Scaffold protiv starenja - Klotho genom aktiviran podstiče pomlađujući odgovor na zacjeljivanje rana u matičnim ćelijama dobivenim od ljudske masnoće

3. Diskusija

Ova studija je imala za cilj da istraži funkcionalni uticaj anti-aginga -Klotho genom aktivirana skela na ljudskim ADSC-ima za poboljšane primjene zacjeljivanja rana. Sve u svemu, otkrili smo da genski aktivirana skela nudi kontroliranu aktivaciju regenerativnih sposobnosti ADSC-a kao što je prikazano na slici5. Konkretno, skela aktivirana genima privremeno je poboljšala stabljiku ADSC-a kroz aktivaciju faktora transkripcije Oct-4. Skela aktivirana genima također je promovirala ranu aktivaciju antifibroznog gena TGF- 3, ključni faktor za kontrolirano zacjeljivanje sa smanjenim ožiljcima. Nadalje, aktivirani ADSC-i su vremenski kontrolirali endotelnu angiogenezu i podržavali zacjeljivanje dermalnih fibroblasta kroz parakrinu signalizaciju. U pravcu sazrevanja, ADSC-i su takođe kontrolisali aktivaciju profibrotskog odgovora u dermalnim fibroblastima. U međuvremenu, ADSC-i na skeli aktiviranoj genom efikasno su regenerisali dermalnu bazalnu membranu povećavajući taloženje laminina i kolagena IV. Ovaj odgovor je dalje povezan sa smanjenjem ožiljaka - Ekspresija SMA proteina i poboljšano taloženje kvalitativnog elastinskog matriksa. Naša studija je kolektivno utvrdila da je -Klotho gen aktiviranCistancheposeduje ogroman potencijal zazarastanje ranai mogaonapredna terapija zasnovana na matičnim ćelijama za podmlađujuće primjene liječenja.

Slika 5. Šematski prikaz funkcionalnog uticaja skele aktivirane B-Klotho genom na ljudske ADSC za primjene u zacjeljivanju rana. Ključni nalazi ove studije su (1) prolazno poboljšanje pluripotencije matičnih stanica i antifibroznog odgovora, (2) poboljšana parakrina kontrola angiogeneze i profibrotičko remodeliranje kolagena u dermalnim fibroblastima i konačno, (3) povećano sazrijevanje bazalna membrana s kontrolom ekspresije proteina povezanih s ožiljkom Isprekidane linije za elastinski matriks impliciraju poboljšano kvalitativno taloženje.

Kliknite ovdje da saznate kako CistancheEfekti zarastanja rana

U strategijama zacjeljivanja rana, genska terapija zasnovana na plazmidu primjenjuje se za prolazno pojačavanje ćelijskih odgovora dok se popravak rane ne završi [37]. Naš genski aktiviran skela također pokazuje da je terapeutski -Klotho gen je prolazno regulisan tokom 14 dana. Značajno poboljšan (170- puta) izraz -Klotho mRNA na dan 3 može se pripisati neposredno-ranom CMV promotoru za koji je poznato da pojačava transkripcijsku aktivaciju kodiranog transgena [38]. Međutim, u MSC-ovima, CMV može biti podvrgnut metilaciji DNK ili deacetilaciji histona što može smanjiti ekspresiju transgena [39]. Štaviše, plazmidi su općenito epizomi koji se ne repliciraju, ograničavajući prijenos transgena u stanice koje se dijele i uzrokujući pad ekspresije transgena tokom vremena [40]. Prisustvo heterohromatskih markera koji potiču iz bakterijskih sekvenciplazmid bi mogao dalje potisnuti ekspresiju transgena [41], što ukupno doprinosi prolaznoj ekspresiji gena.

Jedan od načina koji se teži u liječenju teško zacjelivih rana je primjena bioaktivnih skela sa sjemenom ćelija. Jedan od razloga je njihova sposobnost da promovišu brzo popravljanje rana. Metabolički aktivne ćelije u graftu luče parakrine faktore i prolaze kroz diferencijaciju, orkestrirajući složene signalne događaje u okruženju rane [42]. Matične ćelije, posebno, imaju jedinstvenu sposobnost da osjete vanjske podražaje i moduliraju svoj odgovor kako bi obnovile homeostazu [43]. Međutim, matične ćelije gube svoju stabljiku kada se ekspandiraju in vitro kako bi se stvorio veliki broj ćelija za presađivanje. Naša studija pokazuje da se stabljika može privremeno poboljšati pomoću genski aktivirane skele koja nosi gen protiv starenja -Klotho. Konkretno, primijetili smo da je skela aktivirana genom protiv starenja pojačala ekspresiju gena stabljike Oct-4 u ADSC-ima. Oktobar -4 je jedan od ključnih faktora transkripcije u embrionalnim matičnim ćelijama i neophodan je za kontrolirani embrionalni razvoj [44]. U ADSC-ima, aktivacija Oct-4 gena može promovirati njihov potencijal proliferacije i diferencijacije [45]. Stoga, povećana ekspresija Oct-4 može olakšati brzu diferencijaciju ADSC-a na skeli aktiviranoj genom u ćelije domaćina i pomoći u procesu zacjeljivanja.

Nakon što smo posmatrali aktivaciju Oct-4 gena u ADSC-ima, onda smo procijenili angiogenu moć ADSC-a. Angiogeneza je ključna za efikasnu integraciju transplantata sa tkivom domaćina [46]. Ćelije u graftu pokreću angiogenezu putem sekrecije parakrinih faktora. Angiogeneza je takođe ključni događaj za razvoj granulacionog tkiva i njena aktivnost se smanjuje kako granulaciono tkivo sazrijeva [47]. Ovo programirano ograničenje angiogene aktivnosti u kasnijim fazama zarastanja je od suštinskog značaja za kontrolu ožiljaka i hipergranulacije koje mogu ometati reepitelizaciju [48]. Naš nalaz također pokazuje da ADSC na skeli aktiviranoj genom mogu poboljšati klijanje endotela i kontrolirati njihov rast putem parakrine signalizacije. Dodatno, značajno povećanje metaboličke aktivnosti endotelnih ćelija i klijanje kao odgovor na dan 3 CM pokazuje potencijal ADSC-ova opterećenog genom aktiviranog skela da se brzo integriše u tkivo domaćina. Štaviše, upotreba matičnih ćelija CM je uobičajeno prihvaćen pristup bez ćelija za poboljšanje kvalitetnog zacjeljivanja rana [49]. Kao ograničenje, priznajemo da bi odrasle dermalne endotelne ćelije služile boljem ćelijskom modelu za proučavanje angiogeneze; međutim, da bi se održala konzistentnost s našim prethodnim studijama i da su HUVEC-i široko prihvaćeni kao kandidati za ćelije "zlatnog standarda" [50], usvojili smo HUVECs test angiogeneze.

Povećanje aktivnosti remodeliranja fibroblasta je opšta karakteristika sazrevanja granulacionog tkiva [51]. Tokom ove faze, kolagen III matrice se postepeno zamenjuju jačim kolagen I vlaknima [51]. Kolagenska vlakna tada potiču kontrakciju rane [52], a kontrakcija rane je neophodna za potpuno zatvaranje rane [53]. Međutim, agresivno kontinuirano povećanje taloženja kolagena I može povećati stvaranje ožiljaka [54]. Kontrola ožiljaka je ključna jer može inhibirati razvoj drugih dodataka kože kao što su folikuli dlake, žlijezde lojnice i znojne žlijezde, na primjer, kod opekotina [54]. Naš nalaz pokazuje da stari (14. dan) CM iz grupe genski aktiviranih skela može kontrolirati ekspresiju profibrotičnog kolagena I u odraslim dermalnim fibroblastima. Ovaj kontrolisani efekat na fibroblaste desio se bez daljeg uticaja na migraciju fifibroblasta ili njihovu antifibrotičnu ekspresiju kolagena III u odnosu na grupu bez gena. Stoga predlažemo da ADSC-opterećena genom aktivirana skela može ponuditi bolju kontrolu u ograničavanju ožiljaka in vivo kroz kontroliranu ekspresiju kolagena I. Li i saradnici, su također pokazali da ADSC CM može značajno smanjiti ekspresiju kolagena I u fibroblastima nastalim iz hipertrofičnih ožiljaka [55]. Druga studija koju su proveli Wang et al., pokazala je slično smanjenje ekspresije kolagena I u fibroblastima izvedenim iz keloida [56], zajedno demonstrirajući antifibrozni potencijal ADSC-ovih CM.

Jedan od značajnih nalaza koji smo zabilježili primjenom -Klotho genom aktivirana skela je poboljšana regeneracija bazalne membrane u ADSC-ima. Regeneracija bazalne membrane je neophodna za sazrijevanje krvnih žila i potpunu reepitelizaciju [57,58]. Važno je da je trend u kojem proteini laminin(21- puta) i kolagen IV (8.8- puta) su dodatno regulirani što ukazuje na povećano sazrijevanje bazalne membrane u grupi skela aktiviranih genom [59]. Osim što djeluje kao faktor protiv starenja [60], beta kloto funkcionira tako da pojača osjetljivost na faktor rasta fibroblasta (FGF) od strane FGF receptora [61]. Dodatno, utvrđeno je da povećanje FGF signalizacije potiče sazrijevanje bazalne membrane kroz taloženje laminina i kolagena IV [62]. Stoga, uzimajući u obzir ulogu beta klotho kao ko-receptora FGF, povećano sazrijevanje baze u grupi skela aktiviranih genom potencijalno je posredovano povećanjem FGF signalizacije ADSC-a.

Komponenta bazalne membrane koja je izuzetno regulirana u genski aktiviranoj grupi skela je protein kolagen IV. Protein kolagen IV predstavlja 50 posto svih bazalnih membrana [63] i pruža strukturnu stabilnost bazalnoj membrani [59]. Međutim, starenje značajno smanjuje ekspresiju kolagena IV u dermalno-epidermalnom spoju [58,64] i nedostatak kolagena IV može potaknuti patogenezu ožiljaka [65]. Stoga, naši rezultati sugeriraju da povećana regenerativna moć bazalne membrane skele aktiviranog genom napunjenog ADSC-ima može značajno pomoći u poboljšanom zacjeljivanju kod starijih pacijenata. Druge studije su također pokazale da ECM izveden iz masnog tkiva posjeduje ogroman terapeutski potencijal za popravak kože [66]. Nadalje, tkivno inžinjerirani transplantati bogati lamininom i kolagenom IV također su od interesa za popravak respiratornog epitela [67]. 

Pored profibrotičke kontrole prema fibroblastima, naša studija dalje pokazuje da ADSC u genski aktiviranoj skeli također izražavaju 2-puta nižu ekspresiju proteina povezanog s ožiljkom -SMA [68]. Iako nismo procijenili njegov utjecaj in vivo, smanjenje lokalnog - Ekspresija SMA je ključna za poboljšano kvalitativno zacjeljivanje [69]. Upotreba fibroznih agenasa kao što je bleomicin [70] bi mogao biti jedan od načina da se bolje procijene anti-fibrotička svojstva ADSC-a/genski aktivirane konstrukcije skele in vitro; međutim, naš fokus je bio da ustanovimo privremeni terapeutski potencijal konstrukta.

Još jedan pokazatelj da ADSC-opterećena skela aktivirana genima može poboljšati kvalitativno zacjeljivanje je taloženje fibroznog elastinskog matriksa umjesto neujednačenih ekstracelularnih sekreta u grupi bez gena. Taloženje elastina jedna je od glavnih aktivnosti koje pokreću zacjeljivanje fetalnih rana bez ožiljaka [71]. Međutim, koža odraslih nema taloženje elastina [71]. Kao takav, tropoelastin, prekursor elastina, često se ugrađuje u skele od biomaterijala za kontrolu ožiljaka u zacjeljivanju rana [72]. Uzeti zajedno, naši nalazi impliciraju da ADSC/ -Klotho genom aktivirana konstrukcija skele može dati snažan antifibrozni odgovor in vivo.

4. Materijali i metode

4.1. Priprema genski aktiviranog skela

Skela aktivirana genima razvijena je korištenjem 2-korak procesa. Prvo, čvrste porozne kolagen-hondroitin sulfatne skele napravljene su smrznutom suspenzijom od kolagena tipa 1 goveđe tetive i hondroitin{5}}sulfata dobijenog iz hrskavice morskog psa (Sigma, UK). Za proizvodnju skela korišten je optimizirani proces sušenja smrzavanjem dizajniran za stvaranje ujednačenih pora [73]. Na osnovu našeg objavljenog protokola [74], liofilizirane skele su zatim dehidrotermalno (DHT) tretirane na 105◦C pod vakuumom za sterilizaciju i mehaničko poboljšanje. Sterilizovane skele su zatim hemijski umrežene sa 14 mM N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilkarbodiimid hidrohlorida i 5,5 mM N-hidroksisukcinimida (2,5 molarni omjer EDC/NHS) (Sigma, UK) rastvorom u dodatno poboljšati mehaničku stabilnost [75]. Umrežene skele su zatim oprane sa PBS (Gibco, Paisley, UK) da bi se uklonile zaostale hemikalije. Kada su skele bile spremne, pripremljeni su polipleksi u odnosu N/P10 (odnos dušika prema fosfatu) miješanjem unaprijed određene zapremine rastvora razgranatog polietilenimina (PEI) sa plazmidnom DNK (pDNA) koja kodira za ljudski beta-Klotho gen ( -Klotho), dobijeno od SinoBiological, Peking, Kina. Odnos N/P10 je odabran na osnovu naših prethodnih studija koje su otkrile da polipleksi formulisani u odnosu N/P10 mogu efikasno formirati male, stabilne kationske nanočestice sa plazmidima velikim kao GLuc (5,76 kb) [21,23]. Prije upotrebe, plazmidi su razrijeđeni u vodi bez endotoksina kako bi se dobila radna koncentracijaod 0.5µg/µL. Plazmid sadrži humani pojačani neposredno-rani citomegalovirus(CMV3) promotor za promoviranje stabilne i prolazne ekspresije kodiranog na visokom nivougena u ćelijama sisara.

Mješavina plazmida/PEI je ostavljena da se slegne 30 minuta da se samosastavi u polipleksnanočestice. Nanočestice su zatim natopljene pipetiranjem na skelejednake zapremine rastvora polipleksa po strani skele. Ukupno 2µg pDNK je biokoristi se po skeli za razvoj genski aktivirane skele.

4.2. Cell Seeding on -Klotho genom aktivirana skela

Ljudski ADSC (iXCells Biotechnologies, San Diego, Kalifornija, SAD) prošireni su na prolaz 4 u mediju za rast ADSC-a (kat. br. MD0003) koji je isporučila kompanija. Ukupno 5× 105 ADSC-ovi (2.5× 105 po strani) zatim su zasijane po skeli bez gena (kontrola,n = 3) ili genski aktivirana skela (test,n = 3). Nakon što su ćelije ostavljene oko 20 minuta, dodano je 2 mL transfekcionog medija OptiMEM (Gibco, UK), a celularizirane skele su inkubirane na 37◦C 24 h. Nakon 24 h inkubacije, celularizirane skele bez gena ili aktivirane genom prebačene su u nove 12- ploče sa bunarima i hranjene sa 2 mL ADSC medija za rast. Promjena medija je zatim vršena svaka 3-4 dana do 14. dana prikupljanjem 1 mL kondicioniranog medija (CM) i zamjenom istog volumena svježeg medija. Svi CM su pohranjeni na−80 ◦C do analize.

4.3. qRT-PCR analize za određivanje - Prekomjerna ekspresija Klotho gena i aktivacija funkcionalnih gena

Da bi se odredila prolazna regulacija ciljnih gena, ćelije su sakupljene 3. (rano) i 14. (kasno) dana nakon zasijavanja na skelama bez gena ili genom aktiviranim. Ćelije su prvo lizirane pomoću Qiazol reagensa za lizu (Qiagen, Germantown, MD, SAD). Zatim je dodan hloroform da se ćelijski lizat odvoji na proteinske, DNK i RNK faze. Koristeći RNeasy Kit (Qiagen, Manchester, UK), RNA je ekstrahirana, a njihov kvalitet i količina su određeni pomoću Multiskan Go čitača ploča (Thermo Scientific, UK) sa apsorbancijom postavljenom na 260 nm. Genomska DNK je zatim uklonjena miješanjem RNK sa puferom za brisanje genomske DNK (Qiagen, Manchester, UK) i zagrijavanjem do 42◦C 2 min. Nakon toga, obavljena je reverzna transkripcija da bi se pripremila cDNK. Duplikati cDNK po replikatu (n = 3) su stavljeni u qRT-PCR ploče, a zatim je test izveden korištenjem prajmera navedenih u tabeli1. Promjena nabora u ekspresiji mRNA u odnosu na ćelije na skeli bez gena izračunata je korištenjem 2−∆∆CTmetodu iz prosjeka od tri ponavljanja po grupi. Ljudski GAPDH (Hs_GAPDH_1_SG, kat. br. QT00079247) je korišten kao gen za održavanje kućanstva.

4.4. Analiza bioaktivnosti sekretiranih faktora iz ADSC-a nadalje -Klotho genom aktivirana skela

4.4.1. Pro-angiogene analize bioaktivnosti

4.4.2. Analiza zacjeljivanja i sazrijevanja dermalnih fibroblasta

Nakon eseja angiogeneze, istražili smo potenciju CM-a za dermalno zacjeljivanje korištenjem analize ogrebotina dermalnih fibroblasta odraslih ljudi (iXcells, kat. br. 10 HU-014). Za ovu studiju, posebno smo odabrali stari CM od 14. dana da bismo proučavali njegov utjecaj na zatvaranje rane fibroblasta tokom sazrijevanja. Ukupno 1× 104 ćelije/bunariću u 96-pločicu za jažice su zasijane i inkubirane preko noći u mediju za rast fibroblasta. Sljedećeg dana nastala je rana na monosloju horizontalnim grebanjem vrha pipete od 200 uL preko bunara. Jednosloj je zatim ispran PBS-om da bi se uklonili ostaci i hranjen sa CM. Zatvaranje rane zabilježeno je između 12-16 sati nakon ogrebotine. Imunološko bojenje je korišteno za proučavanje ekspresije profibroznog kolagena I (1:100, Novusbio, UK) i antifibrotskog kolagena III (1:100, Novusbio, UK) u fibroblastima. Fibroblasti su obojeni rodaminom (1:800, Abcam, UK) za snimanje F-aktina. Imunološko bojenje je izvedeno kako je opisano u odjeljku4.5, sa izuzetkom obrade tkiva i deparafinizacije. I HUVEC i fibroblasti su korišteni na pasusu 4.

4.5. Imunofluorescentno snimanje proteina ekstracelularnog matriksa

Nakon 14 dana kulture, skele bez celularnih gena ili aktivirane genom su sakupljene za detekciju taloženja matriksa korištenjem imunofluorescencije. Obrada uzoraka je obavljena kako je prethodno opisano. Ukratko, skele su prvo oprane PBS-om i fiksirane u 10 posto neutralnom puferiranom formalinu 20 minuta. Fiksni uzorci su zatim obrađeni standardnim protokolom za deparafinizaciju. Blokovi su zatim izrezani na 7-µm debelih kriški i sakupljenih na nabijenim stakalcima. Sekcije su zatim deparafinizovane korišćenjem ksilena, nakon čega je usledila rehidratacija preseka sa opadajućim gradijentom etanola. Nakon toga, ćelije su permeabilizirane sa 0.2 posto Tween-a®20 (Sigma-Aldrich, Francuska) rastvor u PBS-u 30 min (10 min pranja× 3) i blokiran upotrebom 10 posto NGS-a (normalni kozji serum, Invitrogen, Rockford, IL, SAD)/5 posto BSA/0,3 M glicina (pripremljen u rastvoru za permeabilizaciju) tokom 1 h. Nakon blokiranja, stakalca su isprana u PBS i zatim inkubirana na 4◦C preko noći sa antitelima na ciljne proteine ​​matriksa navedenim u tabeli2. Sljedećeg dana, stakalca su tri puta isprana u PBS-u po 2-3 min da bi se uklonila sva nevezana primarna antitijela. Nakon toga, stakalca su inkubirana u Alexa 488-konjugirani kozji anti-mišji IgG (A32723, Invitrogen, UK) ili Alexa 594-konjugirani kozji anti-zečji IgG (A11012, Invitrogen, UK) u 1: Razblaživanje 800 na sobnoj temperaturi 1 h u mraku. Korak ispiranja izveden je kao i ranije i kontraobojen za jezgre pomoću medija za montažu sa DAPI (ab104139, Abcam, UK). Slajdovi su zatim snimljeni pomoću fluorescentnog mikroskopa (Olympus BX43, Japan) na 20× objektivan. Kao kontrole korišteni su uzorci inkubirani samo sa sekundarnim antitijelima.

Kvantifikacija slike

Image] softver (Image, NIH, MD, USA) korišten je za semi-kvantitativno određivanje količine eksprimiranih proteina. Za svaki marker je najprije određena konstantna vrijednost praga preliminarnim snimanjem različitih sekcija. Koristeći postavljenu graničnu vrijednost, određena je integrirana gustina (obojena površina x srednja vrijednost sive) slika, a zatim normalizirana na broj ćelija (DAPI brojanje) kako bi se dobila konačna srednja gustina fluorescencije po ćeliji. Prosjek je kvantificiran od 8-10 nasumičnih slika po ponavljanju s najmanje tri ponavljanja po grupi. Prosjeci dobijeni iz tri ponavljanja/grupi su zatim korišteni za mjerenje relativne ekspresije između grupa.

4.6. Statistička analiza

Svi rezultati su izraženi kao srednja vrijednost plus standardna devijacija. Neupareni, dvostrani t-test se općenito koristio za izračunavanje statističke značajnosti između grupa, gdje se p < 0.05 smatralo značajnim

Ova studija je pokazala da jeprotiv starenja -Cistanche aktiviran genom Klothoponude kontrolisane aktiviranje regenerativnog kapaciteta ADSC-a. Ključni nalazi ove studije su (1)prolazno povećanje pluripotencije matičnih ćelija i antifibroznog odgovora, (2)poboljšana parakrina kontrola prema angiogenezii profibrotično remodeliranje kolagenau dermalnim fibroblastima, i konačno, (3)povećano sazrevanje bazalne membraneuz kontrolu ekspresije proteina povezanih s ožiljcima. Konačno, ovi rezultati sugerirajuda su ADSC-ovi natovareni - Skela aktivirana genom Klotho može imati veliki potencijal aliječenje širokog spektra dermalnih rana.

resursi, ALL, FJO i MBK; kuriranje podataka, ALL i MBK; pisanje—priprema originalnog nacrtation, ALL; pisanje—pregled i uređivanje, ALL, FJO i MBK; vizualizacija, SVE; nadzor,FJO i MBK; administracija projekta, MBK; pribavljanje sredstava, FJO i MBK Svi autorisu pročitali i pristali na objavljenu verziju rukopisa.

Sukobi interesa:Autori izjavljuju da ne postoji sukob interesa.

Reference

1. Laiva, AL; O'Brien, FJ; Keogh, MB Inovacije u sistemima isporuke gena i faktora rasta za zacjeljivanje dijabetičkih rana.J. Tissue Eng. Regen. Med.2018, 12, e296–e312. [CrossRef] [PubMed] 

2. Makrantonaki, E.; Wlaschek, M.; Scharffetter-Kochanek, K. Patogeneza poremećaja zacjeljivanja rana u starijih osoba.JDDG J. Dtsch. Dermatol. Ges.2017, 15, 255–275. [CrossRef] [PubMed]

3. Ganguly, P.; El-Jawhari, JJ; Burska, AN; Ponchel, F.; Giannoudis, PV; Jones, EA Analiza starenja in vivo u mezenhimalnim stromalnim stanicama ljudske koštane srži korištenjem testa jedinica-fibroblasta koji formiraju kolonije i fenotipa CD45lowCD271 plus.Stem Cells Int.2019, 2019, 5197983. [CrossRef] 

4. Westerweel, PE; Teraa, M.; Rafifii, S.; Jaspers, JE; White, IA; Hooper, AT; Verhaar, MC Poremećena mobilizacija endotelnih progenitornih ćelija i disfunkcionalna stroma koštane srži kod dijabetes melitusa.PLoS ONE2013, 8, e60357. [CrossRef] 

5. Murray, RZ; West, ZE; Cowin, AJ; Farrugia, BL Razvoj i upotreba biomaterijala kao terapija za zacjeljivanje rana.Spali. Trauma2019, 

6. [CrossRef] [PubMed] 6. Ebrahimian, TG; Pouzoulet, F.; Squiban, C.; Buard, V.; André, M.; Rođak, B.; Tamarat, R. Ćelijska terapija zasnovana na stromalnim stanicama iz masnog tkiva potiče fiziološko i patološko zacjeljivanje rana.Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol.2009, 29, 503–510. [CrossRef] 

7. Wu, Y.; Chen, L.; Scott, PG; Tredget, EE Mezenhimalne matične ćelije poboljšavaju zacjeljivanje rana kroz diferencijaciju i angiogenezu.Matične ćelije2007, 25, 2648–2659. [CrossRef] [PubMed] 

8. Foubert, P.; Gonzalez, AD; Teodosescu, S.; Berard, F.; Doyle-Eisele, M.; Yekkala, K.; Fraser, JK Regenerativna ćelijska terapija za zacjeljivanje rana od opekotina: poređenje dvije metode isporuke.Adv. Njega rane2016, 5, 288–298. [CrossRef] [PubMed]

9. Assi, R.; Foster, TR; He, H.; Stamati, K.; Bai, H.; Huang, Y.; Dardik, A. Isporuka mezenhimalnih matičnih ćelija u biomimetički konstruisanim skelama potiče zacjeljivanje dijabetičkih ulkusa.Regen. Med.2016, 11, 245–260. [CrossRef] [PubMed] 

10. Jiang, Y.; Chen, B.; Liu, Y.; Zhufu, Z.; Yan, X.; Hou, X.; Tan, Q. Efekat kolagenske skele sa ćelijama stromalne vaskularne frakcije dobijene od masnoće na zarastanje dijabetičkih rana: Studija na modelu dijabetičkih svinja.Tissue Eng. Regen. Med.2013, 10, 192–199. [CrossRef] 

11. Falanga, V.; Sabolinski, M. Dvoslojni konstrukt žive kože (APLIGRAF®) ubrzava potpuno zatvaranje teško zacjelivih venskih ulkusa.Wound Repair Regen.1999, 7, 201–207. [CrossRef] 12. Hart, CE; Loewen-Rodriguez, A.; Lessem, J. Dermagraft: Upotreba u liječenju kroničnih rana.Adv. Njega rane.2012, 1, 138–141. [CrossRef] [PubMed] 13. Dinh, TL; Veves, A. Efikasnost Apligrafa u liječenju čireva dijabetičkog stopala.Plast. Reconstr. Surg.2006, 117, 152S–157S. [CrossRef] [PubMed]

14. Eaglstein, WH; Falanga, V. Inženjering tkiva i razvoj Apligrafa®, ekvivalent ljudske kože.Clin. Ther.1997, 19, 894–905. [CrossRef] 

15. Jiang, T.; Xu, G.; Wang, Q.; Yang, L.; Zheng, L.; Zhao, J.; Zhang, X. In vitro, ekspanzija je narušila stabljiku mezenhimskih matičnih ćelija ranog prolaza za liječenje defekta hrskavice.Cell Death Dis2017, 8, e2851. [CrossRef] [PubMed]

16. Liu, J.; Ding, Y.; Liu, Z.; Liang, X. Starenje u mezenhimskim matičnim ćelijama: funkcionalne promjene, molekularni mehanizmi i strategije pomlađivanja.Front. Cell Dev. Biol.2020, 8, 258. [CrossRef] [PubMed] 

17. Wang, W.; Xu, X.; Li, Z.; Lendlein, A.; Ma, N. Genetski inženjering mezenhimskih matičnih ćelija nevirusnom isporukom gena.Clin. Hemorheol. Microcirc.2014, 58, 19–48. [CrossRef] 

18. Deveza, L.; Choi, J.; Lee, J.; Huang, N.; Cooke, J.; Yang, F. Prekomjerna ekspresija CXCR4 izazvana polimer-DNK nanočesticama poboljšava presađivanje matičnih ćelija i regeneraciju tkiva u modelu ishemije stražnjeg ekstremiteta miša.Theranostics2016, 6, 1176–1189. [CrossRef] [PubMed] 

19. O'Brien, FJ Biomaterijali i skele za tkivno inženjerstvo.Mater. Danas2011, 14, 88–95. 20. Yannas, I.; Tzeranis, D.; Harley, B.; Dakle, P. Biološki aktivni skele na bazi kolagena: Napredak u obradi i karakterizaciji.Philos. Trans. R. Soc. A Math. Phys. inž. Sci.2010, 368, 2123–2139. [CrossRef] 

21. Laiva, AL; Raftery, RM; Keogh, MB; O'Brien, FJ Pro-angiogeni utjecaj SDF-1 genski aktivirane skele zasnovane na kolagenu u angiogenezi vođenoj matičnim ćelijama.Int. J. Pharm.2018, 544, 372–379. [CrossRef] [PubMed] 

22. Lackington, WA; Raftery, RM; O'Brien, FJ In vitro efikasnost genom aktiviranog nervnog kanala za vođenje koji uključuje nevirusne PEI-pDNA nanočestice koje nose gene koji kodiraju NGF, GDNF i c-Jun.Acta Biomater.2018, 75, 115–128. [CrossRef] 

23. Tierney, EG; Duffy, GP; Hibbitts, AJ; Cryan, SA; O'Brien, FJ Razvoj ne-virusnih gen-aktiviranih matrica za regeneraciju kostiju korištenjem polietilenimina (PEI) i skela na bazi kolagena.J. Control. Pustiti2012, 158, 304–311. [CrossRef] [PubMed] 24. Laiva, AL; O'Brien, FJ; Keogh, MB SDF-1 genski aktivirana kolagenska skela pokreće funkcionalnu diferencijaciju ljudskih Schwannovih stanica za primjene u zacjeljivanju rana.Biotechnol. Bioeng.2021, 118, 725–736. [CrossRef] [PubMed]