Odgovarajući nivo vježbanja ublažava crijevnu disbiozu i povećanje valerinske kiseline kako bi se poboljšala neuroplastičnost i kognitivne funkcije nakon operacije kod miševa 4. dio

Profiliranje mikrobiote crijeva

Svježi izmet miševa je sakupljen za profiliranje crijevne mikrobiote. Miševi su stavljeni pojedinačno u autoklavirani kavez za sakupljanje fecesa i pušteni da slobodno vrše nuždu. Feces je odmah sakupljen u sterilne Eppendorf epruvete na suvom ledu, a zatim pohranjen na -80 stepeni do dalje obrade. DNK bakterija je ekstrahovan sa Power Lyzer Power kitom za izolaciju DNK tla prema našim prethodnim protokolima [11].

Nedavna istraživanja pokazuju da mikrobiom crijeva ima vrlo važan utjecaj na naše pamćenje. Upravo, bakterije u crijevnoj mikrobioti mogu utjecati na nervni sistem ljudskog mozga, mijenjajući tako njegovu funkciju pamćenja. Ovo je iznenađujuće otkriće jer znači da možemo poboljšati svoje pamćenje promjenom mikrobioma crijeva.

Dakle, kao neko ko pokušava poboljšati svoje pamćenje, šta možete učiniti da poboljšate svoj crijevni mikrobiom? Odgovor je jednostavan: fokusirajte se na uravnoteženu prehranu. Uravnotežena prehrana ne samo da pomaže u regulaciji ravnoteže vaše crijevne mikrobiote, već i poboljšava sve aspekte tjelesne funkcije.

Prvo, moramo se fokusirati na raznoliku ishranu koja je bogata dijetalnim vlaknima. Ishrana bogata vlaknima može pomoći u održavanju raznolikosti vašeg crijevnog mikrobioma, ključnog faktora u promicanju dobrog zdravlja. U isto vrijeme, također moramo osigurati da unosimo dovoljno visokokvalitetnih proteina i zdravih masti u obrocima. Ovi nutrijenti mogu poboljšati funkciju pamćenja i nervnu provodljivost.

Osim toga, redovno vježbanje i smanjenje stresa također mogu promovirati ravnotežu i raznolikost u crijevnom mikrobiomu. Bilo da se radi o dubokom disanju, meditaciji ili prakticiranju joge, sve su to efikasni načini za smanjenje stresa. Vježbanje može poboljšati kontraktilnost crijeva, povećati vitalnost crijeva i promovirati cikličku detoksikaciju, čime pomaže u promicanju ravnoteže i raznolikosti crijevne mikrobiote.

Sve u svemu, ne trebamo se fokusirati samo na našu prehranu i fizičko zdravlje, već i na našu crijevnu mikrobiotu. Promjena naših prehrambenih navika i smanjenje stresa mogu promovirati ravnotežu i raznolikost u našoj crijevnoj mikrobioti, što nam može pomoći da poboljšamo pamćenje i funkciju nervnog sistema. Stoga, hajde da zajedno obratimo pažnju na zdravlje crijeva i poboljšamo pamćenje i fizičku kondiciju!

Vidi se da moramo poboljšati pamćenje, a cistanche deserticola može značajno poboljšati pamćenje jer je cistanche deserticola tradicionalni kineski ljekoviti materijal koji ima mnogo jedinstvenih učinaka, od kojih je jedno poboljšanje pamćenja. Djelotvornost Cistanche deserticola proizlazi iz brojnih aktivnih sastojaka koje sadrži, uključujući taninsku kiselinu, polisaharide, flavonoidne glikozide, itd. Ovi sastojci mogu promovirati zdravlje mozga na različite načine.

Kliknite znati načine za poboljšanje funkcije mozga

Biblioteke sekvenciranja hipervarijabilnog V3–V4 regiona pripremljene su prema uputstvima sistema Illumina MiSeq. Ukratko, 12,5 ng DNK korišteno je kao DNK šablon za prvi 16 S rRNA PCR. Korišteni prajmeri su bili sljedeći: F: 5′-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAGCCTACGGGNGGCWGCAG-3′i R: 5′-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTAAGAGACAGGACTACTACHVGCCGTATC-3′i R: 5′-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTAAGAGACAGGACTACHVGGGTATC}′
Amplikoni su zatim očišćeni AMPure XPmagnetic perlama i zatim korišteni za Index PCR korištenjem Nextera XTIndex kompleta. Qubit dsDNA HS komplet za analizu i TapeStation visokoosjetljivi D1000ScreenTape (Agilent, Blacksburg, VA, SAD) korišteni su za mjerenje koncentracija PCR proizvoda i normalizaciju količine za pripremu biblioteke.

Sekvenciranje je obavljeno na Illumina MiSeq instrumentu pomoću MiSeq kompleta reagensa v2 (500 ciklusa). Podaci su analizirani pomoću MiSeqReporter softvera Metagenomics workflow v2.5.1.3 (Illumina, San Diego, Kalifornija, SAD). Uparena očitanja dobijena sekvenciranjem sa dvostrukim terminalom spojena su u sekvencu kroz Pandaseq softver. Dobijena su duga očitavanja sa visokovarijabilnim regionima.

Čitanja čiji je prosječni phred rezultat u prozoru (veličina 5 bp, dužina koraka 1 bp) manji od 20 su srezana. Čitanja koja sadrže dvosmisleno "N" ili dužine < 220 bp su odbačena. Nakon kontrole kvaliteta originalnih podataka, visokokvalitetne sekvence bez himera su raspoređene prema obilju od velikih do malih, a zatim grupisane sa 97% sličnosti u operativne taksonomske jedinice (OTU). Smatralo se da svaki OTU predstavlja vrstu. Da bi se izbjeglo odstupanje u analizi uzrokovano različitim veličinama podataka sekvenciranja uzoraka, broj čitanja u OTU je unet prema minimalnom broju sekvence koji se podudara sa OTU-om kada je dubina sekvenciranja bila dovoljna. Alfa raznolikost je analizirana slučajnim niveliranjem.

ARead je ekstrahovan iz svakog OTU-a kao reprezentativna sekvenca. Ta reprezentativna sekvenca je upoređena sa bazom podataka projekta ribosomske baze podataka. Vrste su klasifikovane za svaki OTU, a dobijene su tabele brojnosti vrsta za naknadnu analizu. Odabir OTU-a je obavljen korištenjem Uclust-a na softverskoj platformi QIIME v1.9.1.

Alfa raznovrsnost uključujući Chao1 indeks i indeks pokrivenosti robom korištena je za analizu raznolikosti vrsta u uzorku. Beta analiza diverziteta korišćena je za upoređivanje razlika u raznolikosti vrsta među uzorcima i okarakterisana analizom glavnih koordinata (PCoA) na osnovu Brej-Kertisove udaljenosti. Razlike među grupama testirane su analizom sličnosti (ANOSIM).

Plazma SCFA profilisanje

Koncentracije SCFA u plazmi su kvantificirane pomoću 7890–5977 gashromatografije-masene spektrometrije (GC-MS, Agilent, Blacksburg, VA, USA). Uzorci plazme su sakupljeni od miševa u gore opisanim vremenskim tačkama, pohranjeni na -8{ {20}} stepen brzo, a zatim odmrznuti na sobnu temperaturu za obradu. Ukratko, uzorak plazme od 100 ul pomiješan je vorteksom sa 900 uletanola (koji sadrži 0,5% HCl, V/V). Ultrazvučna obrada je primijenjena 40 min, a zatim su uzorci centrifugirani na 14,000 RPM 10 min. Supernatant uzoraka je mjeren GC-MS analizom na Agilent 7890–5977 GC-MS uz elektronsku udarnu jonizaciju i DB-FFAP kapilarna kolona (30 m × 0,25 mm × 0,25 μm).

Kvantifikacija kortikalne valerinske kiseline

Količina valerinske kiseline u cerebralnom korteksu sakupljena 24 sata nakon posljednje intraperitonealne injekcije valerinske kiseline određena je metodom sličnom onoj prije [51, 52]. Ukratko, 0.1 g cerebralnog korteksa ispran u 500 µl vodenog acetonitrila. Supernatant je ekstrahovan sa 8 ml pufera za ekstrakciju (heksan: dietil etar=1:1) i centrifugiran na 1800 g 5 min. Sakupljeno je 7,5 ml supernatanta, pomešano sa 93 µl 20 mMKOH u metanolu i osušeno na 40 stepeni pod gasovitim azotom. Osušeni ostatak je rekonstituisan u 50 µl 2,5% 18-Crown-6 u acetonitrilu i dalje derivisan sa 9-hlorometil antracenom u acetonitrilu uz dodatak tetrametilamonijum hidroksida.

Konačno, 30 µl rastvora za derivatizaciju stavljeno je u kolonu Acclaim C18 (3 µm, 4,6 × 100 mm, Thermo Scientific) i razdvojeno u Ultimate 3000 tečnoj hromatografiji visokih performansi (HPLC, Thermo Scientific) opremljenom UV-vidljivim detektorom. Pik derivatizirane valerinske kiseline je detektovan na talasnoj dužini od 254 nm.2-Etilmaslačna kiselina (2-EA) je dodana kao interna referentna kontrola. Površina pika valerinske kiseline je izmjerena kao mAU*min i njegova površina vrha svakog uzorka je normalizirana sa onim 2-EA u uzorku. Konačni rezultati su predstavljeni kao omjeri grupe valerinske kiseline i grupe NS.

Sakupljanje moždanog tkiva

Miševi su izvagani i anestezirani izofluranom 6 h, 24 h, 48 h, 72 h, 96 h i 7 dana nakon operacije i perfuzirani sa 4 stepena NS za prikupljanje moždanog tkiva. Ovi hipokampusi su korišteni za ELISA analizu ili RNA test. Cijeli mozak kod Bregme -3 do -6 mm korišten je za imunofluorescentno bojenje. Sve procedure disekcije izvedene su na ledu.

Priprema biblioteke mRNA i Illumina Hiseq sekvenciranje

The hippocampi harvested at 24 h after surgery from the control group, surgery group, and Exe+Sur group in the first experiment were placed in liquid nitrogen for 1 h and then stored in a −80 °C freezer quickly for no >1 tjedan. Prečišćavanje RNK, reverzna transkripcija, konstrukcija biblioteke i sekvenciranje izvedeni su u WuXi NextCODE u Šangaju prema uputama proizvođača (Illumina).

Biblioteke sekvenciranja fokusirane na mRNA iz ukupne RNK pripremljene su korištenjem kompleta za pripremu uzoraka Illumina TruSeq® RNA. PolyA mRNA je pročišćena od ukupne RNK korištenjem oligo-d-vezanih magnetnih kuglica, a zatim fragmentirana puferom za fragmentaciju. Uzimajući ove kratke fragmente kao šablone, prvi lanac cDNK je sintetiziran korištenjem reverzne transkriptaze i nasumičnih prajmera, nakon čega je uslijedila sinteza drugog lanca cDNK. Zatim je sintetizirana cDNK podvrgnuta krajnjoj popravci, fosforilaciji i dodavanju 'A' baze prema Illumininom protokolu za izgradnju biblioteke.

Adapteri za sekvenciranje Illumina dodani su fragmentima cDNK. Nakon PCR amplifikacije za obogaćivanje DNK, AMPure XPBeads (Beckman) su korištene za čišćenje ciljnih fragmenata od 200–300 bp. Nakon izgradnje biblioteke, Qubit 3.0 fluorometar dsDNA HS Assay (Thermo Fisher Scientific) je korišteno za kvantificiranje koncentracija rezultirajućih biblioteka sekvenciranja, dok je distribucija veličine analizirana korištenjem Agilent BioAnalyzer 2100 (Agilent). Sekvenciranje je izvedeno korištenjem Illumina sistema slijedeći protokole koje je obezbijedila Illumina za sekvenciranje 2 × 150 parnih krajeva u WuXi NextCODE u Kini.

Ekspresija hipokampalne mRNA kvantitativnom reakcijom polimeraselana (Q-PCR)

Hipokampus je sakupljen 24 h nakon operacije iz kontrolne grupe, grupe za vježbe, grupe operacija, Exe+Sur grupe, Trans-Control+Sur grupe, Trans-Exe+Sur grupe, Exe+Sur+NS grupe i Exe+Sur+ Val grupa je stavljena u tečni azot na 1 h, a zatim čuvana u zamrzivaču na -80 stepeni ne duže od 3 dana. Ekstrakcija RNK, reverzna transkripcija RNA-na-cDNA i q-PCR izvedeni su kao što smo prethodno opisali [49, 53]. Ukratko, RNA je ekstrahirana pomoću RNeasy Micro kompleta. Reverzna transkripcija je završena korištenjem 5X All-in-One MasterMixa. Konačno, za kvantitativnu kvantifikaciju korišćen je CFX konekt sistem u realnom vremenu (Bio-Rad). Prajmeri za qPCR su bili: C3ar1-F:TGGGCTGGTGCTGTGGGTAG i C3ar1-R: GATGGCGAAGGCGGTTCTCAC. Relativna ekspresija gena za C3ar1 je izračunata korišćenjem uporednog ciklusa praga ΔΔCt i ekspresije gena za normalnu održavanje domaćinstva. Nivoi mRNK ciljnih gena izraženi su kao fold-povećanja u odnosu na relevantnu grupu, respektivno.

Određivanje citokina i GDNF u hipokampusu

IL{{0}} , IL-6, C3 i GDNF u hipokampusu su otkriveni korištenjem ELISA kompleta. Za testiranje IL-1, IL,-6 i GDNF, moždana tkiva su homogenizovana na ledu u RIPA puferu koji sadrži 25 mM Tris-HCl sa pH 7,6, 150 mMNaCl, 1% natrijum deoksiholat, 0,1% SDS i koktel inhibitora proteaze koji sadrži 10 mg/ml aprotinina, 5 mg/ml pepstatina, 5 mg/ml leupeptina i 1 mM fenilmetan sulfonil fluorida.

Za C3 testiranje, moždana tkiva su homogenizovana na ledu u PTR puferu (isporučen u kompletu). Supernatant je sakupljen za ELISA detekciju nakon što je homogenat centrifugiran na 13,000 g 20 minuta na 4 stepena i koncentracija proteina je određena testom BCA proteina (Bio-Rad, Hemel Hempstead, Herts, UK). IL-1 , IL6, C3 i GDNF u supernatantu mozga detektovani su prema uputama proizvođača za ELISA, a njihova količina u svakom uzorku u mozgu je normalizovana ukupnim sadržajem proteina i izražena kao pg/ mg proteina.

Western blotting

Western blot je izveden kao što je prethodno opisano [49]. Ukratko, koncentracije proteina u uzorcima određivane su pomoću BCA proteinskog testa. Dvadeset mikrograma svakog uzorka podvrgnuto je Westernblotting analizi koristeći sljedeća primarna antitijela: zečji poliklonalni anti-postsinaptički protein gustine 95 (PSD95) u razrjeđenju 1:1000, zečji poliklonalni anti-sinapsin 1 u 1:1000 razrjeđenju i zečji anti{10} tubulinsko antitelo u razblaženju 1:1000. Slike su skenirane pomoću Image Master IIscanner-a (GE Healthcare, Milwaukee, WI, SAD) i analizirane pomoću softvera ImageQuant TL v2003.03 (GE Healthcare). Signali traka od interesantnih proteina su normalizovani na one odgovarajućeg tubulina i izraženi kao frakcije kontrolnog uzorka iz istih gelova.

Imunofluorescentno bojenje

Imunofluorescentno obeležavanje i kvantifikacija bojenja izvedeni su kao što smo opisali ranije [6, 54]. Ukratko, mozak je fiksiran u 4% paraformaldehidu na 4 stepena tokom 24 h, a zatim inkubiran u 30% saharoze preko noći na 4 stepena prije nego što je zamrznut u jedinjenju optimalne temperature rezanja. Koronalni dijelovi debeli 20-µm su izrezani uzastopno iz Bregme −3 do −6 mm pomoću kriostata i postavljenih na mikroskopska stakla.

Nakon ispiranja u Tris-puferiranoj fiziološkoj otopini (TBS), sekcije su blokirane u 10% magarećeg seruma plus 1% goveđeg serumskog albumina (BSA) u TBS-u koji sadrži 0,3% triton-X100 tokom 2 h na sobnoj temperaturi, a zatim inkubirani na 4 stepena preko noći sa sljedećim primarnim antitijelima: zečje monoklonsko anti-C3 antitelo (1:50), kozje monoklonsko anti-GFAP antitelo (1:200), pacovsko monoklonsko anti-C3ar antitelo (1:50) i zečje monoklonsko anti-Iba{{ 21}} antitelo (1:200).

Sekcije su isprane u TBS sa 0.1% Triton-x 100. Magareće anti-zečje IgG antitelo konjugovano sa Alexa Fluor 594 (1:200), magareće anti-kozje IgG antitelo konjugovano sa Alexa Fluor 488 (1:200) , magareće anti-pacovsko IgG antitelo konjugirano sa AlexaFluor 594 (1:200) ili magareće anti-zečje IgG antitelo konjugovano sa AlexaFluor 647 (1:200) inkubirano je sa sekcijama 1 h na sobnoj temperaturi u mraku.

Sekcije su isprane u TBS, inkubirane sa Hoechst 33342(1:1000) za nuklearno bojenje, isprane i montirane sa Vectashield montažnim medijumom (H-1000; Vector Labs, Burlingame, CA). Slike imunobojenja su dobijene pomoću z-stack-a sa LSM710 mikroskopskim sistemom (ZEISS), a negativna kontrola izostavljajući inkubaciju sa primarnim antitelom je uključena u sve eksperimente.

Kvantifikacija je izvedena kako je prethodno opisano [6, 54]. Ukratko, snimljena je cijela regija zupčastog vijuga (DG) koja je bila pokrivena sa 2-3 polja koja se ne preklapaju iz svakog od šest uzastopnih dionica hipokampusa jednog miša. Broj perimage piksela sa intenzitetom iznad prethodno određenog nivoa praga smatran je pozitivno obojenim područjem za zainteresovani marker i kvantificiran korištenjem Image-pro plus 6.0 (Media Cybernetics, Inc., Rockville, MD, USA) i predstavljeno kao postotak pozitivne površine u ukupnoj površini. Šest mjerenja po mišu je zatim usrednjeno kako bi se prikazao nivo pozitivnog bojenja. Sve kvantitativne analize rađene su na slijepi način.

Davanje BrdU i imunofluorescentno bojenje

Sedam dana nakon operacije, miševima je dato 7 uzastopnih intraperitonealnih injekcija od 80 mg/kg 5′-bromo-2′-deoksiuridina (BrdU) u podne jednom dnevno, kao što je prethodno opisano [14]. Miševi su žrtvovani 5 dana kasnije da bi se sakupio hipokampus. Hipokampus je fiksiran u 4% paraformaldehideinu 0.1 M fiziološkom otopinom puferovanom fosfatom na 4 stepena tokom 24 h i ugrađen u parafin. Koronalni dijelovi mozga debljine pet mikrona isječeni su uzastopno od Bregme -2 do -4 mm. Uzimanje antigena je izvršeno inkubacijom sekcija sa natrijum citratnim puferom koji sadrži 10 mM natrijum citrata, 0,05% Tween 20 (pH 6,0) na 95-100 stepeni tokom 20 minuta.

Denaturacija DNK je urađena inkubacijom sa 1 N HCl na ledu 3 min, 2 N HCl na sobnoj temperaturi 3 min i na 37 stepeni 6 min. Sekcije su blokirane sa 5% magarećeg seruma u fiziološkom rastvoru puferovanom fosfatom (PBS) koji sadrži 0.5% triton-X 100 tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Sekcije su zatim inkubirane preko noći na 4 stepena sa sledećim primarnim antitelima: pacovsko monoklonsko anti-BrdU antitelo (1:100) i kozje monoklonsko anti-GFAP antitelo (1:200). Sekcije su inkubirane sa magarećim anti-pacovskim IgGantibody konjugiranim sa Alexa Fluor 594 (1:200) ili magarećom anti-kozjim IgGantibody konjugiranim sa Alexa Fluor 488 (1:200) 1 h na sobnoj temperaturi u mračnoj prostoriji. Nakon pranja u PBS-u, sekcije su obojene sa Hoechst 33342 (1:1000), isprane i montirane Vectashield medijumom za montažu (Vector Labs).

Slike su dobijene fluorescentnim mikroskopom sa kamerom uređaja sa nabojom (High MagOlympus BX51) i LSM710 konfokalnim mikroskopskim sistemom (ZEISS). Negativna kontrola koja izostavlja inkubaciju s primarnim antitijelom uključena je u sve eksperimente. Za svaki mišji mozak, šest uzastopnih sekcija hipokampusa korišteno je za brojanje stanica. Broj svih ćelija pozitivno obojenih za zainteresovani marker ili kombinaciju dva markera u subgranularnoj zoni DG svake sekcije je izbrojan. Kvantitativne analize su obavljene na slijepi način.

Golgijeva mrlja

Golgijevo bojenje je izvedeno pomoću FD Rapid GolgiStainTM kompleta. Devetnaest dana nakon operacije, mozgovi 6 miševa u svakoj grupi su uronjeni u rastvor za impregnaciju (rastvori A i B: 1:1) tokom 2 nedelje i zatim prebačeni u rastvor C tokom 3 dana. Koronalni dijelovi mozga debljine 100 μm i oko -2,7 mm od bregme su izrezani na vibratomu (Microslicer® 10110, Ted Pella, Inc. Kalifornija, SAD).

Kao što je opisano ranije[55, 56], više od 10 dobro individualiziranih neurona u DG regiji hipokampusa je nasumično odabrano od svakog miša, a sekvencijaloptičke višeslojne skenirajuće slike snimljene su u intervalu od 2,0 μma duž z ose (3DHISTECH, Pannoramic MIDI, Mađarska) sa 20 ×objektiva. Višeslojne datoteke za skeniranje su postavljene tako da postanu jedna jasna datoteka za skeniranje koja se može pregledati pomoću Caseviewer-a (3DHISTECH, Mađarska) na računaru. Ukupan broj grana i dendritska dužina izmjereni su softverom Fiji (Fiji-win64, NIH, USA). Složenost ukupnih dendritskih stabala (raskrižja) procijenjena je Sholl analizom. Za mjerenje gustine kičme, 5 neurona je odabrano od svake životinje.

Pet nasumično odabranih mikroskopskih polja na apikalnim ili bazalnim dendritima fotografisano je iz datoteka za skeniranje. Brojeve kičme u segmentima od 40 μms izbrojao je posmatrač koji je bio slijep na grupnu dodjelu. Rezultati su izraženi kao broj bodlji/10 μmsegmenata. Podaci o broju dendritskih grana, dužini i presecima, kao i gustini kičme kod jednog miša su usrednjeni da odražavaju nivo miša.

Statistička analiza

Proračun veličine uzorka za svaki eksperiment nije izvršen. Određivanje veličine uzorka uglavnom se temeljilo na našem iskustvu: veće veličine uzorka korištene su za eksperimente testiranja učenja i pamćenja od onih za biohemijske studije. Svi prikupljeni podaci uključeni su u analize. Podaci koji su nedostajali uključivali su životinje koje su ispunjavale unaprijed određene kriterije isključenja za vježbanje i životinje koje su uginule prije planiranog perioda posmatranja. Broj životinja koje su dale podatke za analizu za svako eksperimentalno stanje naveden je u legendama na slikama.

Rezultati su predstavljeni kao srednja vrijednost ± SD (podaci normalne distribucije) ili medijana ± interkvartilni raspon (ne podaci o normalnoj distribuciji) sa prikazom podataka o pojedinačnim životinjama u trakastom grafikonu i srednjim vrijednostima ± SD na linijskim grafikonima. Podaci sa treninga BarnesMazea analizirani su dvosmjernom ponovljenom analizom varijanse (ANOVA) praćeno Tukeyjevim testom.

Podaci o mikrobioti crijeva analizirani su kako je opisano u odjeljku Profiliranje crijevne mikrobiote. Ostali podaci su analizirani jednosmjernom ANOVA-om praćenom Tukeyjevim testom ako su podaci bili normalno raspoređeni, jednosmjernom ANOVA-om na rangu, praćenom Tukeyjevim testorom Student-Newman-Keuls metoda ako podaci nisu normalno raspoređeni, dvosmjernom ANOVA-om , t-testom ili testom zbira ranga. Značajna razlika je definisana kao P < 0.05 na osnovu dvostranog testiranja hipoteza.

Prilagođavanja za višestruka poređenja nisu izvršena. Sve statističke analize su obavljene sa SigmaStat (Systat Software, Inc., Point Richmond, CA, USA).

REFERENCE

1. Moller JT, Cluitmans P, Rasmussen LS, Houx P, Rasmussen H, Canet J, et al. Dugotrajna postoperativna kognitivna disfunkcija u studiji ISPOCD1 kod starijih osoba. ISPOCDinvestigators. Međunarodna studija postoperativne kognitivne disfunkcije. Lancet.1998;351:857–61.

2. Monk TG, Weldon BC, Garvan CW, Dede DE, van der Aa MT, Heilman KM, et al. Prediktori kognitivne disfunkcije nakon velike nekardijalne operacije. Anesteziologija. 2008;108:18–30.

3. Newman MF, Kirchner JL, Phillips-Bute B, Gaver V, Grocott H, Jones RH, et al. Longitudinalna procjena neurokognitivne funkcije nakon operacije koronarne premosnice. N. Engl J Med. 2001;344:395–402.

4. Hall M, Schwartzman A, Zhang J, Liu X. Podaci o ambulantnoj hirurgiji iz bolnica i centara za ambulantnu hirurgiju: 2010. Nacionalni zdravstveni statistički izvještaj 2017.

5. Li Y, Chen D, Wang H, Wang Z, Song F, Li H, et al. Intravenski naspram hlapljivih anestezijskih učinaka na postoperativnu kogniciju kod starijih pacijenata koji su podvrgnuti laparoskopskoj abdominalnoj operaciji. Anesteziologija. 2021;134:381–94.

For more information:1950477648nn@gmail.com