Povoljan učinak Thymelaea Hirsuta na degeneraciju otočića gušterače, fibrozu bubrega i oštećenja jetre

Sanae Abid, Hassane Mekhfifi, Abderrahim Ziyyat, Abdekhaleq Legssyer, Mohammed Aziz i Mohamed Bnouham

Laboratorija za bioresurse, biotehnologiju, etnofarmakologiju i zdravstvo, Odsek za biologiju PMF-a,

Univerzitet Mohamed Ist, Bd: Mohamed VI, BP: 717, Oujda 60000, Maroko

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Cilj. U Maroku, plus ymelaea hirsute (T. hirsute) (Thymelaeacea) je ljekovita biljka koja se široko koristi za liječenje i prevenciju dijabetesa. Ova studija imala je za cilj procijeniti srednjoročni antidijabetički učinak vodenog ekstrakta (AqTh) i etilacetatne frakcije (EaTh) Th i istražiti njihov pretpostavljeni zaštitni učinak na degeneraciju otočića gušterače, dijabetičku nefropatiju i oštećenje jetre kod streptozotocina (STZ). - pacovi dijabetičari. Metode. Eksperimentalni dijabetes kod pacova izazvan je jednom intraperitonealnom injekcijom od 50 mg/kg STZ. Tokom perioda tretmana (4 nedelje), 200 mg/kg AqTh i 50 mg/kg EaTh dnevno je oralno davano STZ dijabetičkim štakorima. Proučavana je grupa parametara uključujući glukozu u krvi natašte, biohemijske parametre i inhibiciju intestinalne glukozidaze. Nadalje, histološka studija pankreasa,bubreg, jetra i aorta je takođe realizovana. Rezultati. Na kraju tretmana, i AqTh i EaTh su normalizirali glukozu u krvi natašte na 1,08 i 1,25 g/l, respektivno. AqTh je također smanjio kreatinin u urinu i HbAc1. EaTh je pokazao inhibitornu aktivnost protiv intestinalne -glukozidaze, dok AqTh nije imao ovaj inhibitorni efekat. Nadalje, bojenje pankreasa hematoksilinom i eozinom pokazalo je da AqTh ili EaTh sprječava degeneraciju stanica otočića pankreasa. Kao istibubreg, Massonovo trihromsko bojenje pokazalo je značajnu prevencijububrežnifibroza kod dijabetičkih štakora tretiranih AqTh ili EaTh. S druge strane, bojenje jetre hematoksilinom i eozinom pokazalo je da AqTh i EaTh sprječavaju oštećenje jetre. Zaključak. Zaključujemo da srednjoročna primjena AqTh i EaTh ima značajan antihiperglikemijski učinak kod STZ dijabetičkih štakora, moguće kroz inhibiciju intestinalne glukozidaze i zaštitu od oštećenja stanica otočića pankreasa. Štaviše, tretman AqTh i EaTh sprečava nefropatiju i komplikacije jetre kod STZ dijabetičkih štakora.

Cistanche herbamože liječitifibroza bubrega

Uvod

Dijabetes melitus je najčešća endokrina bolest. Incidencija ove bolesti raste alarmantnom stopom (4-5 procenata) [1]. Neliječen ili nekontroliran dijabetes tipa 2 koji nije ovisan o inzulinu (DM2) može uzrokovati nekoliko komplikacija kao što su kardiovaskularne bolesti i dijabetička nefropatija, a može dovesti i do dijabetesa tipa 1 ovisnog o inzulinu (DM1).

Dijabetička nefropatija je jedna od važnih komplikacija dijabetesa, a glavni je razlog povećanog broja pacijenata u završnoj fazibubrežnibolesti (ESRD) [2], koje zahtijevajububregdijaliza ili abubregtransplantaciju da bi pacijent preživio.

Stoga, liječenje dijabetesa postaje vrlo važno kako bi se izbjegli njegovi ozbiljni metabolički ishodi kao što je nefropatija.

U današnje vrijeme liječenje dijabetesa uključuje kontrolu ishrane, tjelovježbu, primjenu inzulina i/ili hipoglikemijskih lijekova, te korištenje ljekovitog bilja kao komplementarne alternativne medicine. Nekoliko ljekovitih biljaka pokazalo je krucijalan antihiperglikemijski učinak s minimalnim nuspojavama [3–5], zbog čega je Svjetska zdravstvena organizacija (WHO) skrenula veliku pažnju na racionalnu upotrebu tradicionalnih i prirodnih lijekova za liječenje dijabetesa [6].

U Maroku se više od 100 ljekovitih biljaka koristi za liječenje i prevenciju dijabetesa [7–10]. Potvrđeno je antihiperglikemijsko i antidijabetičko djelovanje brojnih ekstrakata i proizvoda ovih biljaka (Ammi visnaga Lam., Globularia alum, Nigella sativa i Olea europaea var.)[9].

T. hirsuta je ljekovita biljka koja se tradicionalno koristi za prevenciju i liječenje dijabetesa, u sjeveroistočnom Maroku [8]. Prethodne farmakološke studije su pokazale akutni antihiperglikemijski efekat AqTh i EaTh [11–13]. Međutim, srednjoročni antidijabetički efekat ova dva ekstrakta T. hirsuta još nije utvrđen. Stoga je cilj ove studije po prvi put procijeniti srednjoročnu antidijabetičku aktivnost AqTh i EaTh i istražiti njihov pretpostavljeni zaštitni učinak na degeneraciju otočića pankreasa, dijabetičku nefropatiju, steatozu jetre i komplikacije aorte kod STZ- indukovanih dijabetičkih štakora.

2. Materijali i metode

2.1. Hemikalije i reagensi.

Glucose Autokit je kupljen od BioSystems-a (Španija). STZ je kupljen od Sigma Aldrich (Kina). Akarboza (Glucor 50) je dobijena od Bayer Schering Pharma (Kazablanka, Maroko). Saharoza je kupljena od Prolaba (grupa Rhone-Poulenc) (EEC). Pentobarbital je dobijen od CEVA Sante Animale (LaBallasti`ere). Anthrone (C14H10O) je kupljen od cijelog Organicsa. Parafifin vosak je kupljen od FlukaChemika (Švajcarska). Eozin (C20H6Br4Na2O5) je dobijen od Riedel-de Haen (Seelze), a hematoksilin je dobijen od BDH Chemicals Ltd. (Poole England). Fuksinska kiselina je kupljena od Acros Organics (NewJersey, SAD), fosfomolibdinska kiselina je kupljena od Sigma-Aldrich (PF, Steinheim), a svijetlozelena je kupljena od Sigma-Aldrich (MO, SAD).

2.2. Životinje.

Wistar pacovi oba pola, prvobitne težine 150–250 g (8-9 sedmica), dobijeni su iz životinjske kuće Odsjeka za biologiju Prirodno-matematičkog fakulteta (Oujda, Maroko). Studija je provedena prema "Principi nege laboratorijskih životinja" [14]. Održavani su u standardnim laboratorijskim uslovima (ciklus svjetlo/mrak od 12/12 h i temperatura 23 plus 2 stepena sa 3 štakora po kavezu sa pristupom hrani i vodi. Za prikupljanje urina i određivanje vode i unosa hrane, pacovi su držani u metabolički kavezi.

2.3. Indukcija dijabetesa.

Nakon 14 h gladovanja, pacovima je intraperitonealno ubrizgana jedna doza STZ (50 mg/kg t.m.), pripremljena u svježem i hladnom puferu natrijum citrata (0.1 M limunske kiseline i 0,1 M trinatrijum citrat dihidrat) na PH4,5, za izazivanje dijabetesa [15]. Nakon 1 sedmice, pacovi s rasponom glukoze u krvi natašte od 1,26-2 g/l smatrani su dijabetičarima tipa 2 i uključeni su u studiju.

2.4. Priprema biljnog uzorka.

T. hirsuta je kupljena na tradicionalnoj pijaci u Oujdi (Orijentalni Maroko) i potvrđena je od strane botaničara na Odsjeku za biologiju (Matematički fakultet, Oujda, Maroko), a uzorak vaučera (HUMPOM137) deponovan je u biljnom dijelu Univerzitet Herbarium Mohamed Premijer iz Oujde, Maroko (HUMPO).

Nadzemni dijelovi T. hirsute su prvo očišćeni i isprani vodom, a zatim sušeni na 40 stepeni preko noći u pećnici. Za pripremu AqTh, 140 g nadzemnih dijelova T. hirsuta je infuzija u 2 L destilovane vode 3 sata. Prinos AqTh bio je 4,53 posto. EaTh je pripremljen kako je opisano u našoj prethodnoj studiji [13].

2.5. Eksperimentalni dizajn.

Štakori su nasumično podijeljeni u pet grupa (5 ili 6 pacova po grupi): normalni kontrolni štakori (primjeni samo sa destilovanom vodom), kontrolni štakori dijabetičari (primjeni samo sa destilovanom vodom), dijabetički štakori tretirani sa 10 mg /kg TM akarboze (standardni hipoglikemijski lijek), dijabetički pacovi tretirani sa 50 mg/kg EaTh, i dijabetički pacovi tretirani sa 200 mg/kg TM AqTh. Optimalne doze su određene na osnovu naših prethodnih studija [13] i preliminarnih testova. Svi pacovi su tretirani jednom dnevno tokom 4 nedelje. Tjelesna težina se bilježila svaki dan. Praćeni su unos vode i hrane i zapremina urina pre i posle tretmana, a glukozurija je merena na kraju tretmana. Glukoza u krvi natašte je ispitivana prije tretmana (0. sedmica) i nakon 1, 2, 3 i 4 sedmice liječenja. Inhibicija -glukozidaze, in vivo, proučavana je dan prije žrtvovanja pacova. Nakon 4 sedmice liječenja, sve životinje su anestezirane sa 50 mg/kg pentobarbitala, nakon 14 sati gladovanja. Zatim je krv sakupljena kardijalnom punkcijom i odmah centrifugirana na 3000 tura/min 10 min. *serum je zatim čuvan na -20 stepeni do biohemijske analize (ukupni holesterol i trigliceridi). Thebubreg, jetra, aorta, srce i pankreas su uklonjeni, izmjereni (bubregjetra i srce), a zatim fiksirani (bubrezi, jetra, aorta i pankreas) u 10 posto formalina za histološku studiju. Uzorak jetre je pohranjen na -20 stepeni za analizu sadržaja glikogena.

cistachezabubrežna funkcija

2.6. Procjena glukoze u krvi natašte.

Tokom perioda lečenja, glikemija natašte je kvantifikovana nedeljno. Nakon 14 h gladovanja, mikrokapilarima je uklonjena krv iz repnih vena, pod laganom eterskom anestezijom. Zatim je centrifugiran na 5000 × g 10 minuta, a glikemija je procijenjena u serumu korištenjem komercijalnog kompleta za glukozu (BioSystems, Španjolska) zasnovanog na metodi peroksidaze glukoza oksidaze [16].

2.7. - Inhibicija glukozidaze, in vivo studija.

Dan prije žrtvovanja, pacovi lišeni hrane 14 h korišćeni su za praćenje inhibicije -glukozidaze, in vivo. 30 min prije oralnog opterećenja saharozom (2 g/kg), svakoj grupi je davana doza koja odgovara njenom tretmanu. Krv je uzeta iz repne, vene pomoću mikrokapilara, neposredno prije primjene probne doze (−30 min), neposredno prije opterećenja saharozom (0 min) i 30, 60 i 120 min nakon opterećenja saharozom. Nakon centrifugiranja pri 5000 ×g/10 min, nivo glukoze u plazmi je određen metodom glukoza oksidaze peroksidaze [17].

2.8. Ekstrakcija i određivanje hepatičnog glikogena.

Izvagani uzorci tkiva jetre ({{0}}.3–0,5 g) iz svih grupa korišteni su za ekstrakciju glikogena prema Ongu i Khoou[18]. Uzorci jetre su prvo smrvljeni, homogenizovani sa 2 ml 30% kalijum hidroksida (KOH) i kuvani na 100 stepeni/30 min. Zatim, za taloženje glikogena, smeša je dva puta tretirana sa 4 ml 95-postotnog etanola, i svaki put smeša je čuvana na 4 stepena/30 min. Nakon centrifugiranja na 3000 tura/min/15 min, pelet je ispran sa 8 ml 95% etanola, a zatim centrifugiran pri 3000 tura/min/15 min. Dobijeni glikogen je rastvoren u 1 ml destilovane vode. Koncentracija glikogena je praćena pomoću antronskog reagensa. Optička gustina je očitana na 625 nm.

2.9. Biochemical Assays.

Glikozurija je mjerena komercijalnim Autokit-om (BioSystems, Španjolska) baziranim na metodi peroksidaze glukoza oksidaze. Glikozilirani hemoglobin (HbA1c) je procijenjen korištenjem komercijalnog kompleta (Cal-tech diagnostics, INC, USA), a kolesterol je određen korištenjem komercijalnih kompleta za analizu (SGM-Italia, Roma, Italy). Trigliceridi i kreatinin u urinu su procijenjeni korištenjem komercijalnih kompleta za analizu (Bio Sud Diagnostic SRL, Ricerca, Italija).

2.10. Histopatologija.

Nakon perioda fiksacije od 3 ± 1 dan u 10 posto formalina, pankreas,bubreg, tkiva jetre i aorte su ispirani destilovanom vodom 20 min. Zatim su dehidrirani uz povećanje etanola (30 posto za 30 minuta, 70 posto za 30 minuta, 95 posto za 30 minuta, odnosno 2 × 100 posto za 60 minuta). Nakon koraka prosvjetljenja u toluenu (2 × 120 min), organi su uključeni mješavinom parafintoluena (1V/1V) u trajanju od 90 min, zatim parafinom (2 ×120 min). Konačno, organi su ugrađeni u parafin prije rezanja na 7 μm (mikrotom Leitz 1512). Presjeci pankreasa i jetre obojeni su hematoksilinom i eozinom.Bubrega dijelovi aorte su obojeni Massonovim trihromom da bi se pokazala fifibroza/kolagen.

Prije bojenja hematoksilinom i eozinom, sekcije su deparafinizirane i inkubirane u toluenu (2 × 5 min), zatim hidratizirane smanjenjem titule etanola (100 posto, 95 posto, odnosno 70 posto) tijekom 5 minuta. Zatim, za bojenje hematoksilinom i eozinom, nakon 20 min ispiranja, ćelijska jezgra su obojena uronjenim u hematoksilin na 5 min, nakon čega je slijedilo 15 min ispiranja vodom. Za bojenje citoplazme, sekcije su uronjene u 1 posto eozina na 5 minuta, a zatim isprane 2 minute. Nakon bojenja, rezovi su dehidrirani sa 100 postotnim etanolom (2 × 1/2 min) i toluenom (2 × 2 min). Massonovo trihromsko bojenje, nakon hidratacije,bubreg, a dijelovi aorte su refiksirani u Bouinovom rastvoru za 1 sat/56 stepeni. Zatim, nakon 10 min ispiranja, rezovi su obojeni u Weigertovom željeznom hematoksilinu 2 min. Nakon 10 min ispiranja, sekcije su uronjene u fuksinsku kiselinu na 3 min, a nakon 10 min ispiranja diferencirane su fosfomolibdinske kiseline 15 min. Za bojenje kolagena, sekcije su direktno prebačene u svijetlozelenu boju na 15 minuta. Nakon 2 min diferencijacije u 1 posto sirćetnoj kiselini, sekcije su dehidrirane kroz 95 posto i 100 posto etanola u trajanju od po 1 min, a zatim očišćene u toluenu (2 × 1 min) [19–21].

Konačno, presjeci obojeni na lamele su postavljeni najvažnije. Nakon sušenja, mikroskopsko posmatranje je obavljeno korišćenjem očnog sistema 40x objektiva svetlosnog mikroskopa Olympus Tokyo (Japan).

Da bi se odredio učinak lijeka na tkivo pankreasa, izračunat je broj i prečnik ćelija otočića pankreasa. Za kvantificiranje kolagena ububregsekcije, rezultati su ocijenjeni od nula do tri (0: bez kolagena, 1: slab kolagen, 2: umjeren kolagen i 3: jak kolagen) [22]. Učinak tretmana na aortu procijenjen je mjerenjem prečnika aorte, a oštećenje jetre je razjašnjeno razvojem lipidnih kapljica.

2.11. Statistička analiza.

Sve vrijednosti su izražene kao srednja vrijednost ± SEM. Statistička analiza i poređenje srednjih vrednosti izvršena je korišćenjem neparnog Studentovog testa za poređenje srednjih vrednosti dve grupe i uparenog Studentovog testa za poređenje dve srednje vrednosti unutar iste grupe. Da bi se utvrdio zaštitni učinak lijeka nabubrezii jetre, korišten je hi-kvadrat test. p vrijednosti<0.05 were="" considered="">

3. Rezultati

3.1. Utjecaj liječenja lijekovima na glukozu u krvi natašte kod STZ-

Inducirani dijabetički štakori. Kod neliječenih kontrolnih štakora s dijabetesom, uočeno je značajno povećanje glukoze u krvi natašte u poređenju sa normalnim kontrolnim štakorima. Tretman sa 200 mg/kg AqTh smanjio je nivo glukoze u krvi od 1. sedmice primjene, a ovaj efekat je bio značajan u 3. (p < 0.001)="" i="" 4.="" sedmicu="" (p="">< 0,05)="" u="" poređenju="" sa="" neliječenim="" dijabetičkim="" štakorima.="" tretman="" sa="" 50="" mg/kg="" eath="" smanjio="" je="" hiperglikemiju="" od="" 2.="" sedmice,="" a="" ovaj="" efekat="" je="" bio="" značajan="" (p="">< 0,05)="" u="" 3.="" i="" 4.="" sedmici.="" u="" 2.,="" 3.="" i="" 4.="" sedmici,="" ea*="" efekat="" je="" bio="" statistički="" sličan="" onom="" kod="" 10="" mg/kg="" akarboze="" (slika="">

3.2. Utjecaj lijekova na aktivnost glukozidaze, in vivo studija.

Kod normalnih kontrolnih štakora, glukoza u krvi je povećana na 1,48 g/l.30 min nakon punjenja saharozom, a zatim se vraća na normalnu vrijednost za 120 min, dok je kod neliječenih dijabetičkih štakora glikemija bila povećana na 2,76 g/l na 30 min punjenja saharozom da bi se postigla 2,85 g/l na 120 min. 50 mg/kg EaTh je značajno (p < 0,05)="" spriječilo="" hiperglikemiju="" izazvanu="" opterećenjem="" saharozom="" na="" 30="" i="" 60="" minuta="" u="" poređenju="" sa="" neliječenim="" dijabetičkim="" štakorima.="" u="" grupi="" od="" 200="" mg/kg="" aqth="" pokazano="" je="" antihiperglikemijsko="" dejstvo.="" nivo="" glukoze="" u="" krvi="" dostigao="" je="" 2,63="" g/l="" i="" 2,70="" g/l="" na="" 30="" i="" 60="" min,="" a="" smanjio="" se="" na="" 2,21="" g/l="" na="" 120="" min.="" 10="" mg/kg="" akarboze="" je="" značajno="" (p="">< 0,01)="" spriječilo="" hiperglikemiju="" izazvanu="" opterećenjem="" saharozom="" na="" 30,="" 60="" i="" 120="" minuta="" u="" poređenju="" sa="" kontrolom="" dijabetesa.="" efekat="" akarboze="" bio="" je="" statistički="" sličan="" eaththeffffectu="" (slika="">

3.3. Efekat leka

Tretman tjelesne težine, unosa hrane i vode. Povećanje tjelesne težine kod neliječenih dijabetičkih štakora je značajno smanjeno (p < {{0}}.05)="" u="" poređenju="" sa="" normalnim="" štakorima.="" aqth="" je="" značajno="" (p="">< 0.05)="" spriječio="" pad="" tjelesne="" težine="" u="" poređenju="" sa="" neliječenim="" dijabetičkim="" štakorima.="" pacovi="" tretirani="" eath="" i="" akarbozom="" nisu="" značajno="" (p=""> 0.0}5) promijenili povećanje tjelesne težine u poređenju sa neliječenim dijabetičkim štakorima. Na kraju tretmana, unos vode se nije promijenio kod netretiranih dijabetičkih štakora, AqTh, EaTh i grupe akarboze u poređenju sa podacima prije tretmana, dok je unos hrane značajno povećan kod dijabetičkih štakora i štakora tretiranih AqTh-, EaTh- i akarbozom. (p < 0,05,="" p="">< 0,05,="" p="">< 0,05,="" a="" dp="">< 0,01,="" respektivno)="" u="" poređenju="" sa="" pre="" davanja="" leka="" (tabela="">

3.4. Utjecaj liječenja lijekovima na urinarne parametre.

Nakon {{0}}nedeljnog perioda tretmana, kreatinin u urinu i glikozurija su značajno povećani (p < 0.05="" ip="">< 0,001,="" respektivno)="" kod="" neliječenih="" dijabetičkih="" štakora="" u="" poređenju="" sa="" normalni="" pacovi.="" oralna="" primjena="" aqth="" je="" značajno="" smanjila="" (p="">< 0,05)="" kreatinin="" u="" urinu="" u="" poređenju="" sa="" neliječenim="" dijabetičkim="" štakorima,="" ali="" nije="" uočena="" značajna="" razlika="" u="" glikozuriji="" u="" poređenju="" sa="" neliječenim="" dijabetičkim="" štakorima.="" eath="" tretman="" je="" spriječio="" povećanje="" kreatinina="" u="" urinu="" u="" poređenju="" sa="" normalnim="" štakorima;="" međutim,="" eath="" nije="" značajno="" promijenio="" glikozuriju.="" s="" druge="" strane,="" učinak="" aqth="" i="" eath="" na="" kreatinin="" i="" glikozuriju="" u="" urinu="" bio="" je="" statistički="" sličan="" onom="" od="" 10="" mg/kg="" akarboze.="" konačno,="" nije="" bilo="" značajne="" razlike="" u="" volumenu="" mokraće="" kada="" se="" uporede="" podaci="" prije="" i="" nakon="" tretmana="" s="" aqth,="" eath="" ili="" akarbozom="" (tabela="">

3.5. Utjecaj liječenja lijekovima na biohemijske parametre.

Nakon {{0}}nedjeljnog perioda liječenja, HbA1c je značajno povećan (p < 0.05),="" kod="" neliječenih="" dijabetičkih="" štakora,="" u="" poređenju="" sa="" normalnim="" štakorima.="" oralna="" primjena="" aqth="" spriječila="" je="" povišenje="" hba1c="" u="" poređenju="" sa="" normalnim="" pacovima.="" na="" kraju="" perioda="" liječenja,="" količina="" glikogena="" u="" jetri="" je="" značajno="" smanjena="" (p="">< 0,05)="" kod="" neliječenih="" dijabetičkih="" štakora="" u="" poređenju="" sa="" normalnim="" štakorima.="" tretmani="" aq*="" i="" ea*="" nisu="" pokazali="" značajan="" uticaj="" na="" glikogen="" u="" jetri="" u="" poređenju="" sa="" netretiranim="" dijabetičkim="" štakorima,="" dok="" tretman="" akarbozom="" nije="" promenio="" količinu="" glikogena="" u="" jetri="" u="" poređenju="" sa="" normalnim="" pacovima.="" konačno,="" rezultati="" ukupnog="" holesterola="" i="" triglicerida="" pokazuju="" da="" nema="" značajnih="" promena="" nakon="" tretmana="" aqth,="" eath="" ili="" akarbozom="" u="" poređenju="" sa="" normalnim="" i="" dijabetičkim="" štakorima="" (tabela="">

3.6. Utjecaj liječenja lijekovima na težinu organa.

Tabela 4 prikazuje jetru,bubregi težinu srca na kraju perioda lečenja. Rezultati ukazuju na tobubregtežina je značajno povećana kod neliječenih dijabetičkih štakora u poređenju sa normalnim štakorima. Tretman sa 200 mg/kg AqTh ili 50 mg/kg EaTh nije promijenio težinu jetre, bubrega i srca u poređenju sa neliječenim dijabetičkim štakorima, dok postoji značajno povećanje težine jetre i srca kod pacova tretiranih akarbozom u poređenju sa neliječenim dijabetičkim štakorima. .

3.7. Histopathological Observation

3.7.1. Promjene pankreasa.

Svetlosno mikroskopsko posmatranje ćelija otočića pankreasa kod normalnih pacova pokazuje normalan histološki izgled velikog prečnika i visoke gustine granulacije (Slika 3). Kod neliječenih dijabetičkih štakora, značajno smanjenje promjera i broja ćelija otočića (p < 0.001="" i="" p="">< 0.01,="" respektivno="" )="" je="" uočeno.="" tretmani="" sa="" 200="" mg/kg="" aqth="" značajno="" su="" spriječili="" smanjenje="" promjera="" i="" broja="" ćelija="" langerhansovog="" otočića="" (p="">< 0,01="" i="" p="">< 0,05,="" respektivno).="" istovremeno,="" 50="" mg/kg="" eath="" ima="" značajno="" (p="">< 0,05)="" zaštićen="" prečnik="" i="" broj="" ćelija="" od="" redukcije.="" tretman="" sa="" 10="" mg/kg="" akarboze="" je="" spriječio="" značajno="" (p="">< 0,05)="" smanjenje="" broja="" ćelija="">

3.7.2. Promjene bubrega.

Massonovo bojenje označava plavo/zelena kolagena vlakna, smeđa jezgra, citoplazmu crvenih mišićnih vlakana i narandžasta krvna zrnca. Minimalni tubulointersticijski kolagen je uočen u normalnoj grupi (Slika 4). Značajno povećanje (p < 0.01)="" tubulointersticijalnog="" kolagena="" je="" otkriveno="" kod="" neliječenih="" dijabetičkih="" štakora.="" tretman="" sa="" 20{{10}}="" mg/kg="" aqth="" i="" 50="" mg/kg="" eath="" su="" značajno="" spriječili="" (p="">< 0,001="" i="" p="">< 0,05)="" tubulointersticijski="" kolagen="" u="" poređenju="" sa="" neliječenim="" dijabetičkim="" štakorima,="" ali="" tretman="" sa="" 10="" mg/kg="" akarboze="" nije="" značajno="" promijenio="" (p=""> 0,05) S druge strane, glomeruli kolagen je uočen kod 33,3 posto normalnih pacova. Kod dijabetičkih štakora, glomeruli kolagen je otkriven kod svih štakora (100 posto). Tretman sa 200 mg/kg AqTh značajno je smanjio (p < 0,05)="" kolagen="" glomerula="" na="" 40="" posto,="" ali="" ea*="" i="" akarboza="" nisu="" (slika="">

3.7.3. Promjene jetre.

Ispitivanje preseka obojenih hematoksilinom i eozinom pokazalo je da normalni pacovi imaju normalan histološki izgled. Kod neliječenih dijabetičkih štakora uočena je važna degenerativna promjena u tkivu jetre. Lipidne kapljice su se pojavile kod svih pacova (100 posto). Tretman sa 200 mg/kg AqTh i 50 mg/kg EaTh je značajno (p < 0,05)="" umanjio="" ovaj="" efekat.="" procenat="" zaštite="" bio="" je="" 60="" odnosno="" 50="" odsto.="" međutim,="" tretman="" sa="" 10="" mg/kg="" akarboze="" nije="" ublažio="" ovo="" oštećenje="" jetre="" (slika="">

3.7.4. Aorta Changes.

Svetlosno mikroskopsko posmatranje pokazuje da neliječeni dijabetički štakori imaju normalan prečnik aorte u poređenju sa normalnim štakorima. Tretman sa 200 mg/kg AqTh, 50 mg/kg EaTh ili 10 mg/kg akarboze nije značajno promijenio prečnik aorte u poređenju sa normalnim i dijabetičkim štakorima (Slika 6).

4. Diskusija

U ovoj studiji smo po prvi put pokazali antidijabetički učinak srednjeročne primjene T. hirsuta (4 sedmice) i njeno prevencijububrežnii komplikacije na jetri kod dijabetičkih štakora izazvanih STZ.

Naši rezultati su pokazali da srednjoročni tretman sa 200 mg/kg AqTh ili 50 mg/kg EaTh značajno smanjuje glukozu u krvi natašte kod dijabetičkih štakora tretiranih STZ u poređenju sa pacovima sa dijabetesom koji nisu tretirani STZ. EaTh je pokazao sličnu inhibitornu aktivnost -glukozidaze u poređenju sa 10 mg/kg akarboze, ali AqTh nije inhibirao aktivnost -glukozidaze nakon punjenja saharozom. Ovi rezultati pokazuju da je srednjoročni antihiperglikemijski efekat Ea* povezan sa inhibicijom intestinalne glukozidaze. Dakle, ovaj nalaz potvrđuje naše prethodne rezultate [13], dok se čini da je antidijabetički efekat Aq* povezan sa drugim mehanizmom od -glukozidaznog puta. Osim toga, primijetili smo smanjenje nivoa HbAc1 kod dijabetičkih pacova liječenih Aq*, dok tretman Ea* nije promijenio nivoe HbAc1 u poređenju sa neliječenim dijabetičkim štakorima. Ovo objašnjava zašto se inhibitori -glukozidaze često propisuju s drugim antidijabetičkim lijekovima u liječenju dijabetesa.

Histopatološka studija preseka pankreasa pokazala je da primena AqTh i EaTh tokom 4 nedelje značajno povećava prečnik i broj ćelija u Langerhansovim ostrvcima. Slične studije su dokazale da mnogi biljni ekstrakti značajno obnavljaju prečnik otočića i broj ćelija kod dijabetičkih štakora [23-25].

Shodno tome, vjerojatni mehanizam djelovanja AqTh u kontroli razine glukoze u krvi može biti pojačano lučenje inzulina iz stanica pankreasa. Kao i kod drugih mogućih mehanizama, AqTh može senzibilizirati inzulinski receptor na inzulin ili stimulirati matične stanice Langerhansovih otočića u pankreasu STZ-indukovanih dijabetičkih štakora [25].

Stoga zaključujemo da se antihiperglikemijska fitokemijska jedinjenja prisutna u AqTh razlikuju od onih u EaTh.

Mnoge studije su dokazale da sekundarni metaboliti kao što su flavonoidi, tanini i terpenoidi imaju potencijalne inhibitorne efekte na alfa-glukozidazu [26-28]. U prethodnoj studiji našeg tima, frakcija T. hirsutahas bogata polifenolima pokazala je snažan antidijabetički efekat kod dijabetičkih štakora[29]. Dakle, inhibicijsko djelovanje EaTh na -glukozidazu je vjerovatno zbog prisustva flavonoida.

Dobro je poznato da je dijabetes povezan s makrovaskularnim i mikrovaskularnim komplikacijama kao što je nefropatija. Statistike su pokazale da od svih pacijenata na dijalizi, dijabetičari predstavljaju 20,6 posto u 2001. godini naspram 13,1 posto u 1995. godini i 6,9 posto u 1989. godini. Stopa smrtnosti pacijenata na dijalizi je neznatno viša kod dijabetičara nego kod nedijabetičara (241,4/10053 vs. 099). osoba-godina) [30]. Prosječno preživljavanje dijabetesa tipa 2 na dijalizi je otprilike 3 godine [31, 32]. Dijabetičku nefropatiju karakterizira nakupljanje nekih proteina kao što je kolagen u glomerularnom mezangumu i u tubulointersticijskom prostoru koji dovode dobubrežnifibroza i tako daljebubrežnineuspjeh [33–35]. U ovoj studiji, pokazali smo da srednjoročna oralna primjena 200 mg/kg AqTh ili 50 mg/kg EaTh sprječava povećanje kreatinina u urinu i tubulointersticijski bubrežni kolagen u poređenju sa neliječenim dijabetičkim štakorima kao što je prikazano ububreghistopatološki rezultati. Ovi nalazi pokazuju da AqTh i EaTh mogu zaštititi od fibroze bubrega kroz inhibiciju akumulacije proteina ekstracelularnog matriksa (ECM). Ovi rezultati su slični drugim etnofarmakološkim studijama koje su pokazale da bijeli luk i Sclerocaryabirrea poboljšavaju proces renalne fibroze kod dijabetičke nefropatije [36, 37]. Zaštitni efekat protiv bubrežne akumulacije ECM proteina je posledica inhibicije protein kinaze B/meta sisara signalnog puta rapamicina (PKB/mTOR) [38]. Nedavne istraživačke studije su pokazale da aktivacija PKB izaziva aktivaciju mTORC1 i njegovog nizvodnog proteina p70S6K, koji su kritični regulatori ćelijskog rasta, ćelijske proliferacije i sinteze proteina [39, 40].

Efekat odcistanchepoboljšatifunkciju bubrega

Slijedom toga, liječenje dijabetesa melitusa AqTh i EaTh spojevima moglo bi imati korisne efekte nabubrežnifunkcija kod dijabetičara

Dokazi sugeriraju da je kod dijabetičkih štakora uočena kompleksna promjena u aktivnostima antioksidativnih enzima [41]. Ova promjena dovodi do oštećenja tkiva i igra važnu ulogu u patogenezi dijabetičkih komplikacija. U ovoj studiji, histopatološki rezultati jetre pokazuju da neliječeni dijabetički štakori razvijaju steatozu jetre koju karakteriziraju kapljice lipida. Druge studije su otkrile da je jetra nekrotizirana kod STZ-indukovanih dijabetičkih štakora [42]. STZ se smatra klasičnim modelom indukcije dijabetesa jer provocira toksičnost za stanice pankreasa i ćelijsku smrt [43], što rezultira hipoinzulinemijom i hiperglikemijom. Inzulin igra važnu metaboličku ulogu kao supresor lipolize u masnom tkivu [44]. Dakle, hipoinzulinemija kod dijabetesa dovodi do povećanog oslobađanja slobodnih masnih kiselina (FFA) u krvotok [45] i dotoka kiselina u jetru. Intrahepatična akumulacija triglicerida nastaje kada priliv lipida u jetru nadmaši kapacitet jetre da izvozi trigliceride u krvotok [45] što uzrokuje razvoj steatoze jetre kao dijabetičke komplikacije [46].

U ovoj studiji, histopatološki podaci pokazuju da srednjoročna oralna primjena 200 mg/kg AqTh ili 50 mg/kg EaTh značajno štiti jetru pod steatozom kroz smanjenje akumulacije lipidnih kapljica. Slične nalaze izvijestili su Eliza et al. [47] gdje je Costus speciosus smanjio poremećaj jetre. Osim toga, druge studije su pokazale da Camellia oleifera sedameliorira steatozu jetre putem regulacije FFA [48], a kurkumin smanjuje steatohepatitis i taloženje lipida jer je antioksidans i djeluje protiv upale i uklanjanja slobodnih radikala [49]. Međutim, tretman akarbozom nije imao ovo svojstvo za zaštitu jetre. Ovo potvrđuje nuspojavu ovog lijeka na jetru [50].

Nadalje, T. hirsuta sadrži sterole, kumarine, terpene, tanine, alifatski alkohol, lakton, alkane i alkanole [51]. Zanimljivo je da AqTh i EaTh antihiperglikemijski i antidijabetički efekti mogu biti posljedica prisustva ovih fitokemikalija ili drugih nepoznatih spojeva.

5. Zaključci

Zaključno, naša studija je pokazala da je srednjoročna primjena AqTh i EaTh T. hirsuta imala potencijal da smanji glukozu u krvi kod STZ-induciranih dijabetičkih štakora. Antihiperglikemijski efekat EaTh može se delimično objasniti inhibicijom aktivnosti intestinalne glukozidaze. A antihiperglikemijska aktivnost AqTh može se pripisati stimulaciji lučenja inzulina iz stanica otočića pankreasa. Osim toga, AqTh i EaTh su pokazali ključni preventivni učinak protivbubrežnikomplikacije fibroze i steatoze jetre. Stoga, ovi nalazi sugeriraju da se AqTh i EaTh mogu smatrati efikasnim oralnim antidijabetičkim tretmanom. Trenutno su naše studije fokusirane na izolaciju i identifikaciju aktivnih spojeva EaTh i AqTh, koji su odgovorni za antidijabetički učinak T. hirsuta.

Skraćenice

AqTh: Vodeni ekstrakt plus ymelaea hirsuta

DM1: dijabetes tipa 1

DM2: dijabetes tipa 2

EaTh: Etil acetatna frakcija plus ymelaea hirsuta

ECM: Ekstracelularni matriks

ESRD: Završna fazabubrežnibolest

FFA: Slobodne masne kiseline

mTOR: Cilj rapamicina kod sisara

PKB: Protein kinaza B

STZ: Streptozotocin

T. hirsuta: plus ymelaea hirsuta

UMPO: Herbarium University Mohamed Premier of

Oujda, Maroko

WHO: Svjetska zdravstvena organizacija.

Dostupnost podataka

Podaci koji su korišteni za potporu nalaza ove studije dostupni su na zahtjev autora.

Sukobi interesa

Autori izjavljuju da nema sukoba interesa.

Priznanja

Autori žele izraziti zahvalnost Ramdaouiju Karimu i Badraouiju Mustaphi za njihovu tehničku pomoć.

cistanche bienfaitszabubreg

Iz: 'Povoljan učinak Thymelaea hirsuta na degeneraciju otočića gušterače, fibrozu bubrega i oštećenja jetre' Sanae Abid

---The Scientific World Journal