Aktivnost vođena izolacija fenolnih kompozicija iz zida Anneslea Fragrans. I njihov citoprotektivni učinak protiv oksidativnog stresa u HepG2 ćelijama izazvanog vodikovim peroksidom, 2. dio

Molimo kontaktirajteoscar.xiao@wecistanche.comza više informacija

2.7. Inhibicijski učinak na intracelularnu generaciju ROS

Oksidativni stres je vrsta neravnoteže između oksidacije i antioksidacije u tijelu [28]. Prekomjerno nakupljanje ROS može dovesti do oksidativnog stresa koji može uzrokovati oštećenje stanica i tkiva kao što su lipidi, membrane i DNK [29]. Antioksidansi, uključujući polifenole i flavonoide, mogu pomoći tijelu da smanji ova oštećenja uzrokovana ROS. Općenito, H, O se široko koristi za indukciju intracelularne ROS poremećene proizvodnje i narušavanje antioksidativne odbrane ćelija [30]. U našoj sadašnjoj studiji, H2O2 je odabran da izazove abnormalnu akumulaciju intracelularnih ROS i naruši antioksidativnu odbranu ćelija. Da bi se procijenio inhibitorni efekat na intracelularno stvaranje ROS-a u H, O2-indukovanim HepG2 ćelijama, nivoi intracelularnog ROS-a su testirani protočnom citometrijom. Ukratko, HepG2 ćelije su kultivisane u ploči sa 6-jažicom (1 × 10 stepeni ćelija/jažicu). Nakon 24 h inkubacije sa 50 ug/ml različitih ekstrakata ili 8 ug/ml Vc (pozitivna grupa), sve grupe osim kontrolne grupe su inducirane HO, tokom 6 h. Intracelularni nivoi ROS svakog jedinjenja su testirani (Slika 3). Odnos proizvodnje ROS značajno je povećan na 215,64±9,80 procenata u H2O, tretiranoj grupi u poređenju sa kontrolnom grupom (100 procenata). U poređenju sa grupom tretiranom H, O, jedinjenja 2, 5 i 6 značajno su potisnula unutarćelijsku proizvodnju ROS (p<0.05), and="" their="" inhibitory="" effect="" was="" equal="" to="" the="" vc="" group="" (figure="" 3).="" many="" phenolics="" have="" been="" proven="" to="" have="" a="" protective="" effect="" against="" intracellular="" ros="" by="" h2o2="" induction[31].="" additionally,="" compound="" 6="" displayed="" the="" strongest="" suppressive="" effect="" on="" intracellular="" ros="" production,="" which="" suggests="" that="" flavonoid="" compounds="" play="" a="" crucial="" role="" in="" inhibiting="" intracellular="" ros="">

2.8. Citoprotektivni efekat protiv H2O2-indukovane ćelijske apoptoze

Apoptoza je osnovni biološki fenomen ćelija, koji igra važnu ulogu u regulacionom mehanizmu proliferacije, rasta i mutacije ćelija, kao i stabilnosti unutrašnje sredine. Apoptoza, za razliku od nekroze, je posebna vrsta ćelijske smrti. Poremećaj apoptotičkog procesa loše utiče na organizam i uzrokuje mnoge bolesti [32]. H2O2, kao važan signalni molekul, reguliše proces ćelijske proliferacije, rasta i apoptoze [5]. Ova studija mjerila je apoptozu H, O, indukovanih HepG2 ćelija i procjenjivala citoprotektivne efekte jedinjenja 2, 5 i 6. Nakon tretiranja HepG2 ćelija sa 1.0 mM H2O2, omjer apoptoze je značajno povećan ( 57,20±1,97 posto), u poređenju sa kontrolnom grupom (9,10±0,62 posto, p<0.05)(figure 4).="" the="" ratios="" of="" apoptotic="" cells="" in="" the="" treated="" groups="" of="" compounds="" 2,="" 5,="" and="" 6="" significantly="" decreased="" compared="" with="" the="" h2o2-treated="" group="" (model="" group,=""><0.05)(figure 4).="" moreover,="" compound="" 6="" had="" significant="" efficiency="" in="" protecting="" hepa-2="" cells="" from="" h2o2="" toxicity,="" and="" the="" cell="" apoptosis="" ratio="" of="" 6(10.56±1.15%)was="" lower="" than="" that="" of="" the="" vc="" group="" (positive="" control),="" which="" was="" equal="" to="" that="" of="" the="" control="" group(figure="" 4).="" meanwhile,="" compounds="" 2="" and="" 5="" showed="" a="" moderate="" cytoprotective="" effect="" with="" cell="" apoptosis="" ratios="" of="" 2(26.76±2.60%)="" and="" 5(27.64±0.83%).="" the="" differences="" in="" antioxidant="" capacity="" may="" be="" attributed="" to="" the="" number="" of="" phenolic="" hydroxyl="" moieties="" and="" the="" link="">

3. Materijali i metode

3.1. Hemikalije i reagensi

Metanol, acetonitril i mravlja kiselina za tečnu hromatografiju visokih performansi (HPLC) su HPLC kvaliteta i kupljeni su od Mercka (Darmstadt, Nemačka). Rastvarači za ekstrakciju uzoraka uključujući etanol, dihlorometan i n-butanol bili su analitičke čistoće. Dejonizirana voda je pročišćena korištenjem Milli-Q ultračiste vodenog sistema (Millipore, Bedford, Massachusetts, MA, USA) i korištena u svim eksperimentima. Fenolna standardna jedinjenja galne kiseline, rutina, troloksa i vitamina C kupljena su od Chengdu Must Bio-Technology Co., Ltd. (Chengdu, Kina). Metiltiazol-2-il-25-difenil tetrazolijum bromid (MTT), Folin-Ciocalteu reagens, 2,2'-i-bis(3-etilbenzen-tiazolin-6-sulfonska kiselina)( ABTS),2,2-difenil-1-pikrilhidrazil radikal (DPPH), 1,3,5-tri(2-piridil)-2,4,{{23 }}triazin (TPTZ), 2',7'-dihlorofluorescein diacetat (DCFH-DA) i FeSO4-7HO su kupljeni od Sigma-Aldrich (Šangaj, Kina). NMR spektri su dobijeni pomoću Bruker AV-400, i/ili DRX-500 spektrometara. ESIMS spektri su snimljeni na An Agilent 1290 UPLC/6540 Q-TOF spektrometru.

Molimo kliknite ovdje da saznate više

3.2. Priprema uzorka

Anneslea fragrans Wall. listovi su sakupljeni iz kineskog grada Lincang 2020 jula. Listovi su sušeni u zasjenjenoj prostoriji do konstantne težine, a zatim su mljeveni u prah električnom mlinom. Ekstrakcija i frakcionisanje izvedeni su kao naša prethodno objavljena metoda uz neznatne modifikacije [33]. Uzorak u prahu (100 g) je pomiješan sa 1000 mL 80 posto vodenog etanolnog rastvarača i ultrazvučno obrađen u kupelji za ultrazvučno čišćenje pri 200 W tri puta (0,5 h svaki put). Zatim je sonicirana suspenzija sakupljena i centrifugirana na 1500×g 10 minuta pomoću Eppendorf centrifuge (TGL-20B, Shanghai Anting Scientific Instrument Factory, Šangaj, Kina). Kombinovani supernatant je koncentrisan na 50 stepeni pomoću rotacionog isparivača (Hei-VAP, Heidolph, Nemačka) i dalje osušen liofilizatorom za vakuumsko sušenje (Alpha 1-2 LD plus, Christ, Nemačka). Sirovi etanolni ekstrakt (CE, 30 g) je ponovo suspendovan sa vodom i tri puta uzastopno podeljen sa dihlorometanom, etil acetatom i n-butanol rastvaračima. Nakon koncentriranja i liofilizacije, dobijene su frakcija dihlormetana (DF), frakcija etil acetata (EAF), frakcija n-butanola (BF) i frakcija preostale vode (RWF) težine 3,2 g, 6,3 g, 7,2 g i 8,2 g , odnosno. Prema antioksidativnim aktivnostima različitih frakcija, BF je hromatografisan na staklenim kolonama (30 mm × 400 mm) mokro pakovanim sa 20 g (suhe smole) odabrane hidratizovane smole D101. Zapremina sloja (BV) smole bila je oko 40 mL. Nakon postizanja adsorptivne zasićenosti, kolona je prvo isprana destilovanom vodom sa 4×BV, a zatim eluirana sa etanol-voda (0:100,20:80,50:50,80:20,100:0,v/y, svaki 4× BV), da bi se dobilo pet podfrakcija (BF-A do E). Svaki dio rastvora za desorpciju je koncentrisan do suva pod vakuumom. CE, četiri frakcije (DF, EAF, BF i RWF) i pet podfrakcija (BF-A do E) su pohranjene u frižideru (-20 stepen) za dalje eksperimentisanje.

3.3. Bio-vođena izolacija aktivnih sastojaka

Pod vodstvom antioksidativnih analiza i HPLC analize, antioksidativna frakcija je dalje hromatografirana za izolaciju čistih spojeva. Ukratko, BF je podvrgnut koloni hidratizirane smole D101 da bi se dobilo pet subfrakcija (BF-A do E). BF-C (1,5 g) je podvrgnut koloni silika gela, eluiranjem sa DCM/MeOH (15:1), a zatim je odvojen upotrebom preparativne TLC (DCM/MeOH, 10:1) da bi se dobila jedinjenja 6 (118 mg). ) i 7 (10 mg). BF-D (1,1 g) je podvrgnut silika gel koloni (CHCl3/MeOH 10:1, 5:1) da bi se dobila jedinjenja 1 (129 mg) i 4 (15 mg). BF-E (1,2 g) je podvrgnut kolona silika gela (CHCl3/MeOH, 30:1, 10:1, 5:1) da bi se dobila jedinjenja 1 (216 mg), 2 (135 mg) i smeša. Ovo poslednje je prečišćeno kolonom silika gela (CHCl3/MeOH ,12:1) da bi se dobila jedinjenja 3 (19 mg) i 5 (15 mg) (Slika 5).

3.4. Razjašnjavanje strukture jedinjenja 1-7

Prema antioksidativnim aktivnostima različitih frakcija, tri podfrakcije, BF-C do E su podvrgnute kolonskoj hromatografiji. Na ovaj način, frakcionisanje BF-C u E, vođeno bioaktivnošću, dovelo je do izolacije sedam pojedinačnih fenolnih jedinjenja. Njihove strukture su identifikovane kao konfuzozid(1)[34], vakcinifolin (2)[34],1-[4-(-D-glukopiranoziloksi)-2-hidroksifenil]-3- (4-hidroksi-3-metoksifenil)-1-propanon (3) [35], (S)-naringenin-7-O- -D-glukopiranozid (4)[ 22],2',3,4,4'-tetrahidroksidihidrohalkon(5)[26], (epi)-katehin (6)[26] i kornozid (7)[36](Slika 1B) analizom 1D -NMR i ESI-MS podaci i poređenje sa prethodno prijavljenim jedinjenjima u literaturi. Među njima, jedinjenja 3,4 i 7 su po prvi put izdvojena iz ove biljke.

Cistanche može poboljšati imunitet

Confusoside (1). Molekularna formula je dodijeljena kao C21H24O, a odvajanjem je dobiveno 129 mg blijedožutih iglica. 'IH NMR (500 MHz, DMSO-d6) i ESI-MS(m/z 421 [M plus H]) podaci su bili identični prethodno prijavljenim jedinjenjima u literaturi [34]. Identifikacija je dodatno podržana 13C NMR (125 MHz,DMSO-dg)∶δ204.4 (s,C=O),163.5(s,C-2'),163.3(s,C -4'),155.5(s,C-4),132.6(d,C-6'),130.9(s,C-1),129.2(d, C -2, 6),115.0(d,C-3/C-5),114.4(s, C-1'),108.3(d, C{{45} }'),103.4(d,C-1"),99.6(d,C-3'),77.1(d, C-5"),76.4(d, C{{ 57}}"),73.1(d,C-2),69.5(d, C4'),60.5(t,C-6'),39.8(t,C- ),28.9( t, C-6).

Vacciniifolin (2) je dobijen kao žuti amorfni prah (153 mg) i dodeljena mu je molekulska formula C2H24O1o.'H NMR (500 MHz, DMSO-dg) i ESI-MS (m/z 437 [M plus H]) podaci su bili isti kao i prethodni prijavljeni podaci [34]. Identifikacija je dodatno podržana sa 13CNMR (125 MHz, DMSO-de) ∶δ204.4 (s, C=O）,163.5（s, C-2'）,163.3 (s, C{ {21}}),145.0(s, C-3),143.3(s, C-4),132.6(d, C-6),131.7(s, C{{33 }}),118.9(d, C-6),115.8(d, C-2),115.4(d, C-5),114.4(s, C-1 '), 108.3(d, C-5'),103.4(d, C-1'),99.6(d,C-3'),77.1(d, C{{57 }}"),76.4(d,C-3'),73.1(d,C-2"),69.5(d,C-4'),60.5(t,C{ {69}}'),39.4(t,Ca),29.1(t, C-6).

{{0}}[4-(-D-glukopiranosiloksi)-2-hidroksifenil]-3-(4-hidroksi-3-metoksifenil){{8 }}propanon (3). Jedinjenje je dobijeno kao bezbojne iglice (19 mg), a molekulska formula je dodeljena kao C22H2O10.'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) i ESI-MS (m/z451 [M plus H]* ) podaci se slažu sa literaturom [35]. Identifikacija je dodatno podržana sa 13CNMR (100 MHz, DMSO-d) ∶δ204.5 (s, C=O), 163.5 (s, C-2'), 163.3 (s, C{ {31}}'）,147.4(s,C-3),144.6(s,C-4),132.6(d,C-6),131.6(s,C{{ 43}}),120.4(d,C-6),115.2 (d, C-5),114.5(s,C-1'), 112.6(d,C{{55 }}),108.3(d,C-5'), 103.3 (d,C-1"),99.5 (d, C-3'),77.0(d,C{{ 67}}'),76.3(d, C-3"), 73.0(d,C-2"),69.5(d,C-4'),60.5(t,C -6'),55.5(q,C-OCH3),39.5(t, C-),29.4(t,C-6).

(S)-Naringenin-7-O- -D-glukopiranozid (4) je imao molekulsku formulu C21H2.O10, koja se dobija kao 15 mg bijelog praha. IH NMR (5{65}}0 MHz, DMSO-dg) i ESI-MS (m/z 435 [M plus H] plus ) podaci su bili u skladu sa prethodnim radom[22]. Identifikacija je dodatno podržana 13C NMR (125 MHz, DMSO-d) ∶δ197,2 (s, C-4）,165,3 (s, C-7）,165,2 (s, C{{25) }}), 162.9(s, C-9), 157.9(s, C-4'),128.6(s, C-1'), 128.4(d, C{{37} }}',6'),115.2 (d, C-3'/C-5'),1{{110}}3.2 (s,C-10 ),99.6(d,C-1'),96.5(d,C-6),95.4(d,C-8),78.7(d,C-2) ,77.0(d, C{{6{{240}}}}"),76.3 (d,C-3'),73.0(d,C{{ 66}}"), 69,5 (d,C-4'),60,5(t,C-6'),42,0(t,C-3). 2'3,4,A'-tetrahidroksidihidrohalkon (5) je imao molekulsku formulu kao C15H4O5 i odvojen (15 mg) kao bijeli prah.'H NMR (400 MHz, DMSO-dg) i ESI-MS (m/z 275 [ M plus H] plus ) podaci su bili u skladu s onima objavljenim u literaturi [26]. Identifikacija je dodatno podržana 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6)∶δ203.9 (s, C=O),164.7(s,C-2'),164.2(s,C -4'),144.9(s, C-3),143.3(s, C-4),133.0(d,C-6),131.8(s,C{ {114}}),118.9 (d,C-6),115.7(d,C-2),115.4(d,C-5),112.5 (s,C{{126 }}),108.2(d,C-5'),102.4(d,C-3'),39.5(t, C-a2),29.2(t, CB). (Epi)-katehin(6) je izolovan kao beli prah (118 mg) i ustanovljena je molekulska formula kao CHO4.1H NMR (400 MHz, DMSO-dg) i ESI-MS (m/z 291 [M plus H] plus )podaci su se dobro slagali sa onima objavljenim u literaturi [26]. Identifikacija je dodatno podržana 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) ∶δ156.4 (s, C-7), 156.1 (s, C-5), 155.3 (s, C{{162) }}）,144.8(s,C-3'),144.8(s,C-4'),130.5(s,C-1'),118.4(d,C{{ 174}}'),115.0(d,C-5'),114.4(d,C-2'), 99.0(s,C-10),95.1(d,C{ {186}}),93.8(d, C-8),80.9(d, C-2),66.2 (d,C-3),27.8(t, C{{198 }}). Kornozid (7) je dobijen kao amorfna čvrsta supstanca (10 mg) i određena je molekulska formula kao C1H20O8. 'H NMR (500 MHz, DMSO-dg) i ESI-MS (m/z317 [M plus H] plus ) podaci su odgovarali objavljeni podaci [36]. Identifikacija je dodatno podržana sa 13CNMR (100 MHz,DMSO-dg)∶δ185.3(s, C-4),153.3(d,C-2),153.2 (d,C{{220) }}）,126.4(d, C-3),126.4(d,C-5),102.8(d,C-1'),76.8(d,C{{232} }'),76.6(d,C-3'),73.3(d,C-2'),70.0(d,C-4),67.3(s, C{{244 }}), 63,8(t, C-8), 61,0(t, C-6), 39,7(t, C-7).

3.5. Određivanje ukupnog sadržaja fenola (TPC) i ukupnog sadržaja flavonoida (TFC)

TPC i TFC četiri frakcije (DF, EAE, BF i RWF) i pet podfrakcija (BF-A do E) izmjerene su prema našoj prethodno objavljenoj metodi [37]. Za TFC, 1.0 mL svakog uzorka (sa koncentracijom od 1.0 mg/mL) otopljenog u metanolu je pomiješan sa 0.5 mL Folin-Ciocalteu reagensa u centrifugalnu epruvetu i inkubirati 1 min. Zatim su u epruvetu dodani 20 procentni rastvor Na2CO3 (m/o) (1,5 mL) i dejonizovana voda (7,0 mL) i držani na 70 stepeni u vodenom kupatilu 10 min. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, 200 uL otopine je prebačeno u mikroploču 96-, a apsorbanca je određena na 765 nm pomoću čitača mikroploče SpectraMax M5 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA).

Za TFC, 1,2 mL otopina uzoraka (sa koncentracijom od 1.0mg/mL) pomiješano je sa 0.3 mL NaNO, (5 posto m/o) i 3,8 mL 7 0 posto vodenog etanola i inkubirano 8 min. Nakon toga, u smjesu je dodato 0.3 mL 10% vodenog Al(NO3), 4 mL4% vodenog NaOH i 0,4 mL 70% vodenog etanola i ostaviti da reaguje na sobnoj temperaturi 30 min. Zatim je 200 μL rastvora prebačeno u mikroploču 96-, za koju je apsorbanca izmjerena na 510 nm pomoću čitača mikroploče. TFC i TPC su izraženi kao miligrami ekvivalenata galne kiseline (mg GAE/geekstrakt) i rutinskih ekvivalenata po gramu ekstrakta (mg RE/g ekstrakta).

3.6. Određivanje antioksidativne aktivnosti

Antioksidativna aktivnost četiri frakcije (DF, EAF, BF i RWF) i pet podfrakcija (BF-A do E) procijenjena je u kombinaciji DPPH i ABTS testova uklanjanja radikala i FRAP testa na osnovu metode opisane u našoj prethodnoj studiji. [33]. Za DPPH test, 50μL rastvora uzorka (50,100,200 ug/mL) je pomešano sa 0,2 mL rastvora DPPH (0,1 mmol/ L) u 96-pločicu sa jažicom i ostavite da se inkubira 30 min. Apsorbancija je izmjerena na 517 nm sa SpectraMax M5 čitačem mikroploča (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). Za ABTS, 25 μL otopine uzorka (50, 100, 200 ug/mL) je dodano u 0,2 mLABTS otopine ( Smjesa je držana u mraku 6 minuta, a zatim je zabilježena apsorbancija na 734 nm Za FRAP, 20 μL otopine uzorka (50,100,200 ug/mL) je pomiješano sa 0,18 mL FRAP reagensa (7 mmol/ L). Nakon inkubacije od 10 min u mraku na 37 stepeni, apsorbancija je određena na 593 nm. Svi testovi su izvedeni u tri primjerka. Rezultati DPPH, ABTS i FRAP vrijednosti su izraženi kao umol Trolox ekvivalenti po gramu ekstrakt (μmol TE/g ekstrakta).

3.7.HPLC analiza

BF i jedinjenja {{0}} su analizirani na Agilent 1260 HPLC sistemu zajedno sa detektorom diodnog niza. Prije analize, svježe pripremljeni rastvor uzorka je filtriran kroz najlonsku membranu 0.45 um. Odvajanje je izvršeno pomoću kolone Reprosil-Pur Basic C18 (5 μm, 4,6×250 mm, Njemačka) održavane na 35 stepeni. Zapremina ubrizgavanja bila je 5,0 μL, brzina protoka je bila 1,0 mL/min, a talasna dužina detekcije bila je postavljena na 280 nm. Mobilne faze su bile zakiseljene vode sa 0,1 posto mravlje kiseline (faza A) i acetonitrila (faza B), eluiranje linearnog gradijenta je izvedeno na sljedeći način:0-3 min, 20 posto B;3-10 min, 40 posto B;10-15 min, 60 posto B;15-20 min, 100 posto B.

3.8. Ćelijska kultura i vitalnost ćelije

HepG2 ćelije raka ljudske jetre kupljene su od Kunming Cell Bank (Kunming, Kina). HepG2 ćelije su uzgajane u DME sa dodatkom 1 posto penicilina-streptomicina i 10 posto fetalnog goveđeg seruma u atmosferi od 5 posto CO,/95 posto zraka na 37 stepeni. Kada su ćelije inkubirane do odgovarajuće gustine (približno 80 posto), tretirani su pozitivnom kontrolom (Vc) i izolovanim jedinjenjima za dalje eksperimente.

Vijabilnost ćelija je određena MTT testom za procenu citotoksičnosti svakog uzorka [29]. Ćelije sa gustinom od 1×104 ćelija po jažici su zasijane u 96-ploču i ostavljene da se inkubiraju 24 h. Svako jedinjenje (pripremljeno kao četiri doze od 50 do 200 ug/mL) dodavano je u svaku jažicu 20 h. Zatim su ćelije tretirane MTT rastvorom sa konačnom koncentracijom od 4 h. Medijum sa MTT je uklonjen i 200 µL DMSO je dodat da se rastvori formazan.Apsorbancija je zabeležena na 570 nm čitačem mikroploče.Rezultati su pokazali da je svako jedinjenje netoksično za HepG2 ćelije u testiranim koncentracijama.

3.9. Inhibicija stvaranja ROS u H2O2-indukovanim HepG2 ćelijama

H,O,-indukovane HepG2 ćelije su korišćene da bi se odredio inhibitorni efekat na proizvodnju ROS [3]. HepG2 ćelije (1.0×10 stepen ćelija po jažici) su posađene u 6-ploču i zajedno kultivisane sa izolovanim jedinjenjima sa 50 ug/mL i Vc（8ug/ mL). Nakon inkubacije od 20 h, medijum je uklonjen i 2 μL H, O, (0,5 mM) je dodato u svaku jažicu još 6 h. Na kraju eksperimenta, ćelije su obeležene sa 2 μL DCFH-DA (10 mM) u mraku na 37 stepeni tokom 20 minuta. Apsorbancija je zabilježena protočnom citometrijom (Guava easy yet 6-2L, Millipore, Billerica, Massachusetts, MA, USA).

3.10. Određivanje apoptoze ćelije

Zaštitni efekat svakog jedinjenja na H2O2-indukovanu apoptozu HepG2 ćelija određen je korišćenjem kompleta za apoptozu humanog aneksina VFITC/PI [38]. HepG2 ćelije su prethodno tretirane sa ili bez izolovanih jedinjenja tokom 48 h. Nakon inkubacije ćelijama je dodato 100 μL pufera za vezivanje, a ćelije su reagovale u mraku sa 10 μL aneksina V-FITC 5 minuta na sobnoj temperaturi i sa 10 μL propidijum jodida (PI) u ledenoj kupelji 5 minuta. min, sukcesivno. Ćelijska apoptoza je odmah analizirana pomoću protočne citometrije.

3.11.Statistička analiza

Svi eksperimenti su izvedeni u tri primjerka. Sve vrijednosti su izražene kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (SD). Razlike unutar i između grupa analizirane su korištenjem jednosmjerne analize varijanse (ANOVA) praćene Tukeyjevim testom. Razlika se smatra statistički značajnom na str<0.05. all="" analyses="" were="" performed="" using="" origin="" 2019b="" software="" (originlab,="" northampton,="" ma,="">

4. Zaključak

U ovoj studiji frakcionisane su različite frakcije iz listova A.fragrans i analizirani su njihovi TPC i TFC. Pod izolacijom vođenom antioksidativnom aktivnošću, jedinjenja 1-7, uključujući četiri flavonoidna glikozida (1-4) i dva flavonoida (5 i 6), izolovana su i identificirana iz listova A. fragrans, što sugerira da je ova vrsta bogata u flavonoidnim jedinjenjima. Jedinjenja 2, 5 i 6 pokazala su značajnu antioksidativnu aktivnost u DPPH, ABTS čišćenju radikala i FRAP testovima. Nadalje, vidno su spriječili oštećenje oksidativnim stresom kroz smanjenje sadržaja ROS i apoptozu ćelija u H2O2-indukovanim HepG2 ćelijama. Prema ovim rezultatima, polifenolna jedinjenja, posebno flavonoidi, imaju značajan antioksidativni kapacitet zbog svojih fenolnih hidroksilnih grupa. Nadalje, spoj 2, koji posjeduje glikozidni dio i tri fenolne hidroksilne grupe, bio je glavna antioksidativna komponenta sa najvećim sadržajem iz listova A. fragrans. Jedinjenje 6 pokazalo je najbolju antioksidativnu aktivnost, što može biti veliki doprinos aktivnosti A.fragrans. Nadalje, ekstrakti A.fragrans mogu poslužiti kao izvodljiv prirodni izvor antioksidansa u obećavajućim zdravstvenim napitcima. Studija o spojevima iz listova A. fragrans sugerira da bi se oni mogli poslužiti kao antioksidativni zdravi čaj za liječenje oštećenja stanica uzrokovanih oksidativnim stresom i mogli bi poslužiti kao dodaci ishrani koji se primjenjuju u prehrambenoj i zdravstvenoj industriji.

Ovaj članak je preuzet iz Molecules 2021, 26, 3690. https://doi.org/10.3390/molecules26123690 https://www.mdpi.com/journal/molecules