Bivalentna živa atenuirana vakcina protiv virusa gripe štiti od nanesenih kliničkih izolata H1N2 i H3N2 kod svinja, 2. dio

2.5. Enzimski imunosorbentni test (ELISA)

Za stvaranje antigena za oblaganje, SD435 i SD467 su razmnoženi u MDCK ćelijama i pročišćeni ultracentrifugiranjem sa gradijentom saharoze. Do inaktivacije virusa došlo je dodavanjem 97 posto -propiolaktona virusu u koncentraciji od 1:1000 (v/v) (Thermo Fisher Scientific, AAB2319703). Ova mešavina je ljuljana na 4 ◦C preko noći, inkubirana na 37 ◦C dva sata da bi se olakšala hidroliza -propiolaktona, a zatim čuvana na -80 ◦C do upotrebe.

Antigeni i imunitet su neodvojivi. Antigen se odnosi na bilo koju supstancu koju imunološki sistem može prepoznati i izazvati imunološki odgovor, uključujući bakterije, viruse, tumorske ćelije, itd., dok se imunitet odnosi na sposobnost tijela da odgovori na ove antigene.

Odnos između antigena i imuniteta može se ilustrirati jednostavnom metaforom: Baš kao što vježbanje zahtijeva dovoljno treninga i dodataka ishrani, poboljšanje imuniteta također ovisi o ponovnom kontaktu s antigenima i odgovarajućim imunološkim stanicama i imunološkim molekulima. proizvesti. Kada imuni sistem naiđe na antigen, napada ga tako što proizvodi specifična antitijela, ili imunološke ćelije, zajedno sa memorijskim ćelijama kako bi nas zaštitila od ponovne infekcije.

Nauka je potvrdila da razvijanje dobrih životnih i prehrambenih navika može pomoći u poboljšanju imuniteta. Na primjer, održavanje čistoće, ne pušenje, umjereno vježbanje i navike spavanja mogu pomoći u smanjenju invazije antigena kao što su bakterije i virusi. Istovremeno, jedenje neke hrane bogate antioksidansima, vitaminima i mineralima, kao što su povrće i voće, integralne žitarice i riba, takođe može pomoći u poboljšanju imuniteta.

Ukratko, veza između antigena i imuniteta je vrlo bliska. Samo ponovnim kontaktom s antigenima i pravilnim životnim navikama imunitet se može kontinuirano poboljšavati, a razne bolesti mogu se spriječiti i liječiti. Stoga trebamo zadržati pozitivan stav i razvijati dobre životne navike kako bismo se zaštitili od bolesti. Vidi se da moramo poboljšati svoj imunitet. Cistanche nam može pomoći da poboljšamo svoj imunitet, jer je Cistanche bogat raznim antioksidativnim supstancama, kao što su vitamin C, karotenoidi, itd. Ovi sastojci mogu ukloniti slobodne radikale i smanjiti oksidativni stres, poboljšavajući otpornost imunološkog sistema.

Kliknite dodatak cistanche deserticola

Da bi se izmjerili swIAV-specifični IgG nivoi izazvani vakcinacijom i izazivanjem, serum svinja je uzet nakon prve (20. dan) i druge (30. dan) vakcinacije, te prije obdukcije (36. dan).

Pročišćeni virusi inaktivirani propiolaktonom SD435 (1 µg/mL) i SD467 (2 µg/mL), razrijeđeni u karbonatnom/bikarbonatnom puferu za oblaganje, (pH 9,6) primijenjeni su na Immulon-2 96-jažice na 1{{ 12}}0 µL/bunariću (Thermo Labsystems, Ottawa, ON, Kanada, 3655) i inkubirano preko noći na 4 ◦C. Nakon inkubacije preko noći, obložene ploče su isprane četiri puta sa TBST (0.1 M Tris, 0,17 M NaCl i 0,05 posto Tween 20), kojem su dodana četverostruka serijska razrjeđenja seruma ili BALF-a. ploča u duplikatu, nakon čega slijedi dvosatna inkubacija na sobnoj temperaturi. Serum je dodat u početnom razrjeđenju 1:10, a BALF je dodan nerazrijeđen. Uzorci prethodno definisanih pozitivnih kontrolnih seruma i odgovarajućih negativnih kontrola, seruma i BALF od nevakcinisanih svinja u prethodnoj studiji su rađeni na svakoj ploči [14].

Ploče su isprane četiri puta sa TBST, nakon čega su kozje anti-svinjski IgG (H plus L) afinitetno pročišćeno antitijelo označeno fosfatazom (1:5000) (Sigma Aldrich, SAB3700435) ili mišji anti-svinjski IgA (Serotec, MCA658) 1:300) razrijeđen u TBST je dodan i ostavljen da se inkubira na sobnoj temperaturi jedan sat. IgA ELISA testovi su razvijeni dodavanjem biotiniliranih kozjih anti-mišjih IgG (H plus L) antitijela (CALTAG, Burlingame, Kalifornija, SAD, M30015) i otopine streptavidin alkalne fosfataze (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) u trajanju od jednog sata. na sobnoj temperaturi.

Nakon inkubacije, i IgG i IgA ploče su isprane četiri puta sa TBST, na koji supstrat p-nitrofenil fosfata (PNPP) [10 mg/mL p-nitrofenil fosfat di(tris) soli kristalno (Sigma-Aldrich) , 1 posto dietanolamina (Sigma-Aldrich), 0,5 mg/mL MgCl2 i pH 9,8] (1 mg/mL) je dodan i inkubiran na sobnoj temperaturi dva sata.

Reakcija je zaustavljena dodavanjem 0.3 M etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA), a ploče su očitane na spektrofotometru na 405 nm uz referentnu vrijednost od 490 nm. Titar uzorka je definiran kao najveće razrjeđenje pri kojem je OD tog uzorka bio veći od definirane granice (srednja OD poznatog negativnog uzorka plus dva puta standardna devijacija).

2.6. Test neutralizacije virusa (VN).

MDCK ćelije (3,5 × 104) su postavljene u ploče sa 96-jažicama. Serum i BALF su termički inaktivirani na 56 ◦C tokom 30 min. Dvostruka razrjeđenja seruma i BALF-a dodana su na ploču u četiri primjerka, a 60 µL razrijeđenog seruma ili BALF-a je inkubirano sa jednakim volumenom SD435 ili SD456 koji sadrži 100 TCID50 na 37 ◦C tokom 1 sata. 100 µL smjese je zatim dodano MDCK ćelijama, a citopatogeni efekat (CPE) je dokumentovan 48 sati i 72 sata nakon infekcije (pi). Titar neutralizacijskih antitijela bio je najveće razrjeđenje svakog uzorka seruma koje je u potpunosti štitilo ćelije od CPE u najmanje 2 od 4 jažice.

2.7. Određivanje virusa

Nakon prikupljanja, uzorci pluća su odmah stavljeni na led i zamrznuti na -80 ◦C do obrade. Za obradu, svako plućno tkivo je izvagano i dodana je koncentracija MEM od 10 posto (w/v) sa dodatkom 1× antibiotik-antimikotik (Thermo Fisher Scientific, 15240-062). Plućno tkivo je homogenizovano u TissueLyser II (Qiagen, Hilden, Nemačka) na 30 Hz tokom 5 minuta, nakon čega je usledilo centrifugiranje na 5000 × g tokom 10 minuta na 4 ◦C. Homogenizirani supernatant je sakupljen i pohranjen na -80 ◦C do daljnje analize. Nazalni brisevi su vorteksirani 15 sekundi i centrifugirani na 1600 × g 25 minuta na 4 ◦C. Supernatanti su sakupljeni i pohranjeni na -80 ◦C do daljnje analize. Virusni titri su određeni TCID50 testom za pluća i kvantitativnim RT-PCR za nazalne briseve.

2.8. Ekstrakcija RNK i kvantitativni RT-PCR (qRT-PCR)

Da bi se odredili nivoi virusne RNK SD467 i SD435 u nazalnim brisevima nakon izazivanja, urađen je qRT-PCR. Standardna kriva je napravljena korišćenjem RNK ekstrahovane iz SD435 i SD467 poznatog titra. Ukratko, RNeasy Plus Mini Kit (Qiagen, Toronto, ON, Kanada, 74136) korišten je za ekstrakciju vRNA iz 200 µL ispiranja nosa. RNK je pretvorena u cDNK upotrebom univerzalnog prajmera za grip Uni12 i SuperScript III transkriptaze (Invitrogen, Burlington, ON, Kanada) [19]. qPCR je izveden u tri primjerka na StepOnePlusTM PCR sistemu u realnom vremenu (Applied Biosystems, Kalifornija, SAD) sa Power SYBR Green PCR Master Mixom (Applied Biosystems), 5 µL cDNA i 1 µL od 10 µM prajmera naprijed i nazad. PCR reakcije su vođene na temperaturi žarenja od 58 ◦C tokom 40 ciklusa. Sve sekvence qPCR prajmera dostupne su na zahtev.

2.9. Statistička analiza

Statistička analiza je izvršena korišćenjem softvera GraphPad Prism 8. Korišteni su Mann-Whitney i Kruskal-Wallis neparametarski testovi. Značajne razlike su označene sa * (p < 0.05), ** (p < 0.01), *** (p < 0,001) , ili **** (p < 0,0001). ns=nije značajno.

3. Rezultat

3.1. Vakcinacija bivalentnom vakcinom pružila je zaštitu od novih kliničkih izolata

Izmjerili smo fizički odgovor na izazivanje virusa, kao i replikaciju virusa u respiratornom traktu kako bismo procijenili zaštitu koju bivalentna vakcina pruža protiv ovih novih kliničkih izolata. Temperatura je bilježena dnevno pet dana nakon zaraze virusom u svim grupama. Svinje koje su lažno vakcinisane i izazvane sa SD435 (H3N2) (MEM/SD435) ili SD467 (H1N2) (MEM/SD467) pokazale su tipičan skok temperature prvog dana nakon virusnog izazova, sa srednjim temperaturama od 40,6 ◦◦ i 41,1. C, respektivno. Ovaj porast nije uočen u vakcinisanim grupama koje su bile izazvane sa SD435 (bivalentnim/SD435) ili SD467 (bivalentnim/SD467), koje su imale srednju temperaturu od 39,4 ◦C i 39,6 ◦C, respektivno. Dana 2-5 nakon izazivanja, i vakcinisane i nevakcinisane grupe imale su temperaturu oko 39 ◦C (Slika 2A).

Pet dana nakon izazivanja sve svinje su obducirane, pluća su u potpunosti uklonjena i analizirana da se kvantifikuje količina prisutnih lezija. Bivalent/SD435 grupa je pokazala minimalne ili nikakve lezije, sa medijanom od 0,65 posto ukupnih lezija pluća. Grupa MEM/SD435 imala je značajno veće lezije od svog vakcinisanog kolege, sa medijanom od 5,1 posto (p=0.0025) (Slika 2B). U grupi Bivalent/SD467, pet od sedam svinja imalo je male količine lezija (<2%), one had minor lesions (3.75%), and one outlier had high lesions (31%), with a group median of 1.9%. Compared with the vaccinated group, the MEM/SD467 group had a higher degree of lesions with a median of 4.55% (p = 0.0417) (Figure 1C).

U plućima, grupe Bivalent/SD435 i Bivalent/SD467 su imale niske titre virusa, sa prosjekom od 8,6 PFU/mL/gr i 3.0 PFU/mL/gr, respektivno. Suprotno tome, grupe MEM/SD435 i MEM/SD467 imale su veće količine virusa, sa prosjekom od 656,1 i 9118,2 PFU/mL/gr, respektivno (p=0.0025 za oba) (Slika 3A, B). Slični trendovi su uočeni i kod briseva nosa. U grupi Bivalent/SD435, nazalni titri su bili niski 1., 3. i 5. dana nakon izazivanja (dpc), dok su u grupi MEM/SD435 titri bili blago povišeni i povećavani kako su dani napredovali (ns) (Slika 3C). U grupi Bivalent/SD467, nazalni titri su također bili niski, u prosjeku ispod 5 PFU/mL 1. i 5. dana, i 10,0 PFU/mL 3. dana nakon izazivanja. Titri su bili veći u MEM/SD467 grupi svakog dana, u prosjeku 4123,6 PFU/mL/gr na 1dpc (p=0.0278), 77233,1 PFU/mL/gr (p=0.0009) na 3dpc i 65,2 PFU/mL/gr na 5dpc (ns) (Slika 3D).

Sve u svemu, ovi rezultati sugeriraju da je dvovalentna vakcina ponudila značajan stepen zaštite od izazovnih sojeva, smanjujući lezije pluća i replikaciju virusa povezane sa infekcijom sa ova dva izolata swIAV u plućima i nazalnim prolazima.

3.2. Bivalentna vakcina izaziva imuni odgovor na izazovne sojeve

Izmjerili smo odgovor antitijela u serumu i plućno-specifičan za oba soja izazvana nakon prime-boost vakcinacije bivalentnom vakcinom. Serum je sakupljen od svinja nakon prve vakcine (2. dan0) i nakon druge vakcine (30. dan). Virusi izazova SD435 (H3N2) i SD467 (H1N2) korišteni su kao hvatač antigeni za mjerenje odgovora virusa specifičnog IgG antitijela u serumu. Kod SD435 nije bilo značajne razlike između titara antitijela u MEM i bivalentnim vakcinisanim grupama nakon prve vakcinacije (20. dan). Međutim, titri antitijela na SD467 su bili značajno viši u vakcinisanoj grupi 20. dana (p=0.0321). Nakon druge vakcine (31. dan), titri antitela su bili značajno veći u grupi koja je vakcinisana i protiv SD435 i protiv SD467 nego u grupama koje su primale MEM lažnu vakcinu (p < 0,0001) (Slika 4A, B). Konkretno, protiv antigena hvatanja SD435, titri seruma IgG u grupi koja je bila lažno vakcinisana MEM iznosili su u prosjeku 52 20. i 30. dana, dok su bili 311 (20. dan) i 4852 (30. dan) u grupi sa bivalentnom vakcinom (Slika 3A). Protiv SD467, titri seruma IgG u lažno vakcinisanoj MEM grupi bili su 39 (20. dan) i 38 (30. dan), dok su u grupi sa bivalentnom vakcinom bili 219 (20. dan) i 3509 (30. dan) (Slika 3B).

Slični trendovi su uočeni kada su u serumu mjereni titri neutralizirajućih antitijela protiv dva izazovna soja. Opet, nije bilo značajne razlike između titara neutralizirajućih antitijela u MEM i bivalentno vakcinisanim grupama protiv SD435 nakon jedne doze vakcine (2. dan0) ​​(Slika 5A, B). Protiv SD467, nivoi antitijela su bili značajno viši 2. dana0, nakon jedne vakcine (p=0.0069). Protiv oba virusa došlo je do povećanja titra antitijela u grupama bivalentne vakcine nakon druge doze 30. dana) (p < 0,0001). Titri u grupi koja je lažno vakcinisana sa MEM-om bili su izazvani sa SD435 u prosjeku 1 (20. dan) i 3. (30. dan), dok su titri u bivalentnoj grupi bili u prosjeku 10 (da20) i 77 (30. dan) (Slika 5A). Titri u grupi koja je bila lažno vakcinisana sa MEM-om koja je bila izazvana SD467 iznosila je u proseku 0 (20. dan) i 2 (30. dan), dok su titri u grupi sa bivalentnom vakcinom bili u proseku 10 (20. dan) i 54 (30. dan) (Slika 5B).

Nakon obdukcije (36. dan), BALF je sakupljen od svake svinje kako bi se izmjerili nivoi antitijela u plućima. Virusi izazova SD435 i SD467 korišteni su kao antigeni za hvatanje za mjerenje virusno-specifičnog IgA i IgG odgovora. U odnosu na SD435, nivoi IgA u grupama MEM lažnih vakcina su u prosjeku bili 17, dok su titri u grupi sa bivalentnom vakcinom bili značajno viši, u prosjeku 95 (p=0.0014) (Slika 6A). Za SD467, nivoi IgA su bili u prosjeku 18 u grupi sa lažnom vakcinom i bili su značajno viši na 158 u grupi sa bivalentnom vakcinom (p=0.0185) (Slika 6B). Što se tiče IgG, titri protiv SD435 u grupi koja je primala MEM lažnu vakcinu su bili u prosjeku 3, dok su u bivalentnoj grupi bili značajno viši na prosjeku od 138 (p < 0,0001) (Slika 6C). IgG antitela protiv SD467 u proseku su iznosila 16 u grupama sa MEM lažnom vakcinom, dok su u grupi sa bivalentnom vakcinom bila značajno viša, u proseku 259 (p < 0,0001) (Slika 6D).

Što se tiče neutralizirajućih antitijela u BALF-u, trendovi su bili slični onima uočenim u IgA i IgG ELISA testovima. Protiv SD435, titri neutralizirajućih antitijela su bili neotkriveni u grupama sa MEM lažnim vakcinama, a u prosjeku su bili značajno viši na 13,2 u grupi sa bivalentnom vakcinom (p < 0.0001) (Slika 7A). Slično, titri antitela specifični za SD467 bili su u proseku 0,7 u grupama sa MEM lažnim vakcinama i bili su značajno viši u grupi sa bivalentnom vakcinom sa prosečnim titrom od 10,9 (p=0.0002) (Slika 7B). Sveukupno, ovi podaci pokazuju da dvije doze dvovalentne vakcine izazivaju snažan sistemski humoralni odgovor, kao i lokalni imuni odgovor u plućima protiv ova dva nehomologna klinička izolata.

4. Diskusija

Prethodno smo pokazali da su virusi zavisni od elastaze SD191-R342V i SD69.K345V potpuno atenuirani i nevirulentni kod svinja i da su dvije vakcinacije s ovim bivalentnim LAlV-om izazvale snažan imunološki odgovor i pružile zaštitu od infekcije homolognim SD191 ( H1N2) i SD69 (H3N2) sojevi [14). U ovoj trenutnoj studiji, željeli smo testirati da li bi se dvovalentna vakcina izdržala in vivo protiv novijih kliničkih izolata koji su podvrgnuti antigenskom driftu. SD467, kao i SD191, je član antigenske grupe Ho-3 koja se pojavila u Kanadi, ali je zadobila brojne mutacije na ključnim antigenskim mjestima (12,15). Isto tako, SD435 predstavlja klaster H3N2 IV-E koji je prisutan u zapadnoj Kanadi i posjeduje višestruke supstitucije aminokiselina na ključnim H3 antigenskim mjestima od onih prisutnih u SD69 (17).

Bivalentni LAlV značajno je smanjio lezije kod vakcinisanih svinja kada je bio izazvan sa SD435 (H3N2) ili SD467 (H1N2) i sprečio skok temperature koji je primećen kod MEM (lažno) vakcinisanih grupa jedan dan nakon izazivanja. To je također dovelo do smanjenja replikacije virusa oba soja u plućima i smanjenja SD467 (H1N2) u nazalnim brisevima. Zanimljivo je da su nazalni titri SD435 (H3N2) bili niski u vakcinisanim i nevakcinisanim grupama, uprkos identičnim metodama uzorkovanja, što sugeriše da ovaj soj možda nema toliko tropizma za nazalne prolaze. Što se tiče vanjske svinje u Grupi koja je imala visok rezultat lezije pluća od 31, mjerenja temperature nisu pokazala porast kod izazova, a titri virusa u plućima bili su ispod 10 PFU/g/mL. Nivoi antitela u serumu i lokalni odgovor pluća takođe su bili isti kao i kod svih ostalih vakcinisanih svinja. To nas navodi na spekulaciju da lezije nisu bile povezane s gripom. Seroanaliza je otkrila da je jak imuni odgovor bio podignut protiv oba soja nakon dvije doze vakcine, a isto se pokazalo tačnim u pogledu lokalne analize u plućima. Površinski glikoproteini usmjereni na antitijela su najvažniji u zaštiti od IAV infekcije, tako da visok nivo neutralizirajućih antitijela, kao i lgG i lgA pronađen kod vakcinisanih svinja podržava zaštitu uočenu in vivo [20].

Vakcine sa cijelim inaktiviranim virusom (WIV) su najčešće dostupne za svinje koje su radicionalno formulirane s adjuvansom, smatraju se sigurnim pristupom jer ne postoji rizik od ponovnog razvrstavanja s cirkulirajućim sojevima. Međutim, oni pružaju ograničenu efikasnost protiv neusklađenih sojeva i pokazalo se da dovode do pojačanog respiratornog poremećaja povezanog s vakcinom (VAERD) kada se koriste protiv neusklađenih sojeva. Njihova efikasnost takođe se smanjuje u prisustvu majčinih antitela (MDA) [4]. Oni koji su komercijalno dostupni u Sjevernoj Americi uključuju FluSure XP®, koji je dostupan kao tetravalentna formulacija u SAD-u s klasterima H1N1, H1N2 i H3N2 IV-A i IV-B [21]. Starija formulacija Flusure XP® dostupna je u Kanadi sa dva soja H1N1 i jednim sojem H1N2, izolovanim između 2000. i 2005. [22]. U obje zemlje Sjeverne Amerike dostupna je FluSure® Pandemic, monovalentna vakcina sastavljena od soja H1N1pdm09, kao i Pneumostar SIV Complete (Elanco, Greensboro, North Carolina, US Inc.), koja sadrži H1N1, H1N2 i H3N2, i Pneumostar SIV, sa podtipovima H1N1 i H3N2 (GOC, USDA) [23,24]. Ove komercijalno dostupne vakcine čine oko 50 posto vakcina protiv svinjske gripe u Sjevernoj Americi, a ostalih 50 posto vakcina su autogene vakcine [4].

Što se tiče platformi alternativnih vakcina, replikonska vakcina dobijena od rekombinantnog alfavirusa licencirana je u SAD [4]. Ova platforma za vakcinu koristi alfavirus sa izmijenjenim genomom, gdje su virusni strukturni geni zamijenjeni genom po izboru, što čini replikaciju alfavirusa defektnom. Ova RNK se samoreplicira, tako da platforma vakcine dovodi do visoke ekspresije gena od interesa, a za gripu su i HA i nukleoprotein (NP) testirani kao antigeni [25]. Istraživanja su pokazala da korištenje ove platforme štiti od antigenski podudarnih i neusklađenih izazova, kao i NP-nepodudarnih sojeva, iako platforma nije bila u stanju zaštititi od prisustva MDA.

Prvi LAIV za svinjsku gripu odobrilo je Ministarstvo poljoprivrede SAD-a (USDA) 2017. Ingelvac Provenza™ je bivalentna vakcina protiv H3N2 i H1N1, sa HA i NA iz dva soja izolirana u SAD-u, izraženom na kičmi TX98, atenuiran kroz skraćenje nestrukturnog proteina (NS1) [14,26]. LAIV oponašaju prirodnu infekciju i dovode do povećanog imuniteta sluzokože u gornjim disajnim putevima kada se daju intranazalno. Tamo gdje inaktivirane vakcine uglavnom dovode do proizvodnje sistemskih IgG antitijela, žive atenuirane vakcine mogu izazvati mukozni IgA u respiratornom traktu, kao i pojačan ćelijski posredovani odgovor zbog izlaganja imunološkog sistema internim proteinima gripe, koji sadrže više T. epitopi ćelija [27]. To dovodi do bolje zaštite od neusklađenih sojeva.

Pokazali su delimičnu zaštitu u prisustvu MDA. Cjelokupna IgG antitijela su zastupljenija u donjim respiratornim putevima, a polimerna IgA antitijela su dominantna u gornjim respiratornim putevima svinja, najčešće kao dimeri [28]. Ova antitijela se proizvode lokalno i transportuju se kroz sloj epitelnih stanica gdje ostaju u sluzokoži, uz pomoć sekretorne komponente koja se opire razgradnji proteazama [28,29]. IgA antitela su prva linija odbrane adaptivnog imunog sistema od nadolazećih patogena, radeći na blokiranju vezivanja virusa za receptore sijalične kiseline [30]. Polimerna IgA antitijela su šire unakrsno reaktivna od monomernih IgG antitijela, potencijalno zbog multivalentnog vezivanja [31]. Studije su također pokazale da ova antitijela mogu spriječiti oslobađanje novoformiranog IAV iz inficiranih stanica mnogo efikasnije od IgG ili monomernog IgA, koji se može naći u svinjskom serumu, što sugerira da je polimerna struktura IgA korisna za umrežavanje virusnog potomstva. na HA eksprimiran na površini inficirane ćelije [31–33]. Lokalni odgovor IgA antitijela je stoga sastavni dio zaštite od infekcije IAV-om i sugerirano je da predstavlja korelaciju zaštite kod ljudi [34].

Međutim, rizik kod LAIV-a je potencijal za reasortaciju sa cirkulirajućim sojevima. Filogenetska studija u SAD-u otkrila je nove sojeve u cirkulaciji koji su se ponovo spojili sa sojevima vakcine uključenim u Ingelvac Provenza™ [26]. Platforma LAIV zavisna od elastaze smanjuje ovaj rizik, jer je protein elastaze vrlo oskudan u respiratornom traktu svinja, tako da je replikacija vakcinalnih virusa vrlo ograničena, kao i vremenski okvir za reasortaciju. Buduće studije će uključiti procjenu rizika preraspoređivanja ove bivalentne vakcine, kao i kako se ova vakcina drži u prisustvu MDA. Također bi bilo zanimljivo testirati ćelijski posredovani odgovor ove vakcine, jer je to jedna od glavnih prednosti LAIV-a. Zaključno, bivalentni LAIV ovisan o elastazi proširio je zaštitu na nove kliničke izolate pronađene u zapadnoj Kanadi i popunio bi neke praznine na tržištu cjepiva protiv svinjske gripe.

Doprinosi autora:

Konceptualizacija, YZ; metodologija, YZ i LA; formalna analiza, LA; istraga, LA i UB-C.; resursi, SD; pisanje—priprema originalnog nacrta, LA; pisanje—pregled i uređivanje, YZ, UB-C. i SD; nadzor, YZ; pribavljanje sredstava, YZ Svi autori su pročitali i pristali na objavljenu verziju rukopisa.

finansiranje:

Ovo istraživanje je finansirao Fond za razvoj poljoprivrede (ADF), Ministarstvo poljoprivrede Saskatchewan-a. LA je djelimično podržan stipendijom za vakcinologiju i imunoterapeutiku (V&I) Škole za javno zdravlje Univerziteta Saskatchewan. VIDO prima operativna sredstva od Vlade Saskatchewan-a kroz Innovation Saskatchewan i Ministarstvo poljoprivrede i od Kanadske fondacije za inovacije kroz glavne naučne inicijative za svoj CL3 objekat (InterVac).

Izjava institucionalnog odbora za reviziju:

Nije primjenjivo.

Izjava o dostupnosti podataka:

Svi podaci i analize ove studije prikazani su u ovom članku.

Priznanja:

Zahvaljujemo se VIDO-ovim veterinarima i stočarskim tehničarima za obavljanje svih poslova na životinjama za naše pokuse na životinjama. Ovo djelo je objavljeno uz dozvolu direktora VIDO-a kao rukopisna serija #1005.

Sukobi interesa:

Autori izjavljuju da nema sukoba interesa.

Reference

Webster, RG Virus gripe: Prijenos između vrsta i značaj za pojavu sljedeće ljudske pandemije. Arch. Virol. Suppl. 1997, 13, 105–113. [PubMed]

2. Li, Y.; Robertson, I. Epidemiologija svinjske gripe. Anim. Dis. 2021, 1, 21. [CrossRef] [PubMed]

3. Donovan, T. Uloga gripe na rastuće performanse svinja; Univerzitet u Minesoti: Minneapolis, MN, SAD, 2005.

4. Gracia, JCM; Pearce, DS; Mašić, A.; Balasch, M. Virus gripa A kod svinja: epidemiologija, izazovi i strategije vakcinacije. Front. Vet.-Sci. 2020, 7, 647. [CrossRef] [PubMed]

5. Ma, W. Virus svinjske gripe: Trenutni status i izazov. Virus Res. 2020, 288, 198118. [CrossRef]

6. Suzuki, Y.; Ito, T.; Suzuki, T.; Holland, RE; Chambers, TM; Kiso, M.; Ishida, H.; Kawaoka, Y. Sialic Acid Species as a Determinant of the Host Range of Influenza A Viruss. J. Virol. 2000, 74, 11825–11831. [CrossRef]

7. Sun, H.; Xiao, Y.; Liu, J.; Wang, D.; Li, F.; Wang, C.; Li, C.; Zhu, J.; Song, J.; Sun, H.; et al. Preovlađujući euroazijski virus svinjske gripe H1N1 sličan ptičjem virusu s pandemijskim virusnim genima iz 2009. koji olakšavaju infekciju ljudi. Proc. Natl. Akad. Sci. USA 2020, 117, 17204–17210. [CrossRef]

8. Henritzi, D.; Petrić, PP; Lewis, NS; Graaf, A.; Pessia, A.; Starick, E.; Breithaupt, A.; Strebelow, G.; Luttermann, C.; Parker, LMK; et al. Nadzor nad evropskim populacijama domaćih svinja identificira novi rezervoar potencijalno zoonotskih virusa svinjske gripe A. Cell Host Microbe 2020, 28, 614–627.e6. [CrossRef]

9. Vincent, AL; Ma, W.; Lager, KM; Janke, BiH; Richt, JA Virusi svinjske gripe: Sjevernoamerička perspektiva. Adv. Virus Res. 2008, 72, 127–154.

10. Rajao, DS; Anderson, TK; Kitikoon, P.; Stratton, J.; Lewis, NS; Vincent, AL Antigenska i genetska evolucija suvremenih virusa svinjske gripe H1 u Sjedinjenim Državama. Virology 2018, 518, 45–54. [CrossRef]

11. Mena, I.; I Nelson, M.; Quezada-Monroy, F.; Dutta, J.; Cortes-Fernández, R.; Lara-Puente, JH; Castro-Peralta, F.; Cunha, LF; Trovão, NS; Lozano-Dubernard, B.; et al. Poreklo pandemije gripa H1N1 kod svinja u Meksiku 2009. Elife 2016, 5, e16777. [CrossRef]

12. Nelson, MI; Culhane, MR; Trovão, NS; Patnayak, DP; Halpin, RA; Lin, X.; Shilts, MH; Das, SR; Detmer, SE Pojava i evolucija virusa gripe A (H1) kod svinja u Kanadi i Sjedinjenim Državama. J. Gen. Virol. 2017, 98, 2663–2675. [CrossRef] [PubMed]

13. Chauhan, RP; Gordon, ML Sistematski pregled analize prevalencije i cirkulacije virusa gripa u populaciji svinja širom svijeta. Patogeni 2020, 9, 355. [CrossRef]

14. Landreth, S.; Detmer, S.; Gerdts, V.; Zhou, Y. Bivalentna živa atenuirana vakcina protiv virusa gripe štiti od virusne infekcije H1N2 i H3N2 kod svinja. Vet. Microbiol. 2020, 253, 108968. [CrossRef] [PubMed]

15. McCormick, K.; Jiang, Z.; Zhu, L.; Lawson, SR; Langenhorst, R.; Ransburgh, R.; Brunick, C.; Tracy, MC; Hurtig, HR; Mabee, LM; et al. Konstrukcija i evaluacija imunogenosti rekombinantnih virusa influence A koji sadrže himerne hemaglutininske gene izvedene iz genetski divergentnih virusa podtipa influence A H1N1. PLOS ONE 2015, 10, e0127649. [CrossRef] [PubMed]

For more information:1950477648nn@gmail.com