćelije	CCK-8 test	Krajnja tačka skrininga; dodatne metode bi ojačale tvrdnju o proliferaciji
Aktivnost vezana za lipide	aktivnost sintaze masnih kiselina; ACC , FASN i N-SMase ekspresija	Podržava dalje istraživanje metabolizma lipida, ali ne kvantificira direktno kompletan lipidni profil kožne barijere
Hijaluronska kiselina	sadržaj HA; Ekspresija HAS2, HAS3 i CD44	Podržava dalje istraživanje puteva povezanih s HA
Veza od ćelije do ćelije	Klaudin-1 i nivoi okludina	Mjeri odabrane proteine ​​čvrstog spoja, a ne potpunu funkciju barijere
Aktivnosti vezane za popravke	Test ogrebotine ćelije	In vitro krajnja tačka zatvaranja jaza, a ne kliničko ispitivanje zacjeljivanja rana
Zadržavanje vlage	Zadržavanje mase formulacije na staklenim pločama	Laboratorijski test na nivou formulacije, a ne studija hidratacije na koži

Ova tumačenja proizlaze iz eksperimentalnih metoda opisanih u priloženom tekstu.

 

3. Šta ovo istraživanje čini korisnim za kompanije koje se bave njegom kože?

Otkrivanje uspoređuje nekoliko materijala umjesto da pretpostavlja da svaki sastojak dobiven od Cistanchea daje isti odgovor.

Testirani materijali uključuju:

Ekstrakt polisaharida Cistanche.

Nekoliko ekstrakata koji sadrže feniletanoid-glikozide.

Ekstrakt totalnog feniletanoidnog glikozida.

Echinacoside.

Pročišćeni verbaskozid.

Prema priloženom dokumentu, pročišćeni verbaskozid je pokazao aktivnost na nekoliko izmjerenih krajnjih tačaka. Neki miješani ekstrakti su pokazali aktivnost u određenim testovima, ali ne i u drugim.

Kupovina Takeaway

Kupite specifikaciju koja odgovara vašem razvojnom cilju - ne samo naziv postrojenja.

na primjer:

Ako se vaš projekt temelji na eksperimentima s pročišćenim verbaskozidom, zatražite podatke za pročišćeni materijal.

Ako vaša formulacija koristi standardizirani cijeli ekstrakt, zatražite testiranje tog ekstrakta.

Ako dobavljač citira istraživanje o drugom procesu ekstrakcije, pitajte da li je testirani sastav uporediv sa materijalom koji se nudi.

Dokazi za jednu ocjenu sastojka ne bi trebalo automatski prenijeti na drugu.

4. Kako je Verbascoside pripremljen u Otkrivenju?

Opisani proces ima četiri glavne faze:

Botanički preparat:Osušene mesnate stabljike Cistanchea prethodno obradite i usitnite.

Ekstrakcija:Koristite 50% – 80% vodeni etanol.

obogaćivanje:Odvojite frakcije pomoću AB-8 makroporozne adsorpcijske smole.

pročišćavanje:Koristite hromatografiju na silika gelu, nakon čega slijedi koncentracija i sušenje zamrzavanjem.

Navedena konačna čistoća jenajmanje 98%, iako isporučeni tekst ne uključuje analitičku validaciju ili podatke o seriji koji su potrebni za neovisnu potvrdu te specifikacije.

Kritično proizvodno pitanje: Preostala otapala

Opisani korak hromatografije koristihloroforma i metanola.

Za komercijalni projekat nabavke, zatražite od proizvođača stvarnu listu rastvarača u proizvodnji, kontrole uklanjanja rastvarača i rezultate zaostalih otapala specifičnih za seriju. ICH Q3C pruža farmaceutski okvir za procjenu rizika zaostalih rastvarača; ne treba ga predstavljati kao univerzalni standard kozmetičke prihvatljivosti. (ema.europa.eu)

Nemojte pretpostavljati da "biljnog porijekla" znači "napravljen samo od vode i etanola".

 

5. Šta test zadržavanja vlage zapravo pokazuje?

Isporučeni dokument opisuje poređenje:

Serum koji sadrži2% verbaskozida.

Serum koji sadrži2% ehinakozida.

Serum pozitivne kontrole koji sadrži5% glicerina.

Uzorci su postavljeni na25 stepeni i 50% relativne vlažnosti, a njihova masa je mjerena tokom vremena.

Otkrivanje navodi da je uzorak koji je sadržavao verbaskozid zadržao veću masu pod ovim uslovima.

To je potencijalno korisno zapažanje skrininga formulacije. Međutim, opisana metoda ne utvrđuje:

Vrhunska hidratacija na ljudskoj koži.

Manji transepidermalni gubitak vode.

Klinička superiornost nad glicerinom.

Bolji učinak u svakoj formulaciji.

Da je uočena razlika rezultat samo imenovanog aktivnog, bez potpuno otkrivenog poređenja podudarnih vozila.

Za brend koji planira uporednu tvrdnju, testirajte gotove formulacije koristeći odgovarajuće dizajniranu studiju.

 

6. Praktična lista za nabavku sastojaka Cistanchea

Koristite sljedeća pitanja kada procjenjujete dobavljača ekstrakta Cistanchea ili proizvođača pročišćenog verbaskozida.

Pitanje kupovine	Dokumentacija na zahtjev
Šta je botanički izvor?	Identifikacija vrste, deklaracija o dijelovima biljke i informacije o sljedivosti
Šta se tačno isporučuje?	Puni sastav, uključujući nosače, pomoćna sredstva za obradu i pomoćne tvari gdje je primjenjivo
Koliko je verbaskozida prisutno?	Sertifikat o analizi i metodi ispitivanja specifičan za seriju
Kako se potvrđuje identitet?	Kromatografska identifikacija i referentno-standardne informacije
Koji se rastvarači koriste?	Deklaracija o stvarnom proizvodnom rastvaraču i rezultati ispitivanja rezidualnog otapala
Koliko je konzistentna proizvodnja?	Reprezentativni rezultati iz više serija
Da li je materijal prikladan za predviđenu upotrebu?	Dokumentacija o namjeni i odgovarajući sigurnosni dosije
Hoće li raditi u odabranoj formuli?	Podaci o rastvorljivosti, kompatibilnosti, stabilnosti i razvoju pakovanja
Šta podržava predložene tvrdnje?	Izvještaji o studijama za isti razred sastojaka i, po mogućnosti, gotovu formulaciju

 

Nemojte koristiti "prirodno" kao zaključak o sigurnosti

Isporučeni tekst patenta daje povoljnu izjavu o sigurnosti na osnovu botaničkog porijekla sastojka. Ta izjava zahtijeva kvalifikaciju za komercijalno izdavanje.

FDA objašnjava da izvor sastojka ne određuje njegovu sigurnost: materijali biljnog porijekla također mogu sadržavati toksične ili alergene tvari. Sigurnost se mora procijeniti za predviđene uslove upotrebe. (fda.gov)

Iz tog razloga, umjesto da se oslanjate na "prirodno", "biljno" ili "visoku čistoću" kao samostalna jamstva, zatražite sigurnosnu potporu.

 

7. Kako brend treba da razgovara o istraživanju?

Držite tri sloja odvojeno:

Šta otkrivanje tvrdi.

Šta su izmjereni prijavljeni eksperimenti.

Šta se pokazalo da radi gotov proizvod.

Na primjer, "istraženo u HaCaT stanicama radi aktivnosti povezane s lipidima" materijalno se razlikuje od "klinički dokazano popravlja kožnu barijeru".

Isto tako, upućivanje na liječenje ekcema, liječenje atopijskog dermatitisa ili zacjeljivanje rana ne treba kopirati direktno u obične tvrdnje o kozmetičkim proizvodima. U Sjedinjenim Državama, tvrdnje da se leče bolest ili utiču na strukturu ili funkciju tela mogu dovesti do toga da se proizvod reguliše kao lek. (fda.gov)

Istraživački članak ili patentna referenca nije sama po sebi dozvola za iznošenje terapijskih marketinških tvrdnji.

8. Preporučeni razvojni put

Za posao koji razmatra verbaskozid iz Cistanchea, koristan razvojni slijed je:

Definirajte namjeravanu kategoriju proizvoda i ciljno tržište.

Odaberite razred sastojka i analitičku specifikaciju.

Pregledajte sastav, kontaminante, zaostale rastvarače i sigurnosnu dokumentaciju.

Razvijte prototip i procijenite kompatibilnost sastojaka.

Procijenite stabilnost formulacije i pakovanja.

Sprovesti odgovarajuće mikrobiološke i bezbednosne procene.

Testirajte gotov proizvod u odnosu na predviđene performanse.

Pregledajte konačnu web stranicu, etiketu i jezik oglašavanja prije pokretanja.

Raspon koncentracije u otkriću-0.01%–5.0%-treba se tretirati kao otkriveni raspon, a ne kao univerzalno potvrđena preporuka formulacije.

 

Zaključak za kupce sastojaka

Dostavljeno istraživanje čini verbaskozid izveden iz Cistanchea kandidatom za dalji razvoj njege kože, posebno za projekte koji istražuju hidrataciju i laboratorijske krajnje tačke vezane za barijere.

 

Lista sadržaja Cistanche acteoside

 

Kliknite da biste posjetili različite sadržaje liste ekstrakta acteoside cistanche

 

 

 

Njegova najkorisnija lekcija nije samo da je "Cistanche dobar za kožu." To je tometoda ekstrakcije, sadržaj aktivnog spoja, identitet sastojka i kvalitet dokaza sve utiču na to da li je botanički sastojak prikladan za određeni komercijalni projekat.

Kada se obraćate proizvođaču Cistanchea, počnite s preciznim zahtjevom:

„Molimo da dostavite botanički identitet, specifikaciju verbaskozida, analitičku metodu, reprezentativne potvrde analize, rezultate rezidualnog otapala, sigurnosnu dokumentaciju i smjernice za formulaciju za razred sastojka predloženog za naš projekt.“

Taj zahtjev stvara mnogo jaču osnovu za razvoj proizvoda nego generički upit za biljni ekstrakt u prahu.

 

(54) Naslov pronalaska

Način pripreme verbaskozida i način njegove primjene za poticanje proizvodnje lipida u koži

(57) Sažetak

Pronalazak se odnosi na metodu za pripremu verbaskozida i način njegove primene za podsticanje proizvodnje lipida u koži, koji pripada tehničkoj oblasti njege kože i lokalnih proizvoda.

Metoda se sastoji od sljedećih koraka:

Odabir osušenih mesnatih stabljika biljaka OrobanchaceaeCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, iliCistanche salsa; usitnjavanje stabljika nakon prethodnog tretmana; ekstrahovanje pod refluksom sa 50%-80% vodenim rastvorom etanola dva do četiri puta po jedan do tri sata svaki put; kombinovanje ekstrakata; i koncentriraju ih pod sniženim tlakom sve dok ne ostane miris etanola, čime se dobiva koncentrirana otopina.

Propuštanje koncentrirane otopine kroz kolonu AB-8 makroporozne adsorpcione smole; uzastopno eluiranje dejonizovanom vodom i 30%-50% vodenim rastvorom etanola radi uklanjanja nečistoća; zatim eluiranje ciljnih sastojaka sa 60%-90% vodenim rastvorom etanola; sakupljanje eluata i koncentriranje pod sniženim pritiskom; prečišćavanje hromatografijom na koloni silikagela korišćenjem hloroform-metanola u zapreminskom odnosu od 5:1 do 2:1 kao eluenta; prikupljanje ciljnih frakcija; i koncentriranje pod sniženim pritiskom, nakon čega slijedi sušenje zamrzavanjem, da se dobije pročišćeni verbaskozid.

Blagotvorni efekti navedeni za pronalazak su da verbaskozid štiti kožu i pokazuje poboljšanu aktivnost njege kože kada se ugradi u proizvode.

 

Zahtevi

Tvrdnja 1

Metoda za pripremu verbaskozida, koju karakteriziraju sljedeće korake:

Odabir osušenih mesnatih stabljika biljaka OrobanchaceaeCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, iliCistanche salsa; njihovo usitnjavanje nakon prethodnog tretmana; ekstrahovanje pod refluksom sa 50%-80% vodenim rastvorom etanola dva do četiri puta po jedan do tri sata svaki put; kombinovanje ekstrakata; i koncentriraju ih pod sniženim tlakom sve dok ne ostane miris etanola, čime se dobiva koncentrirana otopina.

Propuštanje koncentrirane otopine kroz kolonu AB-8 makroporozne adsorpcione smole; uzastopno eluiranje dejonizovanom vodom i 30%-50% vodenim rastvorom etanola radi uklanjanja nečistoća; zatim eluiranje ciljnih sastojaka sa 60%-90% vodenim rastvorom etanola; sakupljanje eluata i koncentriranje pod sniženim pritiskom; prečišćavanje hromatografijom na koloni silikagela korišćenjem hloroform-metanola u zapreminskom odnosu od 5:1 do 2:1 kao eluenta; prikupljanje ciljnih frakcija; njihovo koncentriranje pod sniženim pritiskom; i sušenje zamrzavanjem kako bi se dobio pročišćeni verbaskozid čistoće od najmanje 98%.

 

Tvrdnja 2

2. Postupak za pripremu verbaskozida prema patentnom zahtjevu 1, naznačen time što je omjer materijala prema rastvaraču tokom refluks ekstrakcije u rasponu od 1:10 do 1:20, a temperatura ekstrakcije od 60 do 80 stepeni.

 

Tvrdnja 3

2. Postupak za pripremu verbaskozida prema zahtjevu 1, naznačen time što je omjer prečnika i visine kolone AB-8 makroporozne adsorpcione smole u rasponu od 1:8 do 1:15, a brzina protoka elucije je u rasponu od 1 do 3 BV/h.

 

Tvrdnja 4

2. Postupak za pripremu verbaskozida prema zahtjevu 1, naznačen time što uslovi sušenja zamrzavanjem obuhvataju temperaturu u rasponu od -40 do -50 stepeni, vakuumski pritisak u rasponu od 10 do 30 Pa i vrijeme sušenja u rasponu od 12 do 24 sata.

 

Tvrdnja 5

5. Postupak primjene verbaskozida za podsticanje proizvodnje lipida u koži, korištenjem verbaskozida pripremljenog prema bilo kojem od zahtjeva 1-4, naznačen time što postupak primjene uključuje:

Dodavanje verbaskozida lokalnoj bazi proizvoda u prethodno određenom masenom udjelu i jednoliko miješanje da se dobije gotov proizvod; nanošenje gotovog proizvoda na površinu kože jednom ili dva puta dnevno; omogućavanje verbaskozidu da prodre i djeluje na epidermalne HaCaT stanice kako bi se povećala regulacija gena i ekspresije proteina ACC , FASN i N-SMase i povećala aktivnost sintaze masnih kiselina; i nastavak upotrebe od jedne do četiri sedmice kako bi se poboljšala sinteza lipida u koži.

Verbaskozid pospješuje proliferaciju HaCaT stanica, zacjeljivanje rana, ekspresiju proteina u čvrstom spoju i proizvodnju lipida i hijaluronske kiseline, pružajući na taj način funkcije popravljanja barijere sa više ciljeva.

Koristi se u cijelom lancu održavanja barijere kože koji uključuje obnavljanje epidermalnih stanica, poboljšane međućelijske veze, nadopunjavanje lipidnog matriksa i sintezu hijaluronske kiseline kao prirodnog hidratantnog faktora.

 

Tvrdnja 6

6. Metoda primjene prema zahtjevu 5, naznačena time što je maseni udio verbaskozida u proizvodu za lokalnu primjenu u rasponu od 0,01% do 5,0%.

 

Tvrdnja 7

6. Metoda primjene prema zahtjevu 5, naznačena time što se po aplikaciji koristi 0,1-0,5 g gotovog proizvoda, nakon čega slijedi nježna masaža od jedne do tri minute kako bi se poboljšala apsorpcija.

 

Tvrdnja 8

6. Metoda primjene prema zahtjevu 5, naznačena time što je lokalni proizvod medicinski zavoj, proizvod za popravak nakon procedure, pomoćni proizvod za liječenje atopijskog dermatitisa, proizvod za njegu kože posebno namijenjen osjetljivoj koži ili proizvod za intenzivnu hidrataciju i obnavljanje kože.

 

Tvrdnja 9

6. Metoda primjene prema zahtjevu 5, naznačena time što se ekscipijenti mogu dodatno ugraditi tokom primjene verbaskozida.

 

Tvrdnja 10

10. Metoda primjene prema zahtjevu 9, naznačena time što je pomoćna tvar odabrana između ovlaživača, emulgatora, konzervansa, mirisa ili umirujućeg agensa, a oblik doze kompozicije koja sadrži ekscipijent se bira između losiona, kreme, gela, seruma ili otopine za masku.

 

Način pripreme verbaskozida i način njegove primjene za poticanje proizvodnje lipida u koži

 

Technical Field

[0001]Pronalazak pripada tehničkom području njege kože i lokalnih proizvoda. Posebno se odnosi na metodu za pripremu verbaskozida i način njegove primjene za poticanje proizvodnje lipida u koži.

Konkretnije, radi se o metodi pripreme za verbaskozid koji ima za cilj da ispolji efekte na kompletnu sekvencu obnavljanja kožne barijere, obnavljanja epidermalnih ćelija → pojačanih međućelijskih čvrstih spojeva → nadopunjavanja lipida i matriksa → sinteze hijaluronske kiseline → zarastanja rana, za upotrebu u zaštiti kože.

 

Pozadina Art

[0002]Obnavljanje epidermalnih stanica, pojačani međućelijski spojevi, nadopuna lipidnog matriksa, sinteza hijaluronske kiseline i zacjeljivanje rana igraju nezamjenjivu ulogu u održavanju homeostaze kožne barijere.

Obnova epidermalnih ćelija je temelj izgradnje barijere. Ubrzavanjem proliferacije i diferencijacije bazalnih keratinocita, osigurava da se dovoljan broj ćelija kreće prema gore na uredan način, dajući adekvatan ćelijski materijal za formiranje barijere.

Međućelijske spojne strukture, uključujući uske spojeve i dezmozome, učvršćuju novoformirane ćelije zajedno kako bi stvorile gustu, kontinuiranu fizičku barijeru koja se efikasno odupire ulasku vanjskih iritansa.

Lipidni matriks koji ispunjava prostore između ćelija formira organizovanu lamelarnu strukturu i glavno je sredstvo za zatvaranje puteva kroz koje se gubi voda.

Hijaluronska kiselina sintetizirana u epidermisu i dermisu formira moćnu mrežu koja zadržava vodu, opskrbljuje vlagom stratum corneum i održava ćelijsku homeostazu. Također može obezbijediti pogodno vlažno okruženje za ove fiziološke procese i prenijeti ćelijske signale.

Zacjeljivanje rana u velikoj mjeri ovisi o ova četiri procesa. Prvo, hijaluronska kiselina pruža privremenu matricu i signalne funkcije. Tada je potrebna obnova epidermalnih ćelija da bi se rana prekrila. Novoformirane ćelije moraju ponovo uspostaviti čvrste spojeve i nadopuniti lipidni matriks kako bi se dovršila restauracija funkcije barijere.

Ovih pet procesa pokreću se uzastopno tokom zarastanja rana. Njihovo međusobno povezano, koordinirano djelovanje – od obnove stanica i strukturnog ojačanja do punjenja matriksa i skladištenja vode – zajedno dovode do potpuno stabilizirane kožne barijere.

Oni ne pružaju samo fizičku snagu potrebnu da se odupru vanjskim iritantima, već i kapacitet zadržavanja vlage potreban za sprječavanje unutrašnjeg gubitka vode, omogućavajući koži da održi dugoročno zdravlje u stanju dinamičke ravnoteže.

Shodno tome, višedimenzionalna, sistematska rekonstrukcija je fundamentalnija od pukog poboljšanja površinske vlage. Može poboljšati otpornost kože i zadržavanje vlage na izvoru, podržavajući trajnije i stabilnije zdravo stanje.

[0003]Vlastita proizvodnja lipida i hijaluronske kiseline u koži je ključna za održavanje zdravlja kože, otpornost na iritaciju iz okoline i očuvanje mladalačkog stanja.

Kroz zadržavanje vlage i odbranu od mikroorganizama i zagađivača, ove tvari pomažu u osiguravanju normalne fiziološke funkcije kože.

U poređenju sa samim vanjskim suplementacijama, promoviranje vlastite proizvodnje lipida i hijaluronske kiseline u koži opisano je kao fundamentalnija i trajnija strategija koja direktno jača njen "sposobnost samopopravke" i "otpornost".

Za kožne bolesti kao što su atopijski dermatitis i ekcem, jačanje proizvodnje lipida i hijaluronske kiseline opisano je kao središnji preventivni i terapeutski značaj.

Izvor objašnjava da ova stanja često uključuju genetske defekte koji slabe strukturu kože od cigle i maltera, omogućavajući alergenima i iritansima da lakše prodiru i pokreću uporni imunološko-upalni ciklus.

Stoga, identificiranje aktivnih sastojaka koji aktiviraju ključne enzime za sintezu lipida, kao što su FASN i ACC, ili direktno induciraju proizvodnju hijaluronske kiseline, može proaktivno održavati i popraviti proizvodnju ćelijskih lipida i hijaluronske kiseline.

Prema otkrivanju, ova strategija može ublažiti suhoću, svrab i upalne epizode, dok istovremeno smanjuje vanjske okidače na njihovom izvoru, smanjuje učestalost i ozbiljnost recidiva i pomaže da se upravljanje bolešću prebaci s pasivnog liječenja na aktivnu prevenciju.

 

[0004]Verbaskozid je feniletanoidni glikozid i jedan od glavnih sastojaka biljke Orobanchaceae:

Cistanche deserticolaYC Ma;

Cistanche tubulosa(Schenk) Wight;

Cistanche sinensisBeck; i

Cistanche salsa(CA Mey.) Beck.

 

Istraživanja su pokazala da je verbaskozid snažan antioksidans i ima farmakološke aktivnosti uključujući protuupalno, neuroprotektivno, hepatoprotektivno i djelovanje protiv starenja.

Tokom skrininga na agense za zaštitu kože iz brojnih biljaka, pronalazači su otkrili da verbaskozid ne samo da promoviše proliferaciju HaCaT ćelija i ekspresiju proteina čvrstog spoja, već i reguliše aktivnost sintaze masnih kiselina, čime se poboljšava sinteza lipida u koži.

Također aktivira puteve uključene u proizvodnju hijaluronske kiseline i potom pospješuje zacjeljivanje rana.

Ove akcije obuhvataju kompletan redoslijed održavanja i popravke kožne barijere, obnavljanja epidermalnih stanica → poboljšane međućelijske veze → nadopunjavanje lipida i matriksa → sintezu hijaluronske kiseline → zacjeljivanje rana.

Verbascoside se stoga može koristiti kao sredstvo za zaštitu i hidrataciju kože s više ciljeva u funkcionalnoj njezi kože i lokalnim proizvodima.

Primjeri uključuju medicinske zavoje i proizvode za popravku nakon zahvata; pomoćni proizvodi za atopijski dermatitis ili ekcem; proizvodi za njegu kože posebno namijenjeni osjetljivoj koži ili rozacei; i proizvodi za intenzivnu hidrataciju i obnavljanje za svakodnevnu upotrebu.

 

Sažetak pronalaska

[0005]Pronalazak daje metodu za pripremu verbaskozida i metodu njegove primjene za podsticanje proizvodnje lipida u koži.

Metoda pripreme se odnosi na verbaskozid koji je namijenjen da podrži potpuni redoslijed obnavljanja kožne barijere, obnavljanja epidermalnih ćelija → poboljšane međućelijske veze → nadopunjavanje lipida i matriksa → sintezu hijaluronske kiseline → zacjeljivanje rana.

On se bavi tehničkim problemom obezbeđivanja novog osnovnog aktivnog sastojka sa višestrukim efektima za njegu kože ili lokalne proizvode.

Verbaskozid je opisan kao prednost što djeluje u cijelom lancu popravke barijere kože, s efektima boljim od postojećih jednociljnih sastojaka za njegu kože, kao što su sastojci koji pospješuju samo sintezu hijaluronske kiseline, promovišu samo proliferaciju stanica ili samo hidratiziraju.

[0006]Za postizanje gore navedenih ciljeva, pronalazak usvaja sljedeće tehničko rješenje.

[0007]Metoda za pripremu verbaskozida uključuje sljedeće korake.

[0008]Odaberite osušene mesnate stabljike biljaka OrobanchaceaeCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, iliCistanche salsa.

Nakon blanširanja, sušenja i usitnjavanja, ekstrahirajte materijal pod refluksom sa 50%-80% vodenim rastvorom etanola dva do četiri puta po jedan do tri sata svaki put.

Kombinirajte ekstrakte i koncentrirajte ih pod sniženim tlakom sve dok ne ostane miris etanola, čime se dobiva koncentrirana otopina.

[0009]Propustite koncentriranu otopinu kroz kolonu AB-8 makroporozne adsorpcione smole.

Uzastopno eluirati s dejoniziranom vodom i 30%-50% vodenom otopinom etanola da se uklone nečistoće, nakon čega slijedi 60%-90% vodena otopina etanola za eluiranje ciljnih sastojaka.

Sakupiti eluat i koncentrirati ga pod sniženim pritiskom.

Prečistiti koncentrat hromatografijom na koloni silikagela koristeći hloroform-metanol u volumnom omjeru u rasponu od 5:1 do 2:1 kao eluenta.

Sakupite ciljne frakcije, koncentrirajte ih pod sniženim pritiskom i osušite zamrzavanjem kako biste dobili pročišćeni verbaskozid čistoće od najmanje 98%.

[0010]Opciono, odnos materijala i rastvarača tokom refluks ekstrakcije kreće se od 1:10 do 1:20, izraženo u g/mL, a temperatura ekstrakcije se kreće od 60 stepeni do 80 stepeni.

Napomena prevodioca: Izvor dodatno navodi da ovaj odnos znači "1 g sirovine se dodaje na 1 mL rastvarača." Ta izjava nije u skladu sa specificiranim rasponom 1:10–1:20, što odgovara 10–20 mL rastvarača po gramu sirovine.

[0011]Opciono, omjer prečnika i visine kolone AB-8 makroporozne adsorpcione smole kreće se od 1:8 do 1:15, gdje je omjer promjera kolone, d, i visine kolone, h. Brzina protoka elucije se kreće od 1 do 3 BV/h.

[0012]Opciono, uslovi sušenja zamrzavanjem obuhvataju temperaturu u rasponu od -40 stepeni do -50 stepeni, pritisak vakuuma u rasponu od 10 do 30 Pa i vreme sušenja u rasponu od 12 do 24 sata.

[0013]Metoda primjene verbaskozida za podsticanje proizvodnje lipida u koži je data kako slijedi.

[0014]Dodajte verbaskozid u topikalnu bazu proizvoda u prethodno određenom masenom udjelu i jednoliko promiješajte kako biste dobili gotov proizvod.

Nanesite gotov proizvod na površinu kože jednom ili dva puta dnevno.

Kroz penetraciju, verbaskozid djeluje na epidermalne HaCaT stanice kako bi promovirao proliferaciju stanica i ojačao čvrste spojeve.

Istovremeno, pojačava ekspresiju gena i proteina ACC , FASN i N-SMase, povećava aktivnost sintaze masnih kiselina, reguliše HAS2, HAS3 i CD44 i povećava sadržaj hijaluronske kiseline.

Nastavite da koristite jednu do četiri nedelje kako biste postigli opšte poboljšanje kožne barijere.

[0015]Opciono, maseni udio verbaskozida u lokalnom proizvodu kreće se od 0,01% do 5,0%.

[0016]Opciono, koristite 0,1–0,5 g gotovog proizvoda po nanošenju i lagano masirajte jednu do tri minute nakon nanošenja kako biste poboljšali apsorpciju.

[0017]Opcionalno, lokalni proizvod je medicinski zavoj, proizvod za popravku nakon procedure, pomoćni proizvod za liječenje atopijskog dermatitisa, proizvod za njegu kože posebno namijenjen osjetljivoj koži ili proizvod za intenzivnu hidrataciju i obnavljanje kože.

[0018]Opciono, ekscipijenti se takođe mogu dodati tokom primene verbaskozida.

[0019]Nadalje, ekscipijens se bira između ovlaživača, emulgatora, konzervansa, mirisa ili umirujućeg sredstva.

Oblik doziranja sastava koji sadrži pomoćnu tvar bira se između losiona, kreme, gela, seruma ili otopine maske.

 

Blagotvorni efekti pronalaska

[0020]Korisni efekti pronalaska su sljedeći.

[0021]Pronalazak pokazuje da verbaskozid ima ključne aktivnosti u podsticanju proizvodnje lipida u koži i hijaluronske kiseline.

Također može promovirati proliferaciju stanica kože, ojačati međućelijske spojeve i ubrzati zacjeljivanje rana, formirajući mehanizam zatvorene petlje „promoviranja ćelijske proliferacije → stabilizacije međućelijskih veza → povećanja proizvodnje lipida i hijaluronske kiseline → ubrzavanja popravke i zacjeljivanja“.

U poređenju sa prethodnim stanjem tehnike, pronalazak je opisan kao da ima sledeće prednosti.

[0022]Verbaskozid je prirodni aktivni sastojak biljnog porijekla s visokim nivoom sigurnosti i jasno definiranom farmakološkom aktivnošću, izbjegavajući potencijalne rizike od iritacije kože povezane s kemijski sintetiziranim sastojcima.

Urednička kvalifikacija: Ovo je sigurnosna tvrdnja izvora, a ne zaključak utemeljen samo botaničkim porijeklom.

[0023]Poboljšana je efikasnost pripreme i prinos verbaskozida.

[0024]Verbaskozid djeluje na sveobuhvatan raspon ciljeva, istovremeno regulirajući nekoliko ključnih procesa, uključujući proliferaciju stanica, ekspresiju proteina u čvrstom spoju, sintezu lipida, proizvodnju hijaluronske kiseline i zacjeljivanje rana.

Time poboljšava funkciju barijere kože na integriran način, s efektima koji se opisuju kao superiorniji u odnosu na one sa jednociljanim sastojcima.

[0025]Njegove primjene su široke, uključujući medicinske popravke, dodatni tretman kožnih bolesti, njegu osjetljive kože i svakodnevnu hidrataciju i popravak, zadovoljavajući potrebe za zdravljem kože različitih populacija.

 

Kratak opis crteža

[0026]Da bi se jasnije objasnila tehnička rješenja ostvarenja pronalaska ili prethodnog stanja tehnike, crteži potrebni za opisivanje realizacije ili prethodnog stanja tehnike su ukratko predstavljeni u nastavku.

Dole opisani crteži predstavljaju samo određene realizacije pronalaska. Osoba obične vještine u umjetnosti može iz njih izvući druge crteže bez kreativnog napora.

[0027]Slika 1 je šematski dijagram toka metode pripreme prema pronalasku.

[0028]Slika 2 predstavlja podatke o vitalnosti HaCaT ćelija.

[0029]Slika 3 predstavlja podatke o aktivnosti sintaze masnih kiselina.

[0030]Slika 4 prikazuje podatke o sadržaju hijaluronske kiseline.

[0031]Slika 5 predstavlja podatke o vitalnosti HaCaT ćelija za pronalazak.

[0032]Slika 6 predstavlja podatke o aktivnosti sintaze masnih kiselina za pronalazak.

[0033]Slika 7 prikazuje ekspresiju gena povezanih sa sintezom masnih kiselina.

[0034]Slika 8 prikazuje ekspresiju proteina povezanih sa sintezom masnih kiselina.

[0035]Slika 9 prikazuje Western blot rezultate povezane sa sintezom masnih kiselina.

[0036]Slika 10 prikazuje podatke o sadržaju hijaluronske kiseline.

[0037]Slika 11 prikazuje ekspresiju gena povezanih sa sintezom hijaluronske kiseline.

[0038]Slika 12 prikazuje ekspresiju proteina povezanih sa sintezom hijaluronske kiseline.

[0039]Slika 13 predstavlja rezultate Western blota koji su povezani sa hijaluronskom kiselinom.

[0040]Slika 14 prikazuje nivoe ekspresije klaudina-1.

[0041]Slika 15 prikazuje nivoe ekspresije okludina.

[0042]Slika 16 prikazuje stope zatvaranja rana.

[0043]Na slici 17 prikazane su slike iz testa grebanja ćelija.

[0044]Slika 18 predstavlja procjenu učinka hidratacije različitih uzoraka.

 

Detaljan opis realizacije

[0045]Izvedbe aplikacije su detaljno opisane u nastavku uz upućivanje na priložene crteže.

Primjer 1: Priprema prečišćenog verbaskozida

[0046]Primjer 1.

[0047]Kao što je prikazano na slici 1, ovaj primjer pruža metodu za pripremu verbaskozida, skraćeno Ver, koja uključuje sljedeće korake.

[0048]Odaberite osušene mesnate stabljikeCistanche deserticolailiCistanche tubulosa, oba pripadaju porodici Orobanchaceae.

Narežite materijal, blanširajte u kipućoj vodi 10-25 minuta i osušite u rerni na 40-60 stepeni, povećavajući sadržaj verbaskozida više od četiri puta.

 

 

Napomena:* u odnosu na praznu kontrolnu grupu, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Nakon usitnjavanja, ekstrahirajte materijal pod refluksom sa 50%-80% vodenom otopinom etanola dva do četiri puta po jedan do tri sata svaki put.

Kombinirajte ekstrakte i koncentrirajte ih pod sniženim tlakom sve dok ne ostane miris etanola, čime se dobiva koncentrirana otopina.

 

[0049]Propustite koncentriranu otopinu kroz kolonu AB-8 makroporozne adsorpcione smole.

Uzastopno eluirati s dejoniziranom vodom i 30%-50% vodenom otopinom etanola da se uklone nečistoće, nakon čega slijedi 60%-90% vodena otopina etanola za eluiranje ciljnih sastojaka.

Sakupiti eluat i koncentrirati ga pod sniženim pritiskom.

Prečistiti ga hromatografijom na koloni silika gela koristeći hloroform-metanol u volumnom odnosu od 5:1 do 2:1 kao eluent.

Sakupite ciljne frakcije, koncentrirajte ih pod sniženim pritiskom i osušite zamrzavanjem kako biste dobili pročišćeni verbaskozid čistoće od najmanje 98%.

[0050]Konkretno, odnos materijala i rastvarača tokom refluks ekstrakcije kreće se od 1:10 do 1:20, a temperatura ekstrakcije se kreće od 60 stepeni do 80 stepeni.

[0051]Odnos prečnika i visine kolone AB-8 makroporozne adsorpcione smole kreće se od 1:8 do 1:15, a brzina protoka elucije se kreće od 1 do 3 BV/h.

[0052]Uslovi sušenja zamrzavanjem obuhvataju temperaturu u rasponu od -40 stepeni do -50 stepeni, vakuumski pritisak u rasponu od 10 do 30 Pa i vreme sušenja u rasponu od 12 do 24 sata.

 

Tabela 2. Sažetak bioaktivnosti različitih uzoraka

Indeks	Prazna kontrola	Pozitivna kontrola	CTE	Ech	Ver
Vijabilnost ćelije (%)	100 ± 8.347	/	122.052 ± 8.051*	117.868 ± 7.941*	128.894 ± 9.528*
FAS aktivnost (U/mg proteina)	2.712 ± 0.419	18.488 ± 4.56*	2.069 ± 0.27	9.799 ± 1.356*	10.4 ± 0.697*
Sadržaj HA (ng/mL)	10.908 ± 0.968	19.925 ± 4.306*	21.644 ± 2.037*	13.517 ± 1.653*	18.486 ± 1.341*
Ekspresija Claudin-1 (pg/mL)	414.58 ± 25.05	/	505.556 ± 20.518*	478.937 ± 12.419*	554.057 ± 22.106*
Ekspresija okludina (pg/mL)	3.287 ± 0.683	/	4.285 ± 0.575	4.666 ± 0.582*	7.258 ± 0.774*
24 h stopa zarastanja rana (%)	30.581 ± 1.308	70.075 ± 1.781*	40.762 ± 9.68	37.102 ± 7.038	45.173 ± 5.508*
48 h stopa zarastanja rana (%)	55.458 ± 6.674	87.545 ± 3.155*	76.47 ± 2.684*	67.883 ± 5.678*	76.704 ± 4.8*

Napomena:* u odnosu na praznu kontrolnu grupu, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Primjer 2: Priprema ekstrakta polisaharida Cistanche

[0053]Primjer 2.

[0054]Ekstrahujte Cistanche dva puta pod zagrejanim refluksom sa 20-strukom i 15-strukom količinom vode u trajanju od tri sata, odnosno dva sata.

Filtrirati, sjediniti filtrate i koncentrirati na 80 stepeni –90 stepeni.

Dodajte 215 mL 95% etanola da postignete konačnu koncentraciju etanola od 80% i ostavite preko noći na 4 stepena.

Sakupite talog ili filtriranjem, zadržavajući filter kolač, ili centrifugiranjem na 4.000 o/min tokom 10 minuta.

Isperite talog tri puta apsolutnim etanolom i osušite na 50 stepeni da bi se dobio ekstrakt polisaharida Cistanche, označen kao POL.

 

Primjer 3: Priprema ekstrakta feniletanoidnog glikozida

[0055]Primjer 3.

[0056]Ekstrahujte Cistanche dva puta pod zagrejanim refluksom sa 20-strukom i 15-strukom količinom vode u trajanju od tri sata, odnosno dva sata.

Filtrirati, sjediniti filtrate i koncentrirati na 80 stepeni –90 stepeni.

Dodajte 215 mL 95% etanola da postignete konačnu koncentraciju etanola od 80% i ostavite preko noći na 4 stepena.

Filtrat prikupiti filtracijom ili supernatant centrifugiranjem na 4000 rpm tokom 10 minuta.

Koncentrirajte i osušite kako biste dobili ekstrakt feniletanoidnog glikozida Cistanche, označen kao POLS.

Testiranje je pokazalo sadržaj ehinakozida od 21,8% i sadržaj verbaskozida od 1,2%.

 

Primjer 4: Priprema ekstrakta RE1

[0057]Primjer 4.

[0058]SoakCistanche deserticolau šest puta većoj količini od 52% etanola na sobnoj temperaturi tokom 10 dana.

Filtrirati i zadržati biljni ostatak.

Nakon sušenja, ekstrahirajte ostatak jednom pod refluksom sa šest puta većom količinom 95% etanola dva sata.

Filtrirati, sjediniti filtrate, koncentrovati na 60 stepeni i osušiti da bi se dobio ekstrakt Cistanche feniletanoidnih glikozida i njihovih derivata, označenih kao RE1.

Ekstrakt sadrži sastojke uključujući ehinakozid, verbaskozid, izoverbaskozid i 2′-acetilverbaskozid.

 

Primjer 5: Priprema ekstrakta RE2

[0059]Primjer 5.

[0060]EkstraktCistanche tubulosadva puta sa 75% etanolom po jedan sat svaki put.

Filtrirati i zadržati ostatak.

Nakon sušenja, ekstrahirajte ostatak jednom pod refluksom sa šest puta većom količinom 95% etanola dva sata.

Filtrirati, sjediniti filtrate, koncentrovati na 60 stepeni i osušiti da bi se dobio ekstrakt Cistanche feniletanoidnih glikozida i njihovih derivata, označen kao RE2.

Ekstrakt sadrži sastojke uključujući ehinakozid, verbaskozid, izoverbaskozid i 2′-acetilverbaskozid.

 

Primjer 6: Priprema ekstrakta ukupnog feniletanoidnog glikozida

[0061]Primjer 6.

[0062]Narežite Cistanche i ekstrahirajte dva puta sa 75% rastvorom etanola po 1,5 sat svaki put.

Kombinirajte ekstrakte, koncentrirajte i osušite da biste dobili ekstrakt feniletanoidnog glikozida Cistanche, označen kao CTE.

Testiranje je pokazalo sadržaj ehinakozida od 22,6% i sadržaj verbaskozida od 4,5%.

 

Primjer 7: Metoda primjene

[0063]Primjer 7.

[0064]Zasnovano na primjeru 1, ovaj primjer pruža metodu primjene kroz koju verbaskozid djeluje na kompletnu sekvencu obnavljanja kožne barijere, obnavljanja epidermalnih ćelija → poboljšane međućelijske veze → nadopunjavanje lipida i matriksa → sinteza hijaluronske kiseline → zacjeljivanje rana.

Specifična metoda primjene je sljedeća.

[0065]Dodajte verbaskozid u topikalnu bazu proizvoda u prethodno određenom masenom udjelu i jednoliko promiješajte kako biste dobili gotov proizvod.

Nanesite gotov proizvod na površinu kože jednom ili dva puta dnevno.

Kroz penetraciju, verbaskozid djeluje na epidermalne HaCaT stanice kako bi promovirao proliferaciju stanica i ojačao čvrste spojeve.

Istovremeno, pojačava ekspresiju gena i proteina ACC , FASN i N-SMase, povećava aktivnost sintaze masnih kiselina, reguliše HAS2, HAS3 i CD44 i povećava sadržaj hijaluronske kiseline.

Nastavite da koristite jednu do četiri nedelje kako biste postigli opšte poboljšanje kožne barijere.

[0066]Konkretno, maseni udio verbaskozida u lokalnom proizvodu kreće se od 0,01% do 5,0%.

[0067]Koristite 0,1–0,5 g gotovog proizvoda po nanošenju i lagano masirajte jednu do tri minute nakon nanošenja kako biste poboljšali apsorpciju.

[0068]Lokalni proizvod je medicinski zavoj, proizvod za popravku nakon zahvata, pomoćni proizvod za liječenje atopijskog dermatitisa, proizvod za njegu kože posebno namijenjen osjetljivoj koži ili proizvod za intenzivnu hidrataciju i obnavljanje kože.

[0069]Ekscipijensi se takođe mogu dodati tokom primene verbaskozida.

Nadalje, ekscipijens se bira između ovlaživača, emulgatora, konzervansa, mirisa ili umirujućeg sredstva.

Oblik doziranja sastava koji sadrži pomoćnu tvar bira se između losiona, kreme, gela, seruma ili otopine maske.

 

Primjer 8: Eksperimentalni materijali i oprema

[0070]Primjer 8.

[0071]Na osnovu primjera 1 i 7, eksperimentalni materijali korišteni u pronalasku su sljedeći.

[0072]Eksperimentalne ćelije su bile ovekovečene ljudske epidermalne HaCaT ćelije kupljene od Shanghai Yaji Biotechnology.

Ćelije su kultivisane u DMEM sa visokim sadržajem glukoze sa dodatkom 10% fetalnog goveđeg seruma i 1% penicilin-streptomicina na 37 stepeni u atmosferi koja sadrži 5% ugljen-dioksida pri zasićenoj vlažnosti.

[0073]Eksperimentalni materijali su bili:

Echinacoside, skraćeno Ech, iz Nacionalnog instituta za kontrolu hrane i lijekova, Kina.

Fetalni goveđi serum, FBS, iz EXCELL-a.

DMEM sa visokim sadržajem glukoze iz Gibco.

0,25% tripsina–EDTA iz Gibco-a.

fiziološki prah puferiran fosfatom iz Pekinga Zhongshan Golden Bridge Biotechnology.

CCK-8 Komplet za ispitivanje ćelijske proliferacije/citotoksičnosti od TransGen Biotech.

Human Occludin, OCLN, ELISA komplet iz Wuhana CUSABIO.

Human Claudin-1, CLDN1, ELISA komplet iz Wuhana CUSABIO.

Sintaza masnih kiselina, FAS, komplet za analizu aktivnosti iz Solarbio.

ELISA set za humanu hijaluronsku kiselinu iz Wuhana CUSABIO.

Rekombinantni ljudski EGF protein, bez nosača, iz R&D Systems.

DEPC iz Amresca.

M5 HiClear DL2000 DNK marker iz Mei5 Biotechnology.

TRIzol reagens iz Ambiona.

5X All-In-One RT MasterMix od abm.

EvaGreen Express 2X qPCR MasterMix–Low ROX od abm.

Easy II Protein Quantitative Kit, BCA, iz TransGen Biotech.

RIPA pufer za lizu od Bostera.

Inhibitor proteaze iz Bostera.

Kozji anti-zečji IgG H&L, HRP, iz Abcam.

Kozji anti-miš IgG H&L, HRP, iz Abcam.

Prefarbani proteinski marker iz Solarbio.

-Merkaptoetanol iz Amresca.

PVDF prijenosna membrana, 0,45 μm, iz Millipore.

Glicin iz Sangon Biotech.

Glicerol iz Sangon Biotech.

SuperSignal West Pico PLUS iz Thermo Fisher.

Beta-Actin Loading Control Antibody, Mouse Monoclonal, Sino Biological.

ACC1 antitelo iz Afiniteta.

FASN antitelo iz Afiniteta.

SMPD2 antitelo iz Afiniteta.

Antitijelo na hijaluronsku sintazu 2, HAS2, iz Affinity.

HAS3 antitelo iz Afiniteta.

CD44 antitelo iz Afiniteta.

[0074]Eksperimentalna oprema se sastojala od:

SmartCell HF-90 inkubator za kulturu ćelija ugljičnog dioksida, Shanghai Lishen Scientific Equipment Co., Ltd. [上海力康仪器有限公司].

HF1200LC biološki sigurnosni ormar istog proizvođača.

DK-80 stolna centrifuga male brzine, Shanghai Feige Instrument Co., Ltd.

Heraeus Multifuge X1R brza rashladna centrifuga, Thermo Fisher Scientific.

xMark spektrofotometar za mikroploče, Bio-Rad.

GL-88B vortex mikser, Haimen Qilin-Bell Instrument Manufacturing Co., Ltd.

Model 2500 gel sistem za snimanje, Shanghai Tianneng.

MyCycler Thermal Cycler PCR instrument, Bio-Rad.

7500 Brzi PCR instrument u realnom vremenu, ABI.

Chemiscope 3000 kemiluminiscencijski sistem za snimanje, Shanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., Ltd.

Mini-PROTEAN Tetra sistem aparat za prijenos proteina, Bio-Rad.

DYCZ-24DN aparat za elektroforezu, Peking Liuyi.

Napomena prevodioca: Gore navedeni opisi proizvođača i instrumenata prate navedeni izvor; detalji kataloga nisu nezavisno verifikovani.

 

 

 

Primjer 9: Eksperimentalne metode

[0075]Primjer 9.

[0076]Na osnovu primjera 1-8, eksperimentalne metode korištene u pronalasku bile su sljedeće.

CCK-8 Test za proliferaciju ćelija

[0077]Pripremite jednoćelijsku suspenziju HaCaT ćelija u kompletnom mediju za kulturu gustine 5×1045 \\ puta 10^45×104 ćelija/mL.

Posadite ćelije u ploču sa 96 jažica sa 100 μL po jažici.

Nakon što ostavite ćelije da se pričvrste 24 sata na 37 stepeni ispod 5% ugljičnog dioksida, odbacite medij za kulturu i dajte različite test supstance. Uključite praznu kontrolnu grupu, sa n=5n=5n=5.

Nakon 48 sati tretmana, bacite medijum i dodajte 100 μL svježe pripremljenog 10% CCK-8 rastvora u svaku jažicu.

Nastavite inkubaciju u inkubatoru za ćelijsku kulturu jedan sat, a zatim izmjerite optičku gustoću na 450 nm pomoću čitača mikroploče.

Analiza aktivnosti sintaze masnih kiselina

[0078]Pripremite jednoćelijsku suspenziju HaCaT ćelija u kompletnom mediju za kulturu gustine 5×1045 \\ puta 10^45×104 ćelija/mL i zasijajte ćelije u tikvice za kulturu.

Nakon što ostavite ćelije da se pričvrste 24 sata na 37 stepeni ispod 5% ugljičnog dioksida, odbacite medij za kulturu i dajte različite test supstance.

Uključite praznu kontrolnu grupu i pozitivnu kontrolnu grupu tretiranu rekombinantnim humanim epidermalnim faktorom rasta, rhEGF, na 20 ng/mL, sa n=3n=3n=3.

Nakon 48 sati tretmana, sakupite ćelije i izmjerite aktivnost sintaze masnih kiselina prema uputama iz kompleta za analizu.

Analiza sadržaja hijaluronske kiseline

[0079]Pripremite jednoćelijsku suspenziju HaCaT ćelija u kompletnom mediju za kulturu gustine 5×1045 \\ puta 10^45×104 ćelija/mL i zasijajte ćelije u tikvice za kulturu.

Nakon što ostavite ćelije da se pričvrste 24 sata na 37 stepeni ispod 5% ugljičnog dioksida, odbacite medij za kulturu i dajte različite test supstance.

Uključite praznu kontrolnu grupu i pozitivnu kontrolnu grupu tretiranu rhEGF od 20 ng/mL, sa n=3n=3n=3.

Nakon 48 sati tretmana, sakupite supernatante stanične kulture i izmjerite sadržaj hijaluronske kiseline prema uputama za test.

Kvantitativna reverzna transkripcija PCR

[0080]Pripremite jednoćelijsku suspenziju HaCaT ćelija u kompletnom mediju za kulturu gustine 5×1045 \\ puta 10^45×104 ćelija/mL i zasijajte ćelije u ploče sa šest jažica.

Nakon što ostavite ćelije da se pričvrste 24 sata na 37 stepeni ispod 5% ugljičnog dioksida, odbacite medij za kulturu i dajte različite test supstance.

Uključite praznu kontrolnu grupu i pozitivnu kontrolnu grupu tretiranu rhEGF od 20 ng/mL, sa n=3n=3n=3.

Nakon 48 sati tretmana, bacite supernatant i dodajte 1 mL TRIzola u svaku jažicu da biste odvojili i lizirali ćelije, osiguravajući da reagens pokrije ćelijski sloj.

Više puta protresite posudu za kulturu dok se ćelije ne oslobode i prenesite materijal u epruvetu za mikrocentrifugu od 1,5 mL.

Ekstrahirajte ukupnu RNK i koristite qRT-PCR za određivanje ekspresije ACC, FASN, N-SMase, HAS2, HAS3 i CD44.

Western blotting

[0081]Pripremite jednoćelijsku suspenziju HaCaT ćelija u kompletnom mediju za kulturu gustine 5×1045 \\ puta 10^45×104 ćelija/mL i zasijajte ćelije u tikvice za kulturu.

Nakon što ostavite ćelije da se pričvrste 24 sata na 37 stepeni ispod 5% ugljičnog dioksida, odbacite medij za kulturu i dajte različite test supstance.

Uključite praznu kontrolnu grupu i pozitivnu kontrolnu grupu tretiranu rhEGF od 20 ng/mL, sa n=3n=3n=3.

Nakon 48 sati tretmana, sakupite ćelije.

Ekstrahirajte ukupni protein i koristite Western blotting za određivanje ekspresije ACC, FASN, N-SMase, HAS2, HAS3 i CD44.

Procjena ekspresije proteina tesnog spoja

[0082]Pripremite jednoćelijsku suspenziju HaCaT ćelija u kompletnom mediju za kulturu gustine 5×1045 \\ puta 10^45×104 ćelija/mL i zasijajte ćelije u tikvice za kulturu.

Nakon što ostavite ćelije da se pričvrste 24 sata na 37 stepeni ispod 5% ugljičnog dioksida, odbacite medij za kulturu i dajte različite test supstance.

Uključite praznu kontrolnu grupu, sa n=3n ​​= 3n=3.

Nakon 48 sati tretmana, prikupite ćelijske lizate i izmjerite okludin i klaudin-1 pomoću ELISA testa prema uputama za komplet.

Cell Scratch Assay

[0083]Pripremite jednoćelijsku suspenziju HaCaT ćelija u kompletnom mediju za kulturu gustine 5×1055 \\ puta 10^55×105 ćelija/mL.

Zasijajte 500 μL po jažici u ploču sa 24 jažice.

Nakon vezivanja ćelija, dajte tretmane, dijeleći ćelije na praznu kontrolnu grupu, pozitivnu kontrolnu grupu tretiranu fetalnim goveđim serumom i grupe ispitivanih supstanci.

Tretirajte 48 sati.

Nakon tretmana, lagano napravite ravnu ogrebotinu pomoću vrha pipete.

Zamijenite podlogu podlogom bez seruma u svim grupama osim u skupini pozitivne kontrole.

Fotografirajte izgrebana područja u 0, 24 i 48 sati.

Koristite ImageJ da izračunate površinu ogrebotine i procijenite kapacitet migracije ćelija.

 

Primjer 10: Procjena zadržavanja vlage

[0084]Primjer 10.

[0085]In vitro gravimetrijska metoda je korištena za procjenu hidratantnog učinka seruma koji sadrže Ver, Ech ili glicerin.

Izvagati određene količine prethodno obrađenog Uzorka 1, koji sadrži 2% Ver; Uzorak 2, koji sadrži 2% Ech; i pozitivna kontrola, koja sadrži 5% glicerina.

Čuvajte uzorke u komori sa konstantnom temperaturom i konstantnom vlažnošću na 25 stepeni i 50% relativne vlažnosti.

Izmjerite uzorke u različitim vremenskim točkama i nacrtajte krivulje zadržavanja vlage.

[0086]Stopa zadržavanja vlage izračunava se na sljedeći način:

Stopa zadržavanja vlage (%)=M2-M0M1-M0×100%\\text{Stopa zadržavanja vlage (\\%)}=\\frac{M_2-M_0}{M_1-M_0}\\times100\\%Stopa zadržavanja vlage (%)=M1​−M0​M2​−M0​​×100%

[0087]gdje:

[0088]M0M_0M0​ je masa prazne ploče, u gramima.

[0089]M1M_1M1​ je masa staklene ploče nakon dodavanja uzorka, u gramima.

[0090]M2M_2M2​ je masa nakon nekoliko sati skladištenja u eksikatoru, u gramima.

Napomena prevodioca: Paragraf [0085] opisuje skladištenje u komori sa kontrolisanom temperaturom i kontrolisanom vlažnošću, dok se [0090] odnosi na eksikator. Oba opisa su zadržana iz izvora.

 

Eksperimentalni rezultati

[0091]Eksperimentalni rezultati ovog primjera su sljedeći.

Efekti na proliferaciju HaCaT ćelija

[0092]Kao što je prikazano na slici 2, različiti ekstrakti Cistanchea imali su različite efekte na vitalnost HaCaT ćelija.

Ver i POL značajno povećavaju vitalnost ćelija, s P<0.05P < 0.05P<0.05, and Ver produced the highest viability.

Efekti na aktivnost sintaze masnih kiselina

[0093]Kao što je prikazano na slici 3, međućelijski lipidi u stratum corneumu su osnovna komponenta "maltera" strukture "cigle i maltera" kože.

Ceramidi, holesterol i slobodne masne kiseline formiraju gustu lamelarnu dvoslojnu strukturu u određenim proporcijama.

Održavanje normalne sinteze lipida može ojačati ovu strukturu, spriječiti gubitak vode, oduprijeti se vanjskim oštećenjima, održati ravnotežu mikrobioma kože i promovirati samopopravak.

Na taj način može riješiti suhoću, osjetljivost i smanjenu obrambenu sposobnost kože na njihovom izvoru.

[0094]Sintaza masnih kiselina je opisana kao glavni enzim koji ograničava brzinu i centralni motor za snabdevanje koji reguliše sintezu lipida u koži.

Njegova glavna funkcija je da katalizira sintezu palmitinske kiseline, C16:0, iz acetil-CoA i malonil-CoA. Palmitinska kiselina je opisana kao glavna endogena dugolančana zasićena masna kiselina u koži.

Palmitinska kiselina ima dvije funkcije.

Prvo, kao temeljni strukturni gradivni blok, direktno se koristi u sintezi lipida barijere stratum-corneum, uključujući ceramide i slobodne masne kiseline, pružajući materijalnu osnovu za formiranje lamelarnog dvosloja.

Drugo, kao važan prekursor i signalni molekul, može se dalje procesirati od strane nizvodnih elongaza, kao što je ELOVL1, u masne kiseline vrlo dugog lanca. Ove karakteristične masne kiseline su potrebne za integritet barijere.

U skladu s tim, aktivnost sintaze masnih kiselina direktno određuje opskrbu dostupnim sirovinama za vlastitu proizvodnju lipida barijere kože.

Povećanje njegove funkcije je početni i kritični korak u promicanju sinteze epidermalnih lipida i time popravljanju i jačanju fizičke barijere kože, u konačnici podržavajući zadržavanje vlage i odbranu.

[0095]Podaci su pokazali da pozitivna kontrola rhEGF i Ver značajno povećavaju aktivnost sintaze masnih kiselina, s P<0.05P < 0.05P<0.05.

POL, POLS, RE1 i RE2 nisu povećali aktivnost sintaze masnih kiselina.

Although RE2 increased fatty acid synthase activity, the difference was not statistically significant, with P>0.05P > 0.05P>0.05.

Napomena prevodioca: Izvor prvo uključuje RE2 među materijale koji nisu povećali aktivnost, a zatim izvještava o neznatnom povećanju za RE2. Ova nedosljednost je zadržana.

 

Učinci na sadržaj hijaluronske kiseline

[0096]Kao što je prikazano na slici 4, hijaluronska kiselina je prirodni polisaharid u koži sa jakim kapacitetom vezivanja vode, opisan u izvoru kao da je uglavnom prisutan u dermisu i stratum corneumu.

Povećanje sadržaja hijaluronske kiseline može zadržati vlagu na dubljim nivoima, održati zdravu strukturu kože, pružiti antioksidativne i antiinflamatorne efekte, potaknuti zacjeljivanje i popravak rana i poboljšati funkciju stratum-corneuma.

Ovi efekti se opisuju kao stvaranje hidratacije, punoće i otpornosti iznutra.

[0097]Podaci su pokazali da pozitivna kontrola rhEGF, Ver i RE2 značajno povećava sadržaj hijaluronske kiseline, uz P<0.05P < 0.05P<0.05.

POL, POLS i RE1 nisu povećali sadržaj hijaluronske kiseline.

 

Poređenje klasa ekstrakta i pročišćenog verbaskozida

[0098]Cistanche uglavnom sadrži feniletanoidne glikozide i polisaharide.

Aktivnosti polisaharidnog ekstrakta, POL; ekstrakti feniletanoidnih glikozida, POLS, RE1 i RE2; i verbaskozid, Ver, su stoga upoređeni.

Rezultati na slikama 2-4 pokazuju da ekstrakti Cistanche feniletanoidnog glikozida pripremljeni različitim metodama i pojedinačni spoj pokazuju različite aktivnosti u promociji proliferacije HaCaT ćelija, povećanju aktivnosti sintaze masnih kiselina i povećanju sadržaja hijaluronske kiseline.

Samo je Ver pokazao aktivnost u sve tri oblasti, kao što je sažeto u tabeli 1.

[0099]–[0101] Ovi brojevi paragrafa i sadržaj tabele 1 nisu bili prisutni u dostavljenom izvoru. Za materijal koji nedostaje nije moguć prevod ili rekonstrukcija.

Tabela 1. Sažetak bioaktivnosti različitih uzoraka

Indeks	Prazna kontrola	Pozitivna kontrola	POL	POLS	RE1	RE2	Ver
Vijabilnost ćelije (%)	100 ± 7.008	/	119.008 ± 7.379*	105.312 ± 6.494	85.851 ± 8.381	95.234 ± 10.065	128.894 ± 9.528*
FAS aktivnost (U/mg proteina)	2.712 ± 0.419	18.488 ± 4.56*	3.786 ± 1.715	2.399 ± 0.717	2.145 ± 0.889	9.34 ± 10.756	10.63 ± 2.228*
Sadržaj HA (ng/mL)	10.908 ± 0.968	19.925 ± 4.306*	6.881 ± 2.411	6.321 ± 1.021	6.53 ± 1.342	16 ± 2.531*	17.86 ± 3.27*

 

Dalje poređenje CTE, ehinakozida i verbaskozida

[0102]Kao što je prikazano na slici 5, glavni feniletanoidni glikozidi u Cistancheu uključuju ehinakozid i verbaskozid.

Efekti ekstrakta ukupnog feniletanoidnog glikozida Cistanche, CTE, koji sadrži 22,6% ehinakozida i 4,5% verbaskozida; ehinakozid, Ech; i verbaskozid, Ver, na proliferaciju HaCaT ćelija su stoga dalje upoređivani.

[0103]Podaci su pokazali da CTE, Ech i Ver potiču proliferaciju HaCaT ćelija.

CTE i Ver su proizveli najjače efekte, što ukazuje na zaštitne efekte na ćelije kože.

Daljnji efekti na aktivnost sintaze masnih kiselina

[0104]Kao što je prikazano na slici 6, efekti na aktivnost sintaze masnih kiselina bili su sljedeći.

[0105]Podaci su pokazali da pozitivna kontrola rhEGF, Ech i Ver značajno povećava aktivnost sintaze masnih kiselina, s P<0.05P < 0.05P<0.05.

CTE nije povećao aktivnost sintaze masnih kiselina.

 

Ekspresija gena i proteina povezanih sa sintezom masnih kiselina

[0106]Slike 7-9 pokazuju efekte na ekspresiju gena i proteina povezanih sa sintezom masnih kiselina.

[0107]ACC i FASN su opisani kao enzimi koji ograničavaju brzinu i glavni motor anabolizma lipida.

Zajedno, katalizuju stvaranje dugolančanih masnih kiselina, uključujući palmitinsku kiselinu, osiguravajući esencijalne sirovine za sintezu ključnih lipida barijere kao što su ceramidi.

N-SMase je ključni pokretač razgradnje lipida i signalizacije stresa s dvostrukom ulogom.

Aktivira se tijekom ozljede i hidrolizira sfingomijelin kako bi stvorio signalne ceramide, pokrećući upalu i apoptozu i potiskujući normalnu sintezu lipida.

U normalnim stanicama, međutim, ima regulatornu ulogu u metabolizmu lipida.

[0108]Kao što je prikazano na slikama 7-9, qPCR i Western blot rezultati pokazuju da Ver, kao i rhEGF, značajno pojačava ekspresiju gena i proteina ACC, FASN i N-SMase, uz P<0.05P < 0.05P<0.05, and the effects were comparable.

Rezultati pokazuju da Ver reguliše ACC i FASN kako bi regulisao ćelijsku sintezu lipida za izgradnju membrane, skladištenje energije ili izlučivanje.

U isto vrijeme, pojačana regulacija N-SMase može aktivirati metabolički ciklus sfingolipida.

Proizvedeni ceramidi nisu samo signali stresa. U normalnim fiziološkim uslovima, oni su takođe važni prekursori za sintezu drugih kompleksnih sfingolipida, kao što su glikosfingolipidi, ili za dinamičko remodeliranje membrane.

Stoga, koordinirana regulacija ova tri gena i proteina povećava ukupnu ćelijsku anaboličku aktivnost i kapacitet remodeliranja membrane.

 

Daljnji efekti na sadržaj hijaluronske kiseline

[0109]Kao što je prikazano na slici 10, podaci pokazuju da su rhEGF, CTE, Ech i Ver svi značajno povećali sadržaj hijaluronske kiseline, uz P<0.05P < 0.05P<0.05.

Redoslijed efekta bio je CTE, zatim Ver, a zatim Ech.

 

Ekspresija gena i proteina povezanih sa sintezom hijaluronske kiseline

[0110]Kao što je prikazano na slikama 11-13, HAS2, HAS3 i CD44 formiraju povratnu petlju "sinteza-osjećaj-odgovor" u metabolizmu hijaluronske kiseline u HaCaT ćelijama.

HAS2 i HAS3 su glavni enzimi katalitičke sinteze.

HAS2 uglavnom proizvodi hijaluronsku kiselinu visoke molekularne težine i povezan je s održavanjem homeostaze kože i protuupalnim djelovanjem.

HAS3 ima tendenciju da proizvodi hijaluronsku kiselinu niže molekularne težine i direktnije učestvuje u procesima uključujući migraciju i proliferaciju ćelija.

CD44 je glavni receptor na površini ćelije za hijaluronsku kiselinu.

On ne samo da posreduje unutarstanični i ekstracelularni prijenos signala koji uključuje hijaluronsku kiselinu, već i dinamički reguliše hijaluronsku kiselinu kroz endocitozu i recikliranje i, zauzvrat, reguliše ekspresiju i aktivnost HAS2 i HAS3.

[0111]Kao što je prikazano na slikama 11-13, qPCR i Western blot rezultati pokazuju da Ver, kao i rhEGF, značajno pojačava ekspresiju gena i proteina HAS2, HAS3 i CD44, uz P<0.05P < 0.05P<0.05.

Regulatorni efekti Vera na ekspresiju gena HAS2, HAS3 i CD44 bili su veći od rhEGF-a.

Rezultati pokazuju da Ver reguliše HAS2, HAS3 i CD44 kako bi kontrolisao kompletan proces "sinteze-sastavljanja-prenos signala" hijaluronske kiseline, doprinoseći hidrataciji epiderme, popravljanju i barijernoj funkciji.

Efekti na ekspresiju proteina sa čvrstim spojem

[0112]Održavanje proizvodnje lipida i hijaluronske kiseline u koži opisano je kao pružanje fundamentalne, sinergističke podrške i stabilizacije proteina čvrstog spoja između HaCaT ćelija.

Adekvatni lipidi omogućavaju keratinocitima da formiraju potpune, organizirane međućelijske dvoslojeve lipida.

Ove strukture su opisane ne samo kao fizički okvir barijere već i kao stabilno, hidrofobno strukturno okruženje za sklapanje i sidrenje proteina usko spojenog.

U isto vrijeme, povoljno stanje hidratacije koje održava hijaluronska kiselina pomaže u osiguravanju normalnog metabolizma keratinocita i signalizacije.

Putevima koji uključuju receptore kao što je CD44, hijaluronska kiselina takođe indirektno reguliše ekspresiju i distribuciju proteina u čvrstom spoju.

Zajedno, lipidi i hijaluronska kiselina obezbeđuju fizičke i biohemijske osnove potrebne za formiranje i održavanje čvrstog spoja iz odgovarajućih perspektiva strukturne stabilnosti i homeostaze mikrookruženja.

Time jačaju fizičke međućelijske veze i cjelokupni integritet barijere.

[0113]Prethodni rezultati su pokazali da je Ver pokazao najjaču aktivnost u podsticanju proizvodnje lipida u koži i hijaluronske kiseline.

Dalje istraživanje njegovih efekata na međućelijske čvrste spojeve pokazalo je da su CTE, Ech i Ver značajno promovirali ekspresiju proteina tijesnog spoja claudin-1, s P<0.05P < 0.05P<0.05, as shown in Figure 14.

Kao što je prikazano na slici 15, samo su Ech i Ver značajno promovirali ekspresiju okludina.

Efekat Vera je bio znatno veći od Ech-a, sa P<0.05P < 0.05P<0.05.

Ovo je bilo u skladu s najjačom aktivnošću koja se pripisuje Veru u promicanju proizvodnje lipida u koži i hijaluronske kiseline.

 

Učinci na zacjeljivanje rana

[0114]Kao što je prikazano na slikama 16-17, HAS3 direktno učestvuje u procesima uključujući migraciju i proliferaciju ćelija.

CD44 prenosi informacije iz hijaluronske kiseline u ćelije i na kraju reguliše migraciju ćelija, proliferaciju i hidrataciju, igrajući centralnu ulogu u zarastanju rana, hidrataciji kože i homeostazi barijere.

Prethodni eksperimenti su pokazali da verbaskozid značajno podstiče ekspresiju HAS3 i CD44.

Stoga je dalje istražena njegova sposobnost da podstakne zacjeljivanje rana.

[0115]Kao što je prikazano na slikama 16-17, rezultati su pokazali da su CTE, Ech i Ver svi promovirali zacjeljivanje rana.

Međutim, samo je Ver pokazao značajan promotivni efekat nakon 24 sata.

Pokazao je najjaču aktivnost podsticanja zacjeljivanja rana, u skladu sa značajnom promocijom ekspresije gena HAS3 i proteina.

Urednička kvalifikacija: Eksperimentalna metoda koja se koristi za ovaj rezultat je test grebanja ćelija. "Zacjeljivanje rana" je terminologija korištena u izvoru i ovdje se ne treba tumačiti kao dokazani klinički ishod.

 

Performanse formulacije u vezi sa zadržavanjem vlage

[0116]Kao što je prikazano na slici 18, kapacitet uzorka za zadržavanje vlage procijenjen je na osnovu trendova u krivuljama zadržavanja vlage da bi se procijenio učinak hidratacije kože.

Podaci su pokazali da je kriva zadržavanja vlage u Uzorku 1 bila iznad krivulje Uzorka 2 i pozitivne kontrole.

U uslovima od 25 stepeni i 50% relativne vlažnosti, Uzorak 1 je imao bolje hidratantne performanse od Uzorka 2 i kontrole od 5% glicerina, što ukazuje na najjače performanse hidratacije.

Uzorak 1 je sadržavao Ver, a uzorak 2 je sadržavao Ech.

According to the source, these results indicate that, when incorporated into products, Ver has better homogeneity and moisturizing activity than Ech, as summarized in Table 2.

[0117]Tabela 2. Sažetak aktivnosti različitih uzoraka.

Sadržaj tabele nije uključen u isporučeni izvor.

[0118]Napomena: [Simbol značaja nije reprodukovan u dostavljenom tekstu.] U poređenju sa praznom kontrolnom grupom, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Sveukupno tumačenje predstavljeno u objelodanjivanju

[0119]Prethodni rezultati pokazuju da verbaskozid pokazuje izvanrednu hidratantnu aktivnost preciznim aktiviranjem kompletnog mehanizma za popravku barijere kože zatvorene petlje.

Prvo djeluje na bazalni sloj kako bi značajno ubrzao obnavljanje epidermalnih stanica i urednu diferencijaciju, osiguravajući dovoljne ćelijske građevne blokove za izgradnju barijere.

Zatim potiče jačanje čvrstih spojeva i dezmozomskih struktura između keratinocita, jačajući fizičko sidrenje između stanica i povećavajući gustoću barijere i mehaničku čvrstoću.

Istovremeno, efikasno aktivira ključne enzime metabolizma lipida i nadopunjuje međućelijski lipidni matriks, ispunjavajući "malterne" prostore između "cigli" kako bi se spriječio gubitak vode.

Konačno, regulacijom ekspresije sintaze hijaluronske kiseline, istovremeno povećava sadržaj hijaluronske kiseline u dermisu i epidermu, hvatajući i zadržavajući značajne količine vode.

Ovo formira potpunu funkcionalnu petlju koja obuhvata obnovu na izvoru, strukturno ojačanje, dopunu matrice i skladištenje vode.

Na taj način može postići sekvencu zatvorene petlje „promoviranja proliferacije ćelija → jačanja fizičkih međućelijskih veza → promicanja proizvodnje lipida i hijaluronske kiseline → promicanja zacjeljivanja rana“.

Izvor zaključuje da proizvodi bolje efekte primjene od ehinakozida iz Cistanchea i najčešće korištenog ovlaživača glicerina i da se može koristiti kao sredstvo za zaštitu kože u funkcionalnoj njezi kože i lokalnim proizvodima.

[0120]Prethodni opisi su samo specifične realizacije pronalaska.

Obim zaštite pronalaska nije ograničen na ova ostvarenja.

Sve promjene ili zamjene koje bi osoba sa iskustvom u ovoj tehnici mogla lako zamisliti unutar tehničkog obima otkrivenog u pronalasku spadaju u obim zaštite pronalaska.

Shodno tome, obim zaštite pronalaska će biti određen patentnim zahtevima.