baJezik
Dom / Znanje / Sadržaj

Znanje

Antioksidansi i sastojci bamije protiv umora

Mar 21, 2022

Fangbo Xia, Yu Zhong, Mengqiu Li, Qi Chang, Yonghong Liao, Xinmin Liu * i Ruile Pan *


Institut za razvoj ljekovitog bilja, Peking Union Medical College, Kineska medicinska akademijaSciences, No 151, North Road Malianwa, Haidian District, Peking 100193


Za više informacija:ali.ma@wecistanche.com



Abstract


Bamija (Abelmoschus esculentus (L.) Moench), zdravo povrće, široko je rasprostranjena u tropskim i suptropskim područjima. Prethodna istraživanja su dokazala da mahune bamije posjedujuaktivnost protiv umora,a cilj ovog istraživanja je razjasnitiprotiv umorasastojci. Da bismo to postigli, podijelili smo mahune bamije (OPD) na sjemenke (OSD) i kožice (OSK) i uporedili sadržaj ukupnih polisaharida, ukupnih polifenola, ukupnih flavonoida, izokvercitrina i kvercetin{0}}O-gentiobioze i antioksidansa aktivnost in vitro iaktivnost protiv umorain vivo između OSD i OSK. Sadržaj ukupnih polifenola i ukupnih polisaharida bio je 29,5 posto i 14,8 posto u OSD i 1,25 posto i 43,1 posto u OSK, respektivno. Ukupni flavonoidi, izokvercitrin i kvercetin{8}}O-gentiobioza (5,35 posto, 2,067 posto, odnosno 2,741 posto) otkriveni su samo u OSD. Antioksidativni testovi, uključujući uklanjanje 1-difenil-2-pikrilhidrazila (DPPH), antioksidativnu snagu redukcije željeza (FRAP) i test smanjenja snage, te test plivanja s opterećenjem, pokazali su da OSD posjeduje značajan antioksidans iefekti protiv umora. Štaviše, biohemijsko određivanje otkrilo je daaktivnost protiv umoraOSD je uzrokovan smanjenjem nivoa mliječne kiseline (BLA) i dušika uree (BUN), povećanjem skladištenja glikogena u jetri i promicanjem antioksidativne sposobnosti snižavanjem nivoa malondialdehida (MDA) i povećanjem superoksid dismutaze (SOD) i glutation peroksidaze (GSH-). Px) nivoi. Ovi rezultati su dokazali da je to seme bamijeprotiv umoradio mahuna bamije i polifenoli i flavonoidi bili su aktivni sastojci.


Ključne riječi: bamija; protiv umora; antioksidans; polifenoli



Cistanche

1. Uvod


Umor je složen fiziološki fenomen koji se definira kao teškoća u pokretanju ili održavanju voljnih aktivnosti [1]. Osim što se povećava sa godinama i javlja se kod pacijenata sa karcinomom, depresijom, HIV infekcijom, multiplom sklerozom i Parkinsonovom bolešću, umor postaje sve češći simptom kod normalnih ljudi s ubrzanim tempom modernog života [2–4]. Velika istraživanja zajednice su pokazala da se više od polovine odrasle populacije žali na umor [5,6]. Dugotrajno nagomilani ili kronični umor ne samo da umanjuje kvalitetu života, već dovodi i do sindroma kroničnog umora i drugih organskih bolesti, pa čak i do karoshija (nenormalne smrti od akutnih kardiovaskularnih bolesti uzrokovanih prekomjernim radom [7]). Postoji nekoliko teorija o uzrocima umora, kao što je teorija iscrpljenosti, koja kaže da je umor uzrokovan nedostatkom raspoloživog ATP-a za spajanje aktina i miozina, pumpanje Na`/K` i unos Ca2` u sarkoplazmatski retikulum [8–11]. ]; teorija poremećaja homeostaze, koja ukazuje da je umor uzrokovan nakupljanjem različitih metaboličkih nusprodukata [10,12]; i teorija katastrofe koja ukazuje da se zamor može razviti zbog kvara na jednom ili više mjesta duž puta proizvodnje sile [13]. Među njima, smatra se da oksidativni stres igra važnu ulogu u etiologiji umora [10,13–16]. Pokazalo se da antioksidansi iz nekih biljaka posjeduju značajne efekte protiv umora, što ukazuje da bi tretman antioksidansima mogao biti vrijedan terapijski pristup protiv umora [17–20]. Stoga potrošači traže više prirodnih antioksidativnih komponenti u svojoj ishrani kako bi smanjili oksidativna oštećenja i borili se protiv umora. Bamija (Abelmoschus esculentus (L.) Moench, porodica: Malvaceae), poznata i kao ženski prst, bhindi i gumbo, jednogodišnja je biljka porijeklom iz Afrike i uzgaja se u različitim zemljama širom svijeta, uglavnom u tropskim, suptropskim, i toplim umjerenim regijama.


Mahune bamije su se dugo koristile kao povrće i izvor dijetetskih lijekova. U tradicionalnoj azijskoj i afričkoj medicini mahune bamije se koriste kao sluzava hrana za borbu protiv gastritisa [21]. Farmakološke studije su otkrile da bamija ima antioksidativno, neuroprotektivno, antidijabetičko, antihiperlipidemijsko i djelovanje protiv umora [22–26]. Iako je djelovanje mahune bamije protiv umora ranije dokazano [26], malo se zna o njenim aktivnostima i sastojcima protiv umora. Prethodna literatura je objavila da mahune bamije sadrže visok sadržaj polisaharida, polifenola i flavonoida [27–34]. Također je pokazano da polifenoli i flavonoidi posjeduju jake antioksidativne i anti-zamorne efekte u prethodnim studijama [15,18,20,35,36]. Štaviše, naš preliminarni kvalitativni eksperiment, u kojem smo koristili otopinu hlorida željeza kao reagens za razvijanje boje, otkrio je da ekstrakt sjemena bamije pokazuje snažnu fenolnu reakciju; međutim, njen ekstrakt kože jedva da je pokazao takvu reakciju (dodatni materijali), što je pokazalo da sjemenke bamije sadrže veći sadržaj polifenola i flavonoida od kore bamije. Stoga bi se moglo nagađati da sjemenke bamije mogu biti dio mahuna bamije protiv umora, a da polifenoli i flavonoidi mogu biti aktivni sastojci. Cilj istraživanja bio je razjasniti sastojke mahune bamije protiv umora. Da bismo to postigli, podijelili smo svježe mahune bamije na sjemenke i ljuske i uporedili hemijski sadržaj ukupnih polisaharida, ukupnih polifenola, ukupnih flavonoida, izokvercitrina i kvercetin-3-O-gentiobioze, te antioksidativne aktivnosti in vitro i anti- aktivnosti zamora in vivo između sjemenki bamije i kožice. Svi ovi rezultati su otkrili da su sjemenke bamije dio mahuna bamije protiv umora, a polifenoli i flavonoidi aktivni sastojci. Također su proučavani potencijalni mehanizmi djelovanja protiv umora u bamiji.


2. Eksperimentalna sekcija


2.1. Biljni materijal i ekstrakcija


Svježe mahune bamije kupljene su na pijaci (Sanja, provincija Hainan, Kina) u julu 2013. Biljku je potvrdio profesor Bengang Zhang, Institut za ljekovito bilje Kineske akademije medicinskih nauka i Peking Union Medical College, Peking, Kina, gde su uzorci vaučera (br. 20130705) deponovani u herbarijum instituta. Pripremljene su dvije porcije od 2,5 kg svježih mahuna bamije. Jedna porcija je direktno liofilizirana kako bi se dobile osušene mahune bamije (251,3 g). Drugi dio je podijeljen na sjemenke bamije i ljuske bamije, liofilizirane kako bi se dobilo sušeno sjeme bamije (50,1 g) i sušene kore bamije (200,5 g). Mahune, sjemenke i kožice bamije su dobro samljeveni i odvojeno ekstrahirani sa 1500 mL kipuće vode svaki 1h (3 puta). Svaka filtrirana tečnost je kombinovana i koncentrisana pod vakuumom, da bi se dobili ostaci mahuna bamije (OPD, 105,4 g), semena bamije (OSD, 20,5 g) i kore bamije (OSK, 84,1 g), respektivno. Stoga je odnos ekstrakta OPD:OSK: OSD oko 5:4:1. Svi uzorci su čuvani na ´20 ˝C do naknadnih hemijskih analiza i eksperimenata na životinjama.


Acteoside of Cistanche

2.2. Hemikalije i reagensi


Izokvercitrin i kvercetin{0}}O-gentiobioza su izolovani iz mahuna bamije u našoj laboratoriji, čistoće preko 98 posto, analizom tečne hromatografije visokih performansi (HPLC). Standardi rutina, galske kiseline i D-glukoze kupljeni su od Nacionalnog instituta za kontrolu hrane i lijekova (Peking, Kina). Za određivanje fenola korišten je Folin–Ciocalteuov fenol reagens (1N, Coolaber Science & Technology, Peking, Kina). Od Beyotime Biotechnology (Peking, Kina) kupljen je komplet za smanjenje antioksidativne moći feriksa (FRAP). 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH) i Trolox su kupljeni od Sigma-Aldrich Inc. (St. Louis, MO, SAD). Fosfatni pufer (PBS, Gibco) je nabavljen od Thermo Fisher-a (Waltham, MA, SAD). Rastvarači, uključujući acetonitril (Thermo Fisher, MA, SAD) i mravlju kiselinu (CNW, Dusseldorf, Njemačka), bili su HPLC kvaliteta, a voda je dobijena iz Milli-Q sistema za prečišćavanje vode (Millipore, MA, SAD). Kompleti za određivanje laktata u krvi (BLA), dušika uree u serumu (BUN), hepatičnog glikogena (HG), glutation peroksidaze (GSH-Px), tiobarbiturne kiseline (TBA) i superoksid dismutaze (SOD) kupljeni su od Nanjing Jiancheng Biotechnology Institut (Nanjing, Kina). Svi ostali reagensi i hemikalije korišćene u ovoj studiji bili su analitičkog kvaliteta.


2.3. Životinje


Mužjaci ICR miševa (20-22 g) su kupljeni od Vital River Laboratories (Kvalifikovani broj: SCXK 2012-0001, Peking, Kina). Miševi su smješteni u grupe od po 6 životinja po kavezu pri konstantnoj temperaturi (23 ˝C ˘ 2 ˝C) i vlažnosti (50 posto ˘ 10 posto) u ciklusu od 12/12-h svjetlo/mrak (svjetlo uključeno od 8:{11}} do 20:00 popodne). Životinje su imale besplatan pristup standardnoj prehrani i steriliziranoj vodi za piće u SPF (Specific pathogen Free) kućici za životinje. Svi eksperimentalni postupci provedeni su pod nadzorom i odobrenjem Akademije Centra za eksperimentalne životinje Instituta za razvoj ljekovitog bilja i strogo u skladu sa NIH Vodičem za njegu i korištenje laboratorijskih životinja (osmo izdanje)[37].



2.4. Hemijska analiza OSD i OSK


2.4.1. Određivanje ukupnog sadržaja flavonoida (TF).


Sadržaj TF mjeren je kolorimetrijskim testom NaNO{{0}}Al(NO)3 prema Tehničkim standardima za ispitivanje i ocjenu funkcionalne hrane, koje je izdala Nacionalna komisija za zdravlje i planiranje porodice NR Kine u 2{{20}}03, sa manjim izmjenama. Ukratko, 50 mg uzorka je rastvoreno u 40 mL destilovane vode i rastvor uzorka je ekstrahovan sa 50 mL hloroforma tri puta. Zatim je vodeni rastvor razrijeđen do 50 mL i 2 mL razrijeđenog rastvora je adsorbirano sa 5 g poliamidne smole i eluirano sa 20 mL 70 postotnog etanola. Eluiranje 70 posto etanola je koncentrisano na 10 mL pod vakuumom. Tri mililitra koncentrovanog eluiranja stavljeno je u volumetrijsku tikvicu od 10 mL, a zatim je dodato 2 mL 70% etanola, 0,3 mL NaNO2 (5%) i 0,3 mL Al(NO)3. Nakon 5 minuta, 2 mL NaOH (1,0 M) rastvora je dodato u rastvor smeše i ostavljeno da odstoji 6 minuta. Na kraju je dodano 2,4 mL 30 posto etanola. Apsorbanca je izmjerena na slijepom uzorku na 510 nm sa UNICO-2012 UV-VIS spektrofotometrom (Shanghai, Kina). Ukupni sadržaj flavonoida je izračunat iz kalibracione krive koristeći rutin kao standard (20–100 mg/L). Rezultati su prikazani kao mg ekvivalenta rutina po mg uzoraka.


Echinacoside of Cistanche

2.4.2. Određivanje sadržaja ukupnog polifenola (TP).


Sadržaj TP je određen Folin-Ciocaiteu metodom uz neznatnu modifikaciju [38]. Ukratko, uzorak od 50 mg je pomiješan sa 25 mL 50 postotnog rastvora metanola, zatim 0,5 mL otopine uzorka, 0,3 mL Folin-Ciocaiteuovog reagensa i 10 mL natrijum karbonata (10 posto) su bili dovoljni. pomešana, a zatim je zapremina podešena na 25 mL destilovanom vodom. Smjesa je ostavljena da stoji na 50 ˝C u mraku 1 h. Apsorpcija je izmjerena na 765 nm. Pripremljena je kalibracijska kriva galske kiseline. Rezultati su izraženi kao mg ekvivalenata galske kiseline po mg uzoraka.


2.4.3. Određivanje izokvercitrina i kvercetin-3-O-gentiobioze


Kvantifikacija izokvercitrina i kvercetina{{0}}O-gentiobioze izvedena je pomoću HPLC-UV pomoću kalibracione krivulje u pet tačaka (r2=0.999) u rasponu od 5–5{{23 }}0 µg/mL. Izokvercitrin i kvercetin-3-O-gentiobioza (5 mg, respektivno) i uzorci (10 mg) rastvoreni su u 10 mL metanola, respektivno. Svi rastvori su filtrirani kroz 045-µm politetrafluoroetilenske fifiltre pre HPLC analize. Waters 600 HPLC pumpa sa Waters 2489 UV/Visible detektorom korišćena je da odvoji jedinjenja kroz kolonu obrnute faze (Thermo synchronize aQ, 4,6 mm ˆ 250 mm, 5 µm) pri brzini od 1 mL/min. Mobilna faza se sastojala od acetonitrila (A) i 0,1 posto sirćetne kiseline u vodi (B). Gradijentni program eluiranja bio je sljedeći: 10 posto A na 0 min i linearno do 40 posto za 40 min, 90 posto na 41 do 50 min i 10 posto na 51–65 min. Talasna dužina za UV detekciju bila je 354 nm, a temperatura kolone je postavljena na 25 ˝C. Jedinjenja su identifikovana poređenjem sa vremenom zadržavanja standarda i kvantifikovana izračunavanjem površine ispod krive sa eksternim standardima.


2.4.4. Određivanje sadržaja ukupnog polisaharida (TPS).


Sadržaj TPS je određen metodom fenol-sumporna kiselina [39,40]. Ukratko, uzorak od 80 mg je rastvoren u 50 mL destilovane vode, a zatim je protein uklonjen divljačkom metodom (rastvor uzorka:hloroform:N-butil alkohol=20:4:1). Zatim je u nastalu viskoznu otopinu dodana četverostruka količina etanola da se istaloži sirovi polisaharidni ekstrakt. Rastvor etanola je centrifugiran na 617,4 ˆ g 30 minuta da bi se dobio talog. Talog je uzastopno ispran etanolom, acetonom i etrom i rastvoren u 250 mL destilovane vode. Zatim je 0,1 mL rastvora polisaharida pomešano sa 0,9 mL destilovane vode, 1 mL 5% rastvora fenola i 5 mL sumporne kiseline u epruveti i držano na sobnoj temperaturi 30 minuta. Apsorbanca je izmjerena na 490 nm sa UNICO-2012 UV-VIS spektrofotometrom (Shanghai, Kina). Utvrđena je kalibraciona kriva glukoze, a sadržaj TPS je određen iz regresione jednačine kalibracione krive. Rezultati su izraženi kao mg ekvivalenata glukoze po mg uzoraka.


2.5. In vitro antioksidativni testovi


Antioksidativni kapacitet OPD, OSK i OSD detektovan je pomoću tri metode, uključujući {{0}}difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH) čišćenje, antioksidativnu moć redukcije feri (FRAP) i redukcionu moć, prema literaturi [19,41] uz neznatne izmjene. Trolox je korišten kao pozitivna kontrola, a rezultati su izraženi kao Trolox ekvivalentni antioksidativni kapacitet. Kako se OPD sastojao od OSK i OSD, za osvjetljavanje aktivnih sastojaka mahuna bamije, koncentracija OSK i OSD korištena je kao OPD ekvivalent. Prema preliminarnim testovima, rasponi koncentracija OPD, ODS, OSK su bili 0.0{{10}}4–0.8, {{17 }}.0{{20}32–0.64 i 0.0008 –{{40}}.16 mg/mL za DPPH test; 1.0–4.0, 0.8–3.2 i {{50}}.2–0.8 mg/mL za FRAP test; i 0,1–4, 0,08–3,2 i 0,02–0,8 mg/mL za test smanjenja snage, respektivno. mL i 0,0008–0,16 mg OSD/mL) pomiješan je sa DPPH otopinom (100 µL, 1,28 ˆ 10´4 mol/L) za mjerenje aktivnosti uklanjanja slobodnih radikala (A1) i 95 posto etanola (100 µL) za kontrolu (A2). Destilirana voda (50 µL) pomiješana je sa DPPH rastvorom (100 µL) za slijepu probu (A0). Apsorbancija je izmjerena na 517 nm nakon što su otopine pomiješane i držane na sobnoj temperaturi 30 min. Kapacitet uklanjanja DPPH radikala izračunat je pomoću sljedeće jednadžbe:


Flavonoids of Cistanche

Aktivnost čišćenja ( posto ){{0}}[ 1-(A1-A2/{A0]* 100 posto . (1)


FRAP tri otopine uzorka (1.0–4.0 mg OPD/mL, 0.8–3.2 mg OSK/mL i 0.2– {{10}}.8 mg OSD/mL) otkriveni su prema uputstvu Beyotime Instituta za biotehnologiju. Razblaženi rastvor uzorka (5 µL) je pomešan sa FRAP radnim rastvorom (180 µL) i držan 5 minuta na 37 ˝C. Apsorbancija reakcione smeše je tada zabeležena na 593 nm. Standardna kriva je pripremljena korištenjem FeSO4, u rasponu od 0.15 do 1.5 mm. U određivanju snage redukcije, otopina uzorka (0.5 mL za 0.1–4 mg OPD/mL, 0.08–3.2 mg OSK/mL i 0.02–{{50}}.8 mg OSD/mL) je pomiješan sa istom zapreminom PBS-a (0.2 mol/L , pH 6,6) i rastvor kalijum fericijanida (1 posto, w/v), a inkubacija je provedena 20 min na 50 ˝C. U smjesu je dodana trihlorosirćetna kiselina (0,5 mL, 10 posto, w/v), koja je centrifugirana na 201,6 ˆ g 10 min. Nakon toga, gornji sloj rastvora (0,5 mL) je razblažen destilovanom vodom (0,5 mL), a zatim mu je dodat gvožđe hlorid (0,1 mL, 0,1 %, w/v). Apsorbancija je izmjerena na 700 nm.



2.6. Efekti protiv umora OPD, OSK i OSD i biohemijske analize


Na osnovu istog razloga kao i in vitro antioksidativni testovi, doze protiv umora OPD, OSK i OSD su dizajnirane kao OPD grupe (0.75, 1.50 i 3.{{ 6}} g/kg tjelesne težine), OSK grupe (0.60, 1.20 i 2.40 g/kg tjelesne težine) i OSD grupe (0.15, 0.30 i 0.60 g/kg tjelesne težine). Miševi su hranjeni osnovnom prehranom u eksperimentalnom okruženju prije eksperimenata. Nakon 3 dana adaptacije, 120 miševa je nasumično podijeljeno u deset grupa: kontrolna grupa (CG), po 3 OPD, OSK i OSD grupe. Svaka grupa je imala 12 miševa. Kontrolna grupa (CG) tretirana je sterilnom vodom, dok su ostale grupe tretirane odgovarajućim ekstraktom. Voda/ekstrakti su davani oralno (8:00 ujutro) miševima jednom dnevno tokom 21 dana, a test na otvorenom terenu i test plivanja sa opterećenjem (WLST) su sprovedeni 20. odnosno 21. dana. Nakon WLST-a, miševi su uklonjeni iz bazena, osušeni papirnim ubrusima i vraćeni u originalne kaveze. Eksperimentatori WLST i testa otvorenog polja bili su zaslijepljeni za eksperimentalne uslove i životinje su randomizirane prije učešća u eksperimentima. Da bi se razjasnio efekat OSD-a protiv umora tokom oporavka, miševi su anestezirani etrom i uzorci krvi su sakupljeni iz svake grupe nakon WLST 24 h. Uzorci seruma su dobijeni centrifugiranjem (896 ˆ g, 15 min, 4 ˝C). Jetra su brzo secirana i isprana ledeno hladnom fiziološkom otopinom. Svi uzorci su zamrznuti u tečnom dušiku i držani na ´80 ˝C za dalju analizu.


2.6.1. Test otvorenog polja


Da bi se potvrdili efekti OPD, OSK i OSD na lokomotorne aktivnosti, miševi su automatski evaluirani korištenjem kompjuterski podržanog sistema kontrole otvorenog polja koji smo razvili [42,43]. Aparat se sastoji od četiri metalna rezervoara (30 cm u prečniku, 40 cm u visini) sa video kamerom pričvršćenom na vrhu. Eksperimenti su rađeni u tihoj prostoriji, a aparat je bio osvijetljen izvorom svjetlosti od 120 luxa na stropu. Jedan sat nakon doziranja, svaki miš je stavljen u centar metalnog spremnika i ostavljen da slobodno istražuje 2 minute, a udaljenost prijeđena za 4 minute, što je indeks lokomotorne aktivnosti, izračunata je pomoću softvera. Četiri miša su testirana istovremeno.


Cistanche can relieve chronic fatigue syndrome symptoms

2.6.2. Test plivanja s opterećenjem (WLST)


WLST je izveden kako bi se inducirao zamor prema prethodno opisanoj metodologiji uz malu modifikaciju [19,44,45]. Jedan sat nakon doziranja, miševi su napunjeni olovnim listovima koji su bili pričvršćeni na isti položaj njihovih repova i težili su otprilike 3 posto njihove tjelesne težine. Zatim su miševi opterećeni težinom pojedinačno tjerani da plivaju u cilindričnim recipijentima (prečnika 40 cm), koji su napunjeni vodom (25 ˘ 1 ˝C) do dubine od 30 cm. Iscrpljenost je klasifikovana kao gubitak koordinisanih pokreta i neuspjeh izlaska na površinu u roku od 10 s, a vrijeme plivanja je odmah zabilježeno. Voda u bazenu je zamijenjena nakon svake sesije.



2.6.3. Analiza biohemijskih parametara u vezi sa umorom


Serum je pripremljen za određivanje azota uree u krvi (BUN) i mliječne kiseline u krvi (BLA). Jetra su pripremljena za određivanje ekvivalenata malondialdehida (MDA), ukupne superoksid dismutaze (SOD), glutation peroksidaze (GSH-Px) i jetrenog glikogena (HG). Svi biohemijski parametri su određeni korišćenjem komercijalno dostupnih kompleta, a sve procedure su bile u skladu sa uputstvima proizvođača. Ukratko, sadržaj HG je određen antron reagensom na 620 nm, dok je BLA određen nitrotetrazolijum plavim hloridom reagensa na 530 nm. BUN je procijenjen ureazom metodom enzima vezanog za glutamat dehidrogenazu na 640 nm. Aktivnost GSH-PX mjerena je u spregnutom sistemu mjerenjem smanjenja trifosfopiridin nukleotida (NADPH) na 340 nm. Ispitivanje aktivnosti SOD zasniva se na njegovoj sposobnosti da inhibira oksidaciju O2 proizvedenom iz sistema ksantin-ksantin oksidaze. Jedna jedinica aktivnosti SOD definirana je kao količina koja smanjuje apsorpciju na 450 nm za 50 posto. Sadržaj MDA ekvivalenata je određen na 532 nm reakcijom sa TBA da bi se formirao stabilan hromoforni proizvod.


2.7. Statistička analiza


Hemijska određivanja su obavljena u tri primjerka i rezultati su izraženi kao srednje vrijednosti. Antioksidativni testovi su izvedeni u tri primjerka, a rezultati su izraženi kao srednje vrijednosti ˘ standardne devijacije. Ponašanje i biohemijski podaci analizirani su SPSS statističkim softverom (SPSS 19.0 Inc., Chicago, IL, USA). Jednosmjerna analiza varijanse (One-way ANOVA) sa testom najmanje značajne razlike (LSD) korištena je za međugrupno poređenje. P vrijednosti manje od 0.05 smatraju se statistički značajnim. Rezultati su izraženi kao srednja vrijednost ˘ standardne greške srednje vrijednosti (SEM).


3. Rezultati


3.1. Hemijska analiza OSK i OSD


Kao što je prikazano u Tabeli 1, sadržaji TF i TP u OSD-u bili su mnogo veći od onih u OSK-u, dok je sadržaj TPS-a u OSD-u bio mnogo manji od onog u OSK-u. Jedinjenja izokvercitrina i kvercetin-3-O-gentiobioze otkrivena su samo u OSD pomoću HPLC (prikazano na slici 1).


image

image

3.2. In vitro antioksidativna aktivnost OPD, OSK i OSD


Kao što je prikazano u Tabeli 2, antioksidativna aktivnost OPD i OSD dokazana je DPPH, FRAP i testovima redukcijske snage, a OSD je pokazao mnogo bolju antioksidativnu aktivnost od OPD. Međutim, OSK je pokazao slab učinak u testu smanjenja snage i bez efekta u DPPH i FRAP testovima. Stoga je OSD bio aktivni dio mahuna bamije za antioksidativno djelovanje



image


3.3. Efekti na lokomotornu aktivnost OPD, OSK i OSD


Lokomotorne aktivnosti miševa su testirane 20 dana nakon tretmana OSD-om. Kao što je prikazano na slici 2, visoka doza OSD grupa (0.6 g/kg) značajno je smanjila ukupnu udaljenost miševa u novom okruženju u poređenju sa kontrolnom grupom (p=0. 04). Međutim, za druge grupe nisu uočeni značajni efekti na ukupnu udaljenost. Ovi rezultati su pokazali da mahune i sjemenke bamije nemaju ekscitatorni učinak na centralni nervni sistem. Štaviše, moglo bi se zaključiti da OSD može imati blagi sedativni efekat pri visokoj dozi (0,6 g/kg).



image


3.4. Učinci na iscrpno vrijeme plivanja OPD, OSK i OSD (WLST)


Kao što je prikazano na slici 3, nakon suplementacije OPD, OSK i OSD tokom 21 dana, OPD (3 g/kg) i OSD (0.3 i 0.6 g/kg) tretman bi mogao značajno produžavaju vrijeme plivanja miševa, koje se protezalo do 57,84 ˘ 12,37, 46,51 ˘ 5,82 i 70.05 ˘ 12.07 min (p < 0="" .05,="" p="">< 0.05="" i="" p="">< 0.{{70}}1),="" respektivno,="" mnogo="" duže="" od="" toga="" u="" kontrolnoj="" grupi="" (15,20="" ˘="" 1,49="" min).="" u="" međuvremenu,="" opd="" (0,75="" i="" 1,5="" g/kg),="" osd="" (0,15="" g/kg)="" i="" osk="" (0,6,="" 1,2="" i="" 2,4="" g/kg)="" tretman="" nije="" pokazao="" značajno="" povećanje="" vremena="" plivanja="" kod="" miševa="" (="" 14.73="" ˘="" 1.28,="" 23.96="" ˘="" 3.70="" i="" 27.34="" ˘="" 5.72="" min,="" respektivno)="" u="" poređenju="" sa="" kontrolnom="" grupom="" (p="0.897," p="0.398" i="" p="0.268," respektivno)="" ),="" ali="" osd="" (0,15="" g/kg)="" je="" pokazao="" trend="" povećanja="" vremena="" plivanja,="" ali="" nije="" otkrio="" značajnu="" razliku="" (p="0.225)." štaviše,="" jednosmjerne="" anova="" su="" pokazale="" značajne="" razlike="" u="" iscrpnom="" vremenu="" plivanja="" miševa="" između="" grupa="" (f="" (3,="" 40)="12.839," p="">< 0,001).="" vrijeme="" plivanja="" visoke="" doze="" grupe="" osd="" (0,6="" g/kg)="" pokazalo="" je="" značajnu="" razliku="" u="" poređenju="" sa="" grupom="" sa="" srednjom="" dozom="" (0,3="" g/kg)="" (p="0.019)," a="" uočen="" je="" isti="" rezultat="" između="" 0.3-g/kg="" i="" 0.15-g/kg="" grupa="" (p="0.034)," demonstrirajući="" osd="" može="" produžiti="" iscrpno="" vrijeme="" plivanja="" na="" način="" koji="" ovisi="" o="">

image

3.5. Utjecaj OSD-a na biokemijske parametre kod miševa nakon testa plivanja s opterećenjem


Kao što je pokazao rezultat testa plivanja sa opterećenjem, OSD bi mogao značajno produžiti iscrpljujuće vrijeme miševa za plivanje; međutim, OSK tretman nije pokazao značajno povećanje vremena plivanja kod miševa. Stoga su biohemijski parametri određeni samo na miševima koji su tretirani OSD.


3.5.1. Utjecaj OSD-a na BLA, BUN i HG


Razlika u sadržaju BLA, BUN i HG među grupama je bila značajna (BLA: F (3, 40)=8.257, p < {{10}}.{{="" 20}01;="" bun:="" f="" (3,="" 40)="8.596," p="">< 0.{{3{{32="" }}}}01;="" hg:="" f="" (3,="" 36)="6.960," p="">< 0.{{40}}="" 01).="" kao="" što="" je="" prikazano="" u="" tabeli="" 3,="" nivoi="" bla="" i="" bun="" u="" osd="" grupama="" su="" bili="" značajno="" niži="" od="" onih="" u="" kontrolnoj="" grupi="" 24="" h="" nakon="" testa="" plivanja="" pod="" opterećenjem="" (bla:="" p="">< 0.05,="" p="">< 0.05="" i="" p="">< 0.01="" za="" 0.15,="" 0.3="" i="" 0.6="" g/kg,="" respektivno;="" bun:="" p="">< 0.01="" za="" 0.15,="" 0.3="" i="" 0.6="" g/kg).="" nivoi="" hg="" u="" osd="" grupama="" bili="" su="" značajno="" viši="" u="" odnosu="" na="" kontrolnu="" grupu="" (p="">< 0,05,="" p="">< 0,01="" i="" p="">< 0,01="" za="" 0,15,="" 0,3="" i="" 0,6="" g/kg,="">


image


3.5.2. Utjecaj OSD-a na GSH-PX, MDA i SOD


Razlike aktivnosti SOD, GSH-PX i MDA ekvivalenta među grupama bile su značajne (MDA: F (3, 40)=8.355, p < 0.{{18}="" 01;="" sod:="" f="" (3,="" 42)="9.876," p="">< 0.001;="" gsh-px:="" f="" (="" 3,="" 40)="7.959," p="">< 0.001).="" kao="" što="" je="" prikazano="" u="" tabeli="" 4,="" mda="" ekvivalent="" u="" osd="" grupama="" bio="" je="" značajno="" niži="" od="" onog="" u="" kontrolnoj="" grupi="" nakon="" testa="" plivanja="" pod="" opterećenjem="" (p="">< 0.01,="" p="">< 0.{101}="" {45}}1="" i="" p="">< 0.01="" za="" 0.15,="" 0,3="" i="" 0,6="" g/kg,="" respektivno).="" nadalje,="" nivoi="" sod="" i="" gsh-px="" u="" osd="" grupama="" bili="" su="" značajno="" viši="" u="" odnosu="" na="" kontrolnu="" grupu="" (sod:="" p="">< 0,01,="" p="">< 0,01="" i="" p="">< 0,01;="" gsh-px:="" p="">< 0,05,="" p="">< 0,01="" i="" p="">< 0,01="" za="" 0,15,="" 0,3="" i="" 0,6="" g/kg,="">


image



4. Diskusija


Nezrela mahuna bamije je zdravo povrće koje se konzumira u većini područja svijeta. Prethodne studije su izvijestile da su nezrele mahune bamije imale antioksidativno djelovanje i djelovanje protiv umora [25,46], ali njeni aktivni sastojci i potencijalni mehanizmi nisu bili jasni. Kako bismo istražili antioksidativno djelovanje i djelovanje mahuna bamije protiv umora, podijelili smo svježe mahune bamije na sjemenke i kore i dobili OSD, OSK i OPD procesom ekstrakcije, zatim antioksidativno djelovanje in vitro OSD, OSK i OPD je detektovan sa DPPH, FRAP i redukcionom snagom, a efekat protiv umora in vivo OSD, OSK i OPD je proučavan korišćenjem testa plivanja sa opterećenjem. Naši rezultati su pokazali da OSD ne samo da je imao dobru antioksidativnu aktivnost in vitro, već je značajno produžio vrijeme plivanja miševa u odnosu na kontrolnu grupu, dok OSK nije pokazao nikakav učinak u oba. Iscrpno vrijeme plivanja je direktno mjerenje koje objektivno odražava izdržljivost tijela pri vježbanju [47], a promocija izdržljivosti vježbanja je u korelaciji s dužim vremenom plivanja. Stoga, antioksidativni i anti-zamorni dio OPD-a treba zaključiti kao njegove sjemenke. Štaviše, u ovoj studiji, OSD (0.3{{10}}, 0,60 g/kg) može značajno produžiti vrijeme plivanja miševa, a ekvivalentne doze sjemenki bamije za ljude mogu biti 0,9 ~1,8 g/kg (4,5~8,9 g/kg za mahune bamije) prema površini tijela [48]. Ove doze se mogu postići ljudskom porcijom povrća. Međutim, aktivni sastojci bamije su još uvijek nejasni. Rezultati hemijske analize u ovoj studiji pokazali su da je sadržaj polifenola u OSD oko 24 puta veći od onog u OSK, ali je sadržaj polisaharida u OSD znatno niži od onog u OSK (Tabela 1).


Moreover, total flavonoids content and two compounds of isoquercitrin and quercetin-3-O-gentiobiose were only detected in OSD and were not detected in OSK (Table 1). It has been proven that okra seeds contained epigallocatechin oligomers, catechin, and its oligomers, isoquercitrin, quercetin-3-O-gentiobiose, and other catechin and quercetin derivatives [27–29]. Furthermore, previous studies have reported that polyphenols like catechin and flavonoids like quercetin possess anti-fatigue activity due to their antioxidant activity [35,36,49–51]. Therefore, we deduced that polyphenols and flavonoids of OSD might be the antioxidant and anti-fatigue constituents. As for the reason that the effect of OPD was less than the effect of OSD, it might be that the high content of mucilaginous polysaccharides can affect the assimilation of polyphenols and flavonoids in OPD, which needs to be researched in the future. When it comes to the anti-fatigue mechanism of OSD, an open-field test showed that OSD had no central nerve stimulation in mice, which proved that the anti-fatigue of OSD was not through central excitation. Apart from this, it was likely that OSD possessed a slight sedative effect in high doses (>0.6 g/kg). Potrebno je više podataka da bi se ovo dokazalo jer bi malo smanjenje lokomocije također moglo biti rezultat smanjene motivacije za istraživanjem ili mogućeg anksiogenog efekta. Međutim, u ovom istraživanju korišćen je test otvorenog polja kako bi se isključila mogućnost da je OSD izvršio aktivnost protiv umora ekscitatornim efektom na centralni nervni sistem, a nije bilo više podataka koji bi pokazali sedativni efekat OSD-a. Nadalje, dokazano je da su prekomjerne reaktivne oksidne vrste (ROS) proizvedene tokom napornog vježbanja glavna komponenta fizičkog umora. Prekomjerni ROS može utjecati na različite metaboličke i enzimske procese napadajući polinezasićene masne kiseline kako bi proizvele MDA i dovele do disfunkcije biofilma [13,52].


Zbog toga, ROS ne utječe samo na enzimsku aktivnost tokom procesa opskrbe energijom i procesa spajanja ekscitacije-kontrakcije, već i ubrzava akumulaciju otpada uključujući BLA i BUN. Štaviše, povećani nivo BLA je važan uzrok umora zbog sniženja pH u tkivima, a veći sadržaj BUN ukazuje na nižu izdržljivost pri vježbanju. Stoga, ne samo da može poboljšati izdržljivost pri vježbanju, već i ublažiti fizički umor i promovirati oporavak promicanjem aktivnosti enzimskih antioksidativnih sistema uključujući SOD i GSH-PX, ili direktno nadopunjujući antioksidanse. U ovoj studiji, određivanje biohemijskih parametara koje je sprovedeno 24 h nakon testa plivanja pokazuje da je tretman OSD značajno smanjio nivoe BLA i BUN u krvi, MDA u jetri i povećao nivoe HG, SOD i GSH u jetre tokom oporavka od umora, što je dokazalo da OSD može ublažiti fizički umor i podstaći oporavak. Uzimajući u obzir rezultate antioksidativnih testova in vitro u našem istraživanju, moglo bi se zaključiti da OSD ima učinak protiv umora ne samo direktnim uklanjanjem slobodnih radikala, već i promoviranjem aktivnosti antioksidativnih enzima uključujući SOD i GSH-PX.


23

Kliknite na sliku za Cistanche Uk za smanjenje umora

5. Zaključci


U zaključku, ova studija je pokazala da je OSD dio bamije protiv umora, a polifenoli i flavonoidi su vjerovatno aktivni sastojci OSD-a zbog njihovog antioksidativnog djelovanja. Međutim, umor je složena pojava, a ova studija o mehanizmima protiv umora bamije je vrlo preliminarna. Više detalja tek treba da bude rasvetljeno u budućnosti.



Reference


1. Chaudhuri, A.; Behan, PO Umor kod neuroloških poremećaja. Lancet 2004, 363, 978–988. [CrossRef]

2. Belluardo, N.; Westerblad, H.; Mudó, G.; Casabona, A.; Bruton, J.; Caniglia, G.; Pastoris, O.; Grassi, F.; Ibáñez, CF Demontaža neuromuskularnog spoja i zamor mišića kod miševa kojima nedostaje neurotrofin-4. Mol. Cell. Neurosci. 2001, 18, 56–67. [CrossRef] [PubMed]

3. Tharakan, B.; Dhanasekaran, M.; Brown-Borg, HM; Manyam, BV Trichopus zeylanicus se bori protiv umora bez amfetamin-mimetičke aktivnosti. Phytother. Res. PTR 2006, 20, 165–168. [CrossRef] [PubMed]

4. Huang, L.-Z.; Huang, B.-K.; Ye, Q.; Qin, L.-P. Frakcioniranje vođeno bioaktivnošću za svojstva acanthopanax senticosus protiv umora. J. Ethnopharmacol. 2011, 133, 213–219. [CrossRef] [PubMed]

5. Pawlikowska, T.; Chalder, T.; Hirsch, SR; Wallace, P.; Wright, DJ; Wessely, SC Studija umora i psihičkog stresa zasnovana na populaciji. BMJ 1994, 308, 763–766. [CrossRef] [PubMed]

6. Li, G. Situacija umora 2823 zdravih ljudi na pregled i njena korelacija sa fizičkim pokazateljima; Univerzitet kineske medicine u Pekingu: Peking, Kina, 2013.

7. Uehata, T. Karoshi, smrt od prekomjernog rada. Nippon Rinsho Jpn. J. Clin. Med. 2005, 63, 1249–1253.

8. Layzer, RB Metabolizam mišića tokom umora i rada. Bailliere's Clin. Endocrinol. Metab. 1990, 4, 441–459. [CrossRef]

9. Hultman, E.; Bergstrom, M.; Spriet, LL; Söderlund, K. Energetski metabolizam i umor; Human Kinetics: Champaign, IL, SAD, 1990.

10. Glaister, M. Višestruki sprinterski rad: fiziološki odgovori, mehanizmi zamora i utjecaj aerobne kondicije. Sports Med. 2005, 35, 757–777. [CrossRef] [PubMed]

11. Nozaki, S.; Mizuma, H.; Tanaka, M.; Jin, G.; Tahara, T.; Mizuno, K.; Yamato, M.; Okuyama, K.; Eguchi, A.; Akimoto, K.; et al. Tiamin tetrahidrofuran disulfid poboljšava energetski metabolizam i fizičke performanse tokom opterećenja od fizičkog umora kod pacova. Nutr. Res. 2009, 29, 867–872. [CrossRef] [PubMed]

12. McCully, KK; Authier, B.; Olive, J.; Clark, BJ, 3. Umor mišića: Uloga metabolizma. Može. J. Appl. Physiol. 2002, 27, 70–82. [CrossRef] [PubMed]

13. Carter, GT Fatigue. U Encyclopedia of the Neurological Sciences, 2. ed.; Aminoff, MJ, Daroff, RB, ur.; Academic Press: Oxford, UK, 2014; str. 276–280.

14. Filler, K.; Lyon, D.; Bennett, J.; McCain, N.; Elswick, R.; Lukkahatai, N.; Saligan, LN Udruženje mitohondrijalne disfunkcije i umora: Pregled literature. BBA Clin. 2014, 1, 12–23. [CrossRef] [PubMed]

15. Lin, Y.; Liu, H.-L.; Fang, J.; Yu, C.-H.; Xiong, Y.-K.; Yuan, K. Protiv umora i vazoprotektivni efekti kvercetin-3-O-gentiobioze na oksidativni stres i vaskularnu endotelnu disfunkciju izazvanu plivanjem izdržljivosti kod pacova. Food Chem. Toxicol. 2014, 68, 290–296. [CrossRef] [PubMed]

16. Edwards, RH Funkcija ljudskih mišića i umor. Ciba Found. Symp. 1981, 82, 1–18. [PubMed]

17. Gupta, A.; Vij, G.; Sharma, S.; Tirkey, N.; Rishi, P.; Chopra, K. Kurkumin, polifenolni antioksidans, ublažava sindrom kroničnog umora u modelu stresa uranjanja u vodu kod miševa. Immunobiology 2009, 214, 33–39. [CrossRef] [PubMed]

18. Wu, CY; Chen, R.; Wang, XS; Shen, B.; Yue, W.; Wu, Q. Antioksidativna i anti-zamorna aktivnost fenolnog ekstrakta iz sjemena Euryale Ferox salisb. I identifikacija tri fenolna jedinjenja pomoću lc-esi-ms/ms. Molecules 2013, 18, 11003–11021. [CrossRef] [PubMed]

19. Jiang, D.-Q.; Guo, Y.; Xu, D.-H.; Huang, Y.-S.; Yuan, K.; Lv, Z.-Q. Antioksidativni i anti-umorni efekti antocijana prečišćavanja soka od duda (MJP) i prečišćavanja drobina duda (MMP) iz različitih sorti ploda duda u Kini. Food Chem. Toxicol. 2013, 59, 1–7. [CrossRef] [PubMed]

20. Swamy, MSL; Naveen, S.; Singsit, D.; Naika, M.; Khanum, F. Efekti polifenola ekstrahiranih iz kore nara protiv umora. Int. J. Integr. Biol. 2011, 11, 69–72.

21. Messing, J.; Thole, C.; Niehues, M.; Shevtsova, A.; Glocker, E.; Boren, T.; Hensel, A. Antiadhezivna svojstva ekstrakta nezrelog voća Abelmoschus esculentus (Bamija) protiv adhezije Helicobacter pylori. PLOS ONE 2014, 9, e84836. [CrossRef] [PubMed]

22. Tongjaroenbuangam, W.; Ruksee, N.; Chantiratikul, P.; Pakdeenrong, N.; Kongbuntad, W.; Govitrapong, P. Neuroprotektivni efekti kvercetina, rutina i bamije (Abelmoschus esculentus Linn.) kod miševa tretiranih deksametazonom. Neurochem. Int. 2011, 59, 677–685. [CrossRef] [PubMed]

23. Fan, S.; Zhang, Y.; Sun, Q.; Yu, L.; Li, M.; Zheng, B.; Wu, X.; Yang, B.; Li, Y.; Huang, C. Ekstrakt bamije snižava glukozu u krvi i lipide u serumu kod gojaznih miševa C57Bl/6 sa visokim sadržajem masti. J. Nutr. Biochem. 2014, 25, 702–709. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, H.; Chen, G.; Ren, D.; Yang, ST Hipolipidemijska aktivnost bamije je posredovana inhibicijom lipogeneze i regulacijom degradacije holesterola. Phytother. Res. PTR 2014, 28, 268–273. [CrossRef] [PubMed]

25. Hu, L.; Yu, W.; Li, Y.; Prasad, N.; Tang, Z. Antioksidativna aktivnost ekstrakta i njegovih glavnih sastojaka iz sjemena bamije na hepatocitima štakora oštećenim tetrakloridom. BioMed Res. Int. 2014, 2014, 341291. [CrossRef] [PubMed]

26. Yang, Y.; Jin, Z.; Mao, P.; Jin, J.; Huang, J.; Yang, M. Studija o efektu ekstrakta bamije protiv umora. Brada. J. Mod. Appl. Pharm. 2012, 29, 4. [CrossRef]

27. Arapitsas, P. Identifikacija i kvantifikacija polifenolnih jedinjenja iz sjemena i kožice bamije. Food Chem. 2008, 110, 1041–1045. [CrossRef] [PubMed].

28. Sengkhamparn, N.; Sagis, LMC; de Vries, R.; Schols, HA; Sajjaanantakul, T.; Voragen, AGJ Fizičko-hemijska svojstva pektina iz bamije (Abelmoschus esculentus (L.) Moench). Food Hydrocoll. 2010, 24, 35–41. [CrossRef]

29. Karakoltsidis, PA; Constantinides, SM sjemenke bamije: novi izvor proteina. J. Agric. Food Chem. 1975, 23, 1204–1207. [CrossRef] [PubMed]

30. Zhou, Y.; Jia, X.; Shi, J.; Xu, Y.; Jing, L.; Jia, L. Dva nova pentaciklična triterpena iz Abelmoschus esculentus. Helv. Chim. Acta 2013, 96, 533–537. [CrossRef]

31. Jia, L.; Zhong, LJ; Li, HF; Jing, LL Hemijski sastojci u vodenoj frakciji Abelmoschus esculentus. Brada. Tradit. Biljka. Drugs 2011, 42, 2186–2188.

32. Jia, L.; Guo, M.; Li, D.; Jing, L. Hemijski sastojci iz udjela petrolej etera Abelmoschus esculentus II. Zhongguo Zhong Yao Zazhi 2011, 36, 891–895. [CrossRef] [PubMed]

33. Jia, L.; Li, HF; Jing, LL Hemijski sastojci u N-butanol ekstraktu Abelmoschus esculentus L. Chin. Tradit. Biljka. Drugs 2010, 41, 1771–1773.

34. Jia, L.; Li, D.; Jing, LL; Guo, MM Studije o hemijskim sastojcima iz petrolej etarskog dijela Abelmoschus esculentus. J. Chin. Med. Mater. 2010, 33, 1262–1265.

35. Kobori, M.; Takahashi, Y.; Akimoto, Y.; Sakurai, M.; Matsunaga, I.; Nishimura, H.; Ippoushi, K.; Oike, H.; Ohnishi-Kameyama, M. Hronični visoki unos kvercetina smanjuje oksidativni stres i inducira ekspresiju antioksidativnih enzima u jetri i visceralnom masnom tkivu kod miševa. J. Funct. Foods 2015, 15, 551–560. [CrossRef]

36. Nogueira, L.; Ramirez-Sanchez, I.; Perkins, GA; Murphy, A.; Taub, PR; Ceballos, G.; Villarreal, FJ; Hogan, MC; Malek, MH (-)-epikatehin povećava otpornost na umor i oksidativni kapacitet mišića miša. J. Physiol. 2011, 589, 4615–4631. [CrossRef] [PubMed] .

37. Komisija za ažuriranje Vodiča za njegu i korištenje laboratorijskih životinja. Vodič za njegu i korištenje laboratorijskih životinja, 8. izdanje; The National Academies Press: Washington, DC, SAD, 2011.

38. Liao, H.; Dong, W.; Shi, X.; Liu, H.; Yuan, K. Analiza i poređenje aktivnih komponenti i antioksidativnih aktivnosti ekstrakata iz Abelmoschus esculentus L. Pharmacogn. Mag. 2012, 8, 156–161. [PubMed]

39. Zhu, Z.; Li, N. Studija o metodi određivanja sadržaja polisaharida bamije. Jiangsu Agric. Sci. 2012, 40, 2. [CrossRef]

40. DuBois, M.; Gilles, KA; Hamilton, JK; Rebers, PA; Smith, F. Kolorimetrijska metoda za određivanje šećera i srodnih supstanci. Anal. Chem. 1956, 28, 350–356. [CrossRef]

41. Luo, J.; Li, L.; Kong, L. Preparativno odvajanje fenilpropanoidnih glicerida iz lukovica Lilium lancifolium brzom protivstrujnom hromatografijom i evaluacija njihovih antioksidativnih aktivnosti. Food Chem. 2012, 131, 1056–1062. [CrossRef]

42. Dang, H.; Chen, Y.; Liu, X.; Wang, Q.; Wang, L.; Jia, W.; Wang, Y. Bed nucleus of the stria terminalis: Anatomija, fiziologija, funkcije bed nucleus. Prog. Neuro-Psychopharmacol. Biol. Psihijatrija 2009, 33, 1417–1424. [CrossRef] [PubMed]

43. Wang, Q.; Mai, WL; Li, YH; Chen, SG; Wang, LW; Feng, ZQ; Zhu, YF; Liu, XM Uspostavljanje kompjuterski baziranog sistema za obradu slike za lokomotornu aktivnost životinja i sedativnu verifikaciju kaixin prahom. Brada. Tradit. Biljka. Drugs 2009, 40, 1773–1779.

44. Qi, B.; Liu, L.; Zhang, H.; Zhou, G.-X.; Wang, S.; Duan, X.-Z.; Bai, X.-Y.; Wang, S.-M.; Zhao, D.-Q. Efekat protiv umora proteina izolovanih iz Panax quinquefolium. J. Ethnopharmacol. 2014, 153, 430–434. [CrossRef] [PubMed]

45. Tan, W.; Yu, KQ; Liu, YY; Ouyang, MZ; Yan, MH; Luo, R.; Zhao, XS Anti-fatigue aktivnost polisaharida ekstrahiranih iz radix Rehmannia preparata. Int. J. Biol. Macromol. 2012, 50, 59–62. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wang, J.; Zhou, J.; Tang, G. Studija o efektu bamije protiv umora. Brada. J. Mod. Appl. Pharm. 2003, 20, 2. [CrossRef]

47. Contarteze, RV; Manchado Fde, B.; Gobatto, CA; de Mello, MA Biomarkeri stresa kod pacova podvrgnuti plivanju i vježbama trčanja na traci. Comp. Biochem. Physiol. A Mol. Integr. Physiol. 2008, 151, 415–422. [CrossRef] [PubMed]

48. Xu, SY Eksperimentalna metodologija farmakologije; Narodna medicinska izdavačka kuća: Peking, Kina, 2002.

49. Zanwar, AA; Badole, SL; Shende, PS; Hegde, MV; Bodhankar, SL Antioksidativna uloga katehina u zdravlju i bolesti. U Polifenoli u ljudskom zdravlju i bolesti; Watson, RR, Preedy, VR, ur.; Academic Press: San Diego, CA, SAD, 2014; str. 267–271.

50. Jadhav, SB; Singhal, RS Laccase–guma Arabic konjugat za pripremu vodotopivog oligomera katehina s pojačanim antioksidativnim djelovanjem. Food Chem. 2014, 150, 9–16. [CrossRef] [PubMed]

51. Liudong, F.; Feng, Z.; Daoxing, S.; Xiufang, Q.; Xiaolong, F.; Haipeng, L. Procjena antioksidativnih svojstava i efekta polifenola zelenog čaja protiv umora. Sci. Res. Eseji 2011, 6, 2624–2629.

52. You, L.; Zhao, M.; Regenstein, JM; Ren, J. In vitro antioksidativna aktivnost i in vivo efekat protiv umora peptida vijuna (misgurnus anguillicaudatus) pripremljenih digestijom papaina. Food Chem. 2011, 124, 188–194. [CrossRef]


Moglo bi vam se i svidjeti